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reck基因3′UTR荧光素酶报告基因载体的构建

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中国生物制品学杂志 2018年第3期31卷 247-250,256页

作者：伊丽娜刘睿张烜昌妍希孙鹏内蒙古医科大学药学院内蒙古呼和浩特010100 内蒙古医科大学基础医学院内蒙古呼和浩特010100

目的构建reck(reversion-inducing cysteine-rich protein with kazal motifs)基因mRNA 3′非编码区(3′-untranslated region,3′UTR)全长及两个截短片段的荧光素酶报告基因载体,以进一步研究microRNA对reck基因的调控。方法以人乳腺癌细胞系MCF-7基因组DNA为模板,PCR扩增reck基因mRNA的3′UTR全长及两个截短片段,利用双酶切将目的片段定向插入报告基因载体pGL3-Control中,将克隆载体转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行扩增,采用菌落PCR、双酶切、测序鉴定重组子,双荧光报告基因检测其表达活性。结果重组载体中reck3′UTR序列与GenBank序列比对一致且插入方向正确;3个重组载体分别命名为pGL3-reck 3′UTR-1、pGL3-reck3′UTR-2和pGL3-reck 3′UTR-3,转染细胞后可表达荧光素酶基因。结论成功构建了reck基因3′UTR全长及两个截短片段的荧光素酶报告基因载体,为进一步研究microRNA对靶基因reck的调控奠定了基础。

关键词： reck基因 3′UTR 荧光素酶报告基因 microRNA

reck基因在胰腺癌中的表达及其与预后的关系

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中华肝胆外科杂志 2013年第8期19卷 580-585页

作者：田青水张宝明李德春连云港市第一人民医院普外科 222002 苏州大学附属第一医院普外科

目的观察人胰腺癌组织及细胞株中reck基因的表达，探讨重组慢病毒LV-reck对胰腺癌动物模型的治疗效果以及该基因与胰腺癌预后的关系。方法免疫组化法检测42例胰腺癌及相应正常胰腺组织中reck的表达，分析reck表达与胰腺癌临床病理特征... 详细信息

目的观察人胰腺癌组织及细胞株中reck基因的表达，探讨重组慢病毒LV-reck对胰腺癌动物模型的治疗效果以及该基因与胰腺癌预后的关系。方法免疫组化法检测42例胰腺癌及相应正常胰腺组织中reck的表达，分析reck表达与胰腺癌临床病理特征及预后的关系。采用Western Blotting法检测三个胰腺癌细胞株（PANC-1，MIAPa Ca-2，AsPC1）中reck的表达。统计分析reck基因表达与临床病理特征及预后的关系。建立胰腺癌动物模型，应用LV—reck进行治疗，观察抑瘤效果，并进行生存分析。结果reck在胰腺癌细胞株中不表达。胰腺癌组织的reck表达率（45．2％）较正常胰腺组织（88．1％）明显降低（P〈0．01）。reck表达与胰腺癌的TNM分期、淋巴结转移、局部浸润存在相关性（P〈0．05）。Kaplan-Meier生存分析显示，reck阳性表达组患者的生存期较阴性组明显延长（P=0．000）。单因素Cox分析显示，reck表达、TNM分期、淋巴结转移及局部浸润与预后有关（P〈0．05）。多因素Cox分析显示，只有reck表达具有独立的预后意义（P=0．000）。动物实验中，LVreck治疗组移植瘤明显缩小（P〈0．05），微血管密度明显降低（P〈0．05），凋亡指数显著升高（P〈O．05），生存期显著延长（P〈0．05）。结论reck表达与胰腺癌的侵袭转移及预后密切相关，可作为胰腺癌的独立预后指标。reck基因过表达可以抑制肿瘤血管新生，诱导肿瘤细胞凋亡，从而抑制移植瘤的生长，改善荷瘤鼠的预后，为胰腺癌治疗提供了一个新的途径。

关键词：胰腺肿瘤基质金属蛋白酶预后 reck基因

reck基因在子痫前期患者胎盘的表达及其与MMP-2活化的关系

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第6期38卷 818-820,831页

作者：郭君红徐亮张文淼陈云琴周静程晓红黄引平温州医学院附属第一医院妇产科温州325000 三峡大学人民医院骨科宜昌443000

目的通过检测reck基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨reck基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用。方法分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例... 详细信息

目的通过检测reck基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨reck基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用。方法分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例)胎盘组织中reck mRNA和蛋白的表达;采用明胶酶谱法检测3组孕妇胎盘组织中MMP-2的活化比例。结果轻度、重度子痫前期组胎盘组织中reck mRNA、蛋白的表达水平均明显高于正常妊娠组,且重度子痫前期组reck mRNA、蛋白的表达水平均明显高于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均Preck mRNA及其蛋白表达与MMP-2的活化比例均呈负相关关系(均Preck表达异常升高,MMP-2活性受到抑制,可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程。

