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孤儿核受体rev-erbα在小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

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中国组织工程研究 2020年第31期24卷 4921-4926页

作者：张霜徐晓梅曾阳袁小平林富伟西南医科大学附属口腔医院正畸科四川省泸州市646000 西南医科大学口颌面修复重建与再生实验室四川省泸州市646000

背景:孤儿核受体rev-erbα已被证明在骨代谢过程中发挥着重要作用,但其在调节骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的具体机制尚不明确。目的:研究孤儿核受体rev-erbα是否参与小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调节。方法:以全骨髓贴壁法... 详细信息

背景:孤儿核受体rev-erbα已被证明在骨代谢过程中发挥着重要作用,但其在调节骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的具体机制尚不明确。目的:研究孤儿核受体rev-erbα是否参与小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调节。方法:以全骨髓贴壁法进行小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养,构建携带rev-erbα基因的慢病毒载体并转染至体外培养的第3代骨髓间充质干细胞,转染后48 h采用Real Time PCR法检测rev-erbα基因水平的表达。实验分为3组:实验组骨髓间充质干细胞转染过表达rev-erbα基因及EGFP基因的慢病毒载体,阳性对照组骨髓间充质干细胞转染含EGFP基因的空病毒载体,设立不含病毒原液的阴性对照组,分别进行成骨诱导并在第0,7,14天采用Real Time PCR法检测成骨分化相关指标碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素的表达变化。结果与结论:①携带rev-erbα基因的慢病毒成功转染到骨髓间充质干细胞中并稳定表达;②随着成骨诱导时间延长,成骨相关指标碱性磷酸酶、骨桥蛋白表达增加,但组间差异无显著性意义,骨钙素表达增加,但实验组明显低于阳性对照组和对照组(Prev-erbα转染后骨髓间充质干细胞成骨分化能力降低,成骨晚期标志物骨钙素的表达受抑制,说明rev-erbα在骨髓间充质干细胞成骨分化的晚期阶段有重要作用。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨分化慢病毒 rev-erbα 核受体

核受体rev-erbα整合生物钟与能量代谢

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遗传 2023年第2期45卷 99-114页

作者：冒姝羽赵昌睿刘畅中国药科大学生命科学与技术学院南京211198 重庆中国药科大学创新研究院重庆401135

哺乳动物的各项生理活动以24 h为周期呈现节律性变化。稳定的昼夜节律由生物钟系统所精细调控,而昼夜节律的紊乱会导致代谢性疾病的发生。核受体超家族成员rev-erbα是哺乳动物生物钟的重要组成部分,参与代谢、炎症、免疫和昼夜节律等... 详细信息

哺乳动物的各项生理活动以24 h为周期呈现节律性变化。稳定的昼夜节律由生物钟系统所精细调控,而昼夜节律的紊乱会导致代谢性疾病的发生。核受体超家族成员rev-erbα是哺乳动物生物钟的重要组成部分,参与代谢、炎症、免疫和昼夜节律等多种生理过程的调节,是代谢性疾病、炎症性疾病和癌症的潜在治疗靶点。近年来发现了一系列新的rev-erbα配体,其中大部分在疾病治疗方面具有潜在的应用价值。本文主要介绍核受体rev-erbα在能量代谢以及炎症反应中的调节作用,以期为代谢综合征及相关疾病的治疗提供新的策略和参考。

关键词： rev-erbα 代谢炎症 rev-erbα配体

时钟基因rev-erbα在疾病中作用的研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2022年第7期36卷 544-551页

