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水稻根向重力性调控蛋白OsGLS1的功能验证

水稻根向重力性调控蛋白OsGLS1的功能验证

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作者：周志鹏浙江大学

学位级别：硕士

植物根系对植物锚定、土壤水分和养分的吸收以及正常生理过程都很重要。植物根向重力性是决定根系在土壤中空间分布的主要因素之一。因此,深入研究植物根系向重力性的分子机理及生化网络对指导根系遗传改良具有理论和实践意义。本研究... 详细信息

植物根系对植物锚定、土壤水分和养分的吸收以及正常生理过程都很重要。植物根向重力性是决定根系在土壤中空间分布的主要因素之一。因此,深入研究植物根系向重力性的分子机理及生化网络对指导根系遗传改良具有理论和实践意义。本研究基于水稻根系向重力性缺失突变体glsl,对其蛋白进行功能研究。研究发现,GLS1蛋白在体外具有泛素E3连接酶活性,且仅含ring finger结构域的氨基酸序列即具有连接酶活性。系统进化分析表明,OsGLS1在拟南芥中的同源基因为WAV3。而在控制根系向重力性的WAV3家族中,拟南芥中有三个成员,而在水稻中仅含有GLS1一个成员。进一步将水稻GLS1CDS导入拟南芥wav3突变体发现,转基因T2代阳性苗在一定程度上能回复wav3表型。这表明,GLS1及WAV3在功能上具有一定的相似性。

关键词：水稻向重力性缺失 ring finger结构域泛素E3连接酶

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E3泛素连接酶环指蛋白146调控非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制

E3泛素连接酶环指蛋白146调控非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制

引用

作者：卫聪慧中国医科大学

学位级别：硕士

目的:目前,恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的一大类疾病,而肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症之一。从发病人数看,肺癌仍居我国恶性肿瘤发病首位,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80%。因此对肺癌发生发展、转移机制及作... 详细信息

目的:目前,恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的一大类疾病,而肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症之一。从发病人数看,肺癌仍居我国恶性肿瘤发病首位,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80%。因此对肺癌发生发展、转移机制及作用靶点的研究,对肺癌进一步的治疗及预防有着重要的指导意义。RNF146作为一种E3泛素连接酶,其基因位于人类染色体6q22,33上。由RNF146基因编码的蛋白质是一种进化上保守的蛋白质,广泛表达于胞质。它含有WWE和N末端ring finger结构域。研究表明,RNF146作为PARsylation(聚ADP核糖基化作用)调控下的E3泛素连接酶,调节tankyrase(PARP5)依赖的Axin的降解,从而正向调控Wnt信号通路。前期研究结果表明,在临床非小细胞肺癌标本和细胞系中RNF146的表达明显上调,并且其表达水平与患者的临床病理因素有关;在细胞系中RNF146蛋白的表达与Axin的表达呈负相关,与β-catenin的表达呈正相关;过表达RNF146可以促进细胞的增殖、侵袭、迁移能力。而RNF146调控Wnt信号通路的分子机制尚未明确,我们的研究旨在探讨RNF146是否通过WWE或ring finger结构域调节β-catenin的表达,调控Wnt信号通路,从而促进肺癌细胞的增殖、迁移能力。研究方法:1.A549细胞株中进行质粒(pCDNA4-TO、RNF146△ring、RNF146△WWE、siRNA-resistant full-length RNF146)瞬时转染。*** Blot检测质粒转染情况及β-catenin的表达情况。3.通过细胞划痕实验、transwell迁移实验及MTT试验检测质粒转染后对A549株细胞增殖、迁移能力的影响。结果:1.A549细胞株质粒转染后β-catenin的表达pCDNA4-TO组低于RNF146△ring组、RNF146△WWE组、siRNA-resistant full-length RNF146组,且RNF146△WWE组的表达略高于RNF146△ring组,组间差异具有统计学意义(P﹤0.05)。2.质粒转染RNF146△ring组、RNF146△WWE组、siRNA-resistant full-length RNF146组均可以促进细胞增殖、迁移能力,siRNA-resistant full-length RNF146组促进作用最显著,且组间差异具有统计学意义(P﹤0.05),而RNF146△WWE组作用较RNF146△ring组促进作用更明显,两者之间差异无统计学意义。结论:***146包含的WWE和ring finger结构域在调节β-catenin的表达过程中均发挥作用,从而进一步调节Wnt信号通路,促进肺癌细胞的增殖、迁移能力。***146的WWE和ring finger结构域联合作用,促进肺癌细胞的增殖、迁移能力;ring finger结构域在调节肺癌细胞系增殖、迁移过程中可能发挥更主要的作用。

关键词：非小细胞肺癌 RNF146 WWE结构域 ring finger结构域

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