关键词： reck基因胎盘子痫前期基质金属蛋白酶

reck基因在前列腺细胞株中的表达及其与MMP-2的关系

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江苏医药 2007年第4期33卷 372-374页

作者：徐振宇孙颖浩高建平张征宇葛京平许传亮王林辉南京军区南京总医院泌尿外科 210002 上海第二军医大学长海医院泌尿外科

目的检测reck基因在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCap以及PC-3中的表达,探讨其表达差异及其与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的关系。方法应用RT-PCR技术及Real-time PCR技术检测4种不同前列腺细胞株中reck基因及MMP-2 mRNA的表达;应用Wes... 详细信息

目的检测reck基因在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCap以及PC-3中的表达,探讨其表达差异及其与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的关系。方法应用RT-PCR技术及Real-time PCR技术检测4种不同前列腺细胞株中reck基因及MMP-2 mRNA的表达;应用Westernblot检测不同前列腺细胞株中reck基因的表达。结果前列腺癌细胞株DU-145、LNCap以及PC-3中reckmRNA的表达较良性前列腺增生细胞株BPH-1中明显降低(Preck基因的表达较正常组织明显降低。结论reck基因在前列腺癌中的表达量明显下降,而MMP-2的表达量明显升高,reck基因可能通过抑制MMP-2的表达起到抑癌基因的作用。

关键词：前列腺癌 reck基因基质金属蛋白酶2

MTA1和reck基因在鼻咽癌中的表达及意义

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2011年第12期25卷 534-538页

作者：邓燕飞周冬妮曾亮厦门大学附属中山医院耳鼻咽喉科福建厦门361004 厦门大学附属中山医院病理科湖南省肿瘤医院病理科

目的:检测MTA1和reck基因在鼻咽癌(NPC)中的表达及其与NPC临床病理因素的关系。方法:采用原位杂交技术检测60例原发性NPC(颈淋巴结转移组和无颈淋巴结转移组各30例)、10例NPC颈部转移淋巴结(MLN)和20例慢性鼻咽炎组织(CNT)中MTA1和reck ... 详细信息

目的:检测MTA1和reck基因在鼻咽癌(NPC)中的表达及其与NPC临床病理因素的关系。方法:采用原位杂交技术检测60例原发性NPC(颈淋巴结转移组和无颈淋巴结转移组各30例)、10例NPC颈部转移淋巴结(MLN)和20例慢性鼻咽炎组织(CNT)中MTA1和reck mRNA的表达,并对检测结果与NPC临床病理因素进行统计学分析。结果:①CNT、NPC和MLN中MTA1的阳性表达率分别为30.0%(6/20)、71.7%(43/60)和80.0%(8/10),与CNT比较,NPC和MLN中MTA1表达上调,差异均有统计学意义(均Preck的阳性表达率分别为85.0%(17/20)、26.7%(16/60)和30.0%(3/10)。与CNT比较,NPC和MLN中reck表达下调,差异均有统计学意义(均Preck阳性表达率分别为13.3%(4/30)和40.0%(12/30),差异有统计学意义(Preck异常表达与患者性别、年龄、T分期和临床分期无关(均P>0.05),与颈淋巴结转移、复发和治疗后5年生存期有关(均Preck基因异常表达可能与NPC的进展有关,共同参与了NPC的侵袭转移过程。MTA1和reck可作为评估NPC颈淋巴转移、复发及预后的生物学参考指标。

关键词：鼻咽肿瘤 MTA1基因 reck基因原位杂交

reck基因GFP融合蛋白表达载体的构建、鉴定及在脑胶质瘤细胞中的表达

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中国医科大学学报 2007年第4期36卷 389-391页

作者：李喆魏雷震王运杰中国医科大学附属第一医院神经外科中国沈阳110001 中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室

目的:获得reck基因GFP融合蛋白表达载体并使其在脑胶质瘤细胞SHG44中表达。方法:用基因克隆的方法构建reck基因GFP融合蛋白表达载体,通过酶切和测序鉴定,用绿色荧光蛋白表达载体对reck基因在人脑胶质瘤细胞SHG44中进行亚细胞定位。结果... 详细信息

目的:获得reck基因GFP融合蛋白表达载体并使其在脑胶质瘤细胞SHG44中表达。方法:用基因克隆的方法构建reck基因GFP融合蛋白表达载体,通过酶切和测序鉴定,用绿色荧光蛋白表达载体对reck基因在人脑胶质瘤细胞SHG44中进行亚细胞定位。结果:所得reck基因融合蛋白表达载体序列与预期相符。pEGFP-reck表达质粒转染SHG44细胞后,荧光信号主要集中在与细胞质有关的部位。结论:成功构建了GFP-reck融合蛋白表达质粒,这为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

关键词： reck基因胶质瘤绿色荧光蛋白表达载体基因克隆

reck基因在骨肉瘤细胞中的表达及其与MMP-2的关系(英文)

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The Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2009年第5期8卷 289-291页