作者：盛明月陈刚领中国药科大学中药学院江苏南京211198

rev-erbα是生物钟系统的时钟基因,广泛表达于生物体各组织器官。作为核受体超家族中的成员,rev-erbα可被GSK4112,SR9009,SR9011和SR8278等配体调控并发挥转录抑制作用。研究表明,rev-erbα可通过调控脂质代谢、抑制炎症反应和氧化应... 详细信息

rev-erbα是生物钟系统的时钟基因,广泛表达于生物体各组织器官。作为核受体超家族中的成员,rev-erbα可被GSK4112,SR9009,SR9011和SR8278等配体调控并发挥转录抑制作用。研究表明,rev-erbα可通过调控脂质代谢、抑制炎症反应和氧化应激及增强β淀粉样蛋白的吞噬在心脑血管疾病和神经退行性疾病的发生发展中发挥重要的作用。此外,rev-erbα可通过抑制自噬和细胞增殖发挥抗癌作用。rev-erbα的配体被广泛应用于多种疾病的防治研究中。本文对rev-erbα及其配体在心脑血管疾病、神经退行性疾病和癌症等疾病中的作用进行综述,同时对rev-erbα作为药物靶标的可行性作简要探讨。

关键词：昼夜节律时钟基因 rev-erbα 心脑血管疾病炎症

时钟基因rev-erbα、RORα在心房颤动患者中的表达及临床意义

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临床心血管病杂志 2023年第4期39卷 290-296页

作者：徐乐谭猛郭倩戴晓燕鲍正宇杨轶袁晓晨扬州大学附属医院心血管内科江苏扬州225000 扬州大学医学院江苏省苏北人民医院心血管内科

目的:研究时钟基因rev-erbα、RORα在心房颤动(atrial fibrillation, AF)患者中的表达并探索其基于炎症调控途径参与AF发生发展的可能机制及相关临床价值。方法:选取2022年4—10月在扬州大学附属医院及江苏省苏北人民医院住院诊断为AF... 详细信息

目的:研究时钟基因rev-erbα、RORα在心房颤动(atrial fibrillation, AF)患者中的表达并探索其基于炎症调控途径参与AF发生发展的可能机制及相关临床价值。方法:选取2022年4—10月在扬州大学附属医院及江苏省苏北人民医院住院诊断为AF的患者88例,其中阵发性心房颤动(paroxysmal atrial fibrillation, PaAF)组37例,持续性心房颤动(persistent atrial fibrillation, PeAF)组51例,另选择同期体检中心体检的健康者43例作为对照组。采用qRT-PCR法检测外周血时钟基因rev-erbα、RORα mRNA的表达,采用ELISA法检测血浆中炎症小体NLRP3蛋白的表达。比较3组患者的一般资料和实验室生化指标,采用Spearman进行相关性分析,有序多分类logistic回归分析AF的影响因素,受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估rev-erbα、RORα、NLRP3、左房直径(left atrial diameter, LAD)4个指标对AF的辅助诊断效能。结果:rev-erbα在PaAF组和PeAF组外周血中水平明显低于对照组(Prev-erbα、RORα与NLRP3及LAD在AF患者中呈负相关,NLRP3与LAD呈正相关;有序多分类logistic回归分析rev-erbα、NLRP3、LAD为AF发生发展的影响因素,ROC曲线分析结果示rev-erbα、RORα、NLRP3、LAD对AF的发生均具有一定的预测价值。结论:在AF患者外周血中rev-erbα、RORα表达降低,NLRP3表达增高,rev-erbα、RORα可能通过炎症及心房重构机制参与AF的发生发展并对AF的发生具有预测价值。

关键词：心房颤动昼夜节律 rev-erbα RORα NLRP3 左房直径

小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的核受体rev-erbα及Rorα

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中国组织工程研究 2018年第17期22卷 2625-2630页

作者：林富伟徐晓梅崔琰谢乙加赵青西南医科大学附属口腔医院正畸科口颌面修复重建与再生实验室四川省泸州市646000 西南医科大学公共卫生学院四川省泸州市646000 口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床研究中心四川大学华西口腔医院正畸科四川省成都市610041

背景:孤儿核受体rev-erbα及Rorα已经被广泛证实与糖代谢、脂肪代谢等密切相关,但与骨代谢的关系尚不明确。目的:探讨孤儿核受体rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6小鼠... 详细信息

背景:孤儿核受体rev-erbα及Rorα已经被广泛证实与糖代谢、脂肪代谢等密切相关,但与骨代谢的关系尚不明确。目的:探讨孤儿核受体rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察和成脂、成骨诱导分化,采用油红O染色,茜素红染色对其分化能力进行鉴定。在骨髓间充质干细胞成骨诱导分化第0,7,14天,采用Real Time PCR及Western Blot分别检测孤儿核受体rev-erbα及Rorα的m RNA及蛋白表达变化。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞形态以梭形为主,呈典型的漩涡样生长。油红O染色及茜素红染色呈阳性;(2)在成骨诱导的第0,7,14天,rev-erbα的m RNA及蛋白表达均呈下降趋势,而Rorα的m RNA及蛋白表达均呈上升趋势,提示rev-erbα及Rorα在骨髓间充质干细胞成骨诱导过程中可能发挥了一定的作用。

关键词：骨髓间质干细胞孤儿核受体类细胞分化成骨细胞组织工程干细胞骨髓间充质干细胞成骨分化核受体 rev-erbα Rorα

rev-erbα通过自噬调控酒精性脂肪肝脂肪变性的研究

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Rev-erbα通过自噬调控酒精性脂肪肝脂肪变性的研究

作者：刘庆雪安徽医科大学

学位级别：硕士

酒精性肝病（Alcoholic liver disease,ALD）是一种因长期过量饮酒引起的肝脏系统性疾病。ALD是一个复杂的病理过程,其包括酒精性脂肪肝,酒精性肝炎,酒精性肝纤维化,酒精性肝硬化,最终甚至发展成为肝癌。酒精性脂肪肝（Alcoholic fattv ... 详细信息

酒精性肝病（Alcoholic liver disease,ALD）是一种因长期过量饮酒引起的肝脏系统性疾病。ALD是一个复杂的病理过程,其包括酒精性脂肪肝,酒精性肝炎,酒精性肝纤维化,酒精性肝硬化,最终甚至发展成为肝癌。酒精性脂肪肝（Alcoholic fattv liver disease,AFLD）被认为是ALD病理发展的最初阶段,其主要是以脂肪堆积,少量炎症细胞浸润同时伴有轻微的肝细胞损伤为特征的肝脏疾病。脂肪变性若得不到有效控制,可导致肝细胞坏死,肝细胞功能受到破坏,进一步的破坏肝脏功能使病情恶化。因此,研究酒精引起脂质代谢紊乱的调节机制对AFLD的治疗及预防至关重要。研究表明rev-erbα参与了多种与脂质代谢相关的疾病过程,但rev-erbα是否参与AFLD病程中的脂质代谢尚未见报道。本研究旨在探讨rev-erbα是否可以通过调控脂肪变性参与AFLD的发生发展过程,并探讨rev-erbα调控脂肪变性可能的分子机制。研究内容主要概况如下:***-erbα在EtOH-fed小鼠肝脏和乙醇诱导的L02细胞中的表达体内采用Binge模型进行AFLD的造模,H＆E、油红O染色结果表明EtOH-fed组小鼠肝组织中脂肪空泡较多,脂滴沉积明显。EtOH-fed组小鼠血清中甘油三脂（Triglyceride,TG）,总胆固醇（Total cholesterol,T-CHO）和丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）的水平明显升高。体外采用150 mmol/L的EtOH刺激L02细胞48 h,油红O染色、细胞内TG含量检测、RT-PCR以及Western blot检测结果鉴定乙醇刺激可引起细胞内脂质代谢紊乱。结果显示乙醇刺激后,细胞内的脂滴沉积明显,甘油三酯水平升高,Pparα的表达降低,Srebp1c的表达升高。比较rev-erbα和rev-erbβ在EtOH-fed小鼠肝脏和乙醇诱导的L02细胞中的表达发现,CD-fed组小鼠肝组织和Control组L02细胞中rev-erbα mRNA的表达明显高于rev-erbβ,EtOH-fed组小鼠和EtOH刺激组L02细胞中rev-erbα mRNA的表达显著升高,而rev-erbβ的表达却没有明显的变化。通过免疫组化,免疫荧光,RT-PCR以及Western blot结果表明rev-erbα在EtOH-fed小鼠肝组织和乙醇刺激的L02细胞中的表达明显升高,且只在细胞核中的表达升高而在细胞质中的表达没有明显变化。体外使用rev-erbα激动剂GSK4112刺激L02细胞24 h,细胞内脂滴沉积明显增加,甘油三酯水平上升,同时Pparα的表达降低,Srebplc的表达升高。***-erbα对EtOH-fed小鼠肝组织和乙醇诱导的L02细胞中脂质代谢的影响体内,我们采用酒精性液体饲料喂养小鼠,造模期间小鼠尾静脉注射rev-erbα拮抗剂SR8278（10μM,3天）,H＆E,油红O染色以及免疫组化结果显示,与EtOH-fed小鼠相比,给予SR8278拮抗剂后,小鼠肝组织脂肪空泡明显减少,脂滴沉积得到缓解,肝损伤明显降低,并且给与SR8278拮抗剂后,肝组织中Pparα和Srebp1c蛋白的异常表达得到缓解。体外,我们采用rev-erbα ShRNA建立L02细胞内rev-erbα的沉默模型,同时用乙醇刺激L02细胞48 h,油红O染色,TG的含量检测,RT-PCR以及Western blot结果表明,rev-erbα沉默后,细胞内脂滴沉积得到缓解。与EtOH+Control ShRNA组相比,EtOH+rev-erbα ShRNA组细胞内TG含量与脂滴沉积明显降低,同时Pparα和Srebp1c的差异表达得到改善。给予乙醇诱导的L02细胞SR8278（rev-erbα拮抗剂,10 μM,24 h）后,上述结果同样被发现。***-erbα调控脂肪变性的机制研究3.1自噬在EtOH-fed小鼠肝组织和乙醇诱导的L02细胞中的表达透射电镜和免疫组化结果表明EtOH-fed组小鼠肝组织中自噬形成减少。体外,Western blot和Lyso Tracker Green DND-26溶酶体探针检测结果表明自噬活性在EtOH刺激组L02细胞中也明显降低。3.2 rev-erbα对EtOH-fed小鼠和乙醇诱导的L02细胞中自噬的影响为了进一步研究rev-erbα对EtOH-fed小鼠和乙醇诱导的L02细胞中自噬活性的影响,对EtOH-fed小鼠尾静脉注射SR8278,透射电镜和免疫组化结果表明给予SR8278后,自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（Microtubule-associated light chain 3,Lc3）形成增加,P62的表达降低

关键词：酒精性脂肪肝 rev-erbα 脂质代谢自噬 Bmal1

rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的作用及机制研究

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Rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的作用及机制研究

作者：甘雪晴西南医科大学

学位级别：硕士

目的:1.研究rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的具体作用;2.研究rev-erbα在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增殖中的具体作用;3.明确Nlrp3是否是rev-erbα抑制VSMC增殖的重要靶点。方法:1.在体实验:通过机械... 详细信息

目的:1.研究rev-erbα在血管内皮损伤后内膜增生中的具体作用;2.研究rev-erbα在血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增殖中的具体作用;3.明确Nlrp3是否是rev-erbα抑制VSMC增殖的重要靶点。方法:1.在体实验:通过机械损伤颈动脉内皮法构建血管内皮损伤模型,以特异性激动剂（SR9011）、抑制剂（SR8278）干预血管组织中rev-erbα的活性。（1）采用苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）检测颈动脉内膜增生情况;（2）采用免疫组化染色法检测颈动脉内膜细胞增殖情况;（3）应用qRT-PCR及Western blot技术检测颈动脉中rev-erbα表达水平变化。2.体外实验:采用100nmol/L血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）干预小鼠VSMC 24小时诱导体外增殖,通过SR9011、SR8278干预VSMC中rev-erbα的活性,另采用特异性siRNA转染技术敲低VSMC中核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3（NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,Nlrp3）水平。（1）采用qRT-PCR及Western blot检测VSMC中rev-erbα、Nlrp3表达水平变化;（2）通过CCK-8比色法（cell counting kit-8,CCK-8）检测VSMC增殖率;（3）根据免疫荧光染色Ki-67阳性细胞率检测VSMC增殖情况。结果:***-erbα在颈动脉组织及VSMC中均有表达。2.在体实验发现,与假手术组相比,内皮损伤组内膜/中膜比值及增生内膜中Ki-67阳性细胞率增加（P＜0.01）,血管组织中rev-erbα表达水平降低（P＜0.01）。3.应用SR9011激动rev-erbα后,可降低内皮损伤后血管增生内膜/中膜比值（P＜0.01）;应用SR8278抑制rev-erbα后,可增加内皮损伤后血管增生内膜/中膜比值（P＜0.01）。同时,免疫组化结果也提示,应用SR9011激动rev-erbα后可减少血管内皮损伤后增生内膜中Ki-67阳性细胞比率（P＜0.01）;应用SR8278抑制rev-erbα后,可增加血管内皮损伤后增生内膜中Ki-67阳性细胞比率（P＜0.01）。4.在体外实验中,与对照组比较,AngⅡ组CCK-8 OD值及Ki-67阳性细胞率增加（P＜0.01）;通过PCR及Western blot结果显示,与对照组比较,AngⅡ组rev-erbα表达水平降低（P＜0.01）。5.应用SR9011激动rev-erbα后,与AngⅡ组相比,CCK-8吸光度OD值及Ki-67阳性细胞率降低（P＜0.05）;应用SR8278抑制rev-erbα后,与AngⅡ组相比,CCK-8吸光度OD值及Ki-67阳性细胞率增加（P＜0.05）。6.应用SR9011激动rev-erbα后,与AngⅡ组相比,Nlrp3 mRNA转录及蛋白表达水平降低（P＜0.05）;应用SR8278抑制rev-erbα后,与AngⅡ组相比,Nlrp3 mRNA转录及蛋白表达水平增加（P＜0.05）。***3基因敲减后,与AngⅡ组比较,Ki-67阳性细胞率降低（P＜0.01）;与AngⅡ+SR8278组比较,AngⅡ+SR8278+si-Nlrp3组Ki-67阳性细胞率减少（P＜0.01）;与AngⅡ+si-Nlrp3组比较,AngⅡ+SR8278+si-Nlrp3组Ki-67阳性细胞率无显著差异（P＞0.05）。结论:1.内皮损伤后血管增生内膜中rev-erbα的表达降低,激动rev-erbα可抑制内膜增生,抑制rev-erbα可促进内膜增生。2.增殖期VSMC中rev-erbα的表达降低,激动rev-erbα可抑制VSMC增殖,抑制rev-erbα促进VSMC增殖。***3可能是rev-erbα抑制VSMC增殖的重要靶点。

关键词：血管再狭窄内膜增生 rev-erbα Nlrp3 血管平滑肌细胞增殖

rev-erbα在胃癌中低表达的机制及其在胃癌预后中的作用

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REV-ERBα在胃癌中低表达的机制及其在胃癌预后中的作用

作者：贾如安徽医科大学

学位级别：硕士

研究目的研究rev-erbα在胃癌中蛋白表达量降低的分子机制及其临床预后意义研究方法利用生物信息学技术寻找rev-erbα在胃癌组织中改变的潜在机制。利用细胞分子生物学技术进一步验证rev-erbα如何通过翻译后修饰进行降解导致其降低。... 详细信息

研究目的研究rev-erbα在胃癌中蛋白表达量降低的分子机制及其临床预后意义研究方法利用生物信息学技术寻找rev-erbα在胃癌组织中改变的潜在机制。利用细胞分子生物学技术进一步验证rev-erbα如何通过翻译后修饰进行降解导致其降低。应用统计学方法分析rev-erbα表达水平与临床病理特征、生存时间关系。单因素、多因素Cox回归分析rev-erbα、相关临床病理特征与预后的关系。研究结果生物信息学技术分析rev-erbα表达水平在胃癌组织中的降低可能与其翻译后修饰通过泛素化/蛋白酶体依赖的途径降解有关。在胃癌细胞系中加入泛素化/蛋白酶体通路抑制剂MG132会导致rev-erbα表达水平的升高。进一步检测发现rev-erbα蛋白磷酸化水平没有发生变化,而类泛素蛋白修饰(small ubiquitin-like modifier,SUMO)及泛素化修饰显著增加。rev-erbα的蛋白表达水平较正常胃组织降低,同时其表达水平与胃癌分化程度有关(Prev-erbα的表达水平与胃癌分化程度、术前癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平、TNM(Tumor Node Metastasis)分期密切相关。除此之外,低表达水平rev-erbα与胃癌患者差的总生存期(overall survival,OS)、无进展生存期(progression-free survival,PFS)密切相关(Prev-erbα的表达水平(P=0.001)均与胃癌患者的总生存期、无进展生存期密切相关。多因素比例风险回归模型分析显示,rev-erbα的表达水平是胃癌患者总生存期(Prev-erbα在胃癌组织中的低表达可能与其翻译后类泛素化修饰通过泛素化/蛋白酶体依赖的途径降解有关。其表达与胃癌患者总生存期和无进展生存期有关,可以作为胃癌预后的独立的因素。

关键词： rev-erbα 胃癌预后泛素化

RORα与rev-erbα在人胃癌组织表达情况及其临床意义

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安徽医科大学学报 2018年第3期53卷 411-415页

作者：王小山祁义军俞浩远梁瑞汪正广安徽医科大学第一附属医院普外科合肥230022

目的研究维甲酸相关孤儿受体(RORα)与孤儿核受体(rev-erbα)在人正常胃组织和胃癌组织中的表达情况、相关性及其临床病理意义。方法收集50例不同临床病理分期的胃癌患者的石蜡切片,运用免疫组织化学染色技术检测RORα与rev-erbα在人... 详细信息

目的研究维甲酸相关孤儿受体(RORα)与孤儿核受体(rev-erbα)在人正常胃组织和胃癌组织中的表达情况、相关性及其临床病理意义。方法收集50例不同临床病理分期的胃癌患者的石蜡切片,运用免疫组织化学染色技术检测RORα与rev-erbα在人正常胃组织及不同临床病理分期胃癌组织中的表达,同时Western blot研究RORα与rev-erbα在人正常胃组织及不同TMN分期人胃癌组织中的表达情况。结果免疫组织化学染色结果显示,RORα与rev-erbα在人胃癌组织中表达明显降低,同时RORα与rev-erbα的表达水平与胃癌患者TMN分期(P=0.013、0.010)及有无淋巴结转移(P=0.001、0.002)密切相关,与患者年龄、性别及肿瘤大小无相关性。Mc Nemar检验显示RORα与rev-erbα在人胃癌组织中的表达呈正相关性(Kappa=0.377,P=0.007)。同时Western blot结果显示RORα与rev-erbα在人胃癌组织中表达明显下降,且与TMN分期有显著相关性(Preverbα在人胃癌组织中表达降低与人胃癌组织的TMN分期及有无淋巴结转移有密切关联,并且RORα与rev-erbα可能在人胃癌组织中存在协同表达及调控,从而影响胃癌的发生与发展。

关键词： RORα rev-erbα 胃癌 TMN分期