作者： Liang Xu Shuhua Yang Guanjun Liu Junhong Guo Department of Orthopedics Union Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Wuhan 430022 China Department of Pathology The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College Wenzhou 325000 China Department of Obstetrics and Gynecology The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College Wenzhou 325000 China

Objective:To detect the expression of reck gene in the highly and low metastatic cell sublines of human osteosarcoma cell HOS and explore its possible roles on the occurrence and metastasis of osteosarcoma.Methods:RT-PCR, gelatin zymography, and matrigel invasion assay were respectively used to evaluate the endogenous expression of reck mRNA, MMP-2 activation ratio and invasive capacity in the two osteosarcoma cell sublines.Results:The highly metastatic cell group expressed significantly lower mRNA level of reck than the low metastatic cell group(P reck may participate in osteosarcoma invasion and metastasis, and may be a new therapeutic target for osteosarcoma.

关键词：骨肉瘤细胞系 reck基因 MMP 低转移细胞株基底膜侵袭实验人骨肉瘤细胞骨肉瘤细胞株基因表达水平

reck基因甲基化与喉鳞状细胞癌预后的关系

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医学研究生学报 2014年第6期27卷 615-618页

作者：崔静李辉田艳勋邢台市人民医院耳鼻咽喉科邢台医学硕士054001

目的喉癌发病率具有较大的区域性差异,其病因尚不明确。通过检测原发性喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织reck基因的甲基化状态,分析reck基因启动子区的甲基化与患者预后的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测邢台市人民医院2006年7月至2007年1... 详细信息

目的喉癌发病率具有较大的区域性差异,其病因尚不明确。通过检测原发性喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织reck基因的甲基化状态,分析reck基因启动子区的甲基化与患者预后的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测邢台市人民医院2006年7月至2007年12月70例经外科手术切除的喉鳞状细胞癌标本的reck基因启动子区甲基化状态,比较不同病理参数的甲基化率的差异,对完成5年随访的64例患者分析其reck基因启动子区甲基化与预后的关系。结果肿瘤组织低分化患者的reck基因甲基化率(86.67%)远高于中、高等分化程度的患者(43.64%),差异有统计学意义(Preck基因甲基化率差异无统计学意义(P>0.05);29对喉鳞状细胞癌-癌旁组织匹配的标本中,喉鳞状细胞癌组织reck基因甲基化率(55.12%)高于正常组织(27.59%),差异有统计学意义(P=0.029);经Log-rank分析,reck基因甲基化可明显缩短患者的无瘤生存期和总体生存期(P=0.024,P=0.017);有淋巴结转移、Ⅲ-Ⅳ级临床分期可明显缩短患者的无瘤生存期和总体生存期(P=0.029,P=0.024;P=0.033,P=0.032),肿瘤组织中等及高分化可明显缩短患者的无瘤生存期(P=0.049);总体生存期的独立危险因素为有无淋巴结转移、临床分期和reck基因甲基化。结论 reck基因启动子区甲基化是人喉鳞状细胞癌的早期事件,在癌旁正常组织中也可发生,并且与患者较差的预后关联。

关键词：喉鳞状细胞癌 reck基因甲基化预后

靶向reck基因的miR-374b-5p对裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响

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肿瘤 2014年第11期34卷 975-981页

作者：朱蔚远李国庆周角凡谢娟刘艳萍南华大学附属第二医院消化内科湖南衡阳421001 邵阳市第一人民医院消化内科湖南邵阳422001 深圳罗湖区人民医院消化内科广东深圳518000 南华大学医学院诊断学教研室湖南衡阳421001

目的 :探讨微RNA-374b-5p(micro RNA-374b-5p,miR-374b-5p)及其靶基因反转录富含半胱氨酸蛋白(reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs,reck)在胃癌发生和发展中的作用。方法 :采用人胃癌MGC-803细胞建立BABL/c裸鼠移植瘤模型,当移植瘤体积达到60 mm3左右时,将小鼠随机分为3组(每组5只),即空白对照组、阴性对照组[体内转染无意义微RNA序列(miR-374b-5p negative control inhibitor)]和miR-374b-5p抑制组(体内转染miR-374b-5p inhibitor),并观察各组移植瘤的生长情况。在接种MGC-803细胞后第35天时(最后一次治疗3 d后)处死各组小鼠,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察移植瘤标本的病理学特征;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测移植瘤组织中miR-374b-5p的表达水平;荧光素酶活性检测验证miR-374b-5p是否靶向作用于reck基因;分别采用RFQPCR和免疫组织化学法检测移植瘤中reck mRNA和蛋白的表达情况。结果 :miR-374b-5p抑制组移植瘤体积在转染miR-374b-5p inhibitor 9 d后(即接种细胞的第23天后),开始明显小于空白对照组和阴性对照组(Preck是miR-374b-5p直接调控的靶基因;miR-374b-5p抑制组移植瘤中reck m RNA及蛋白的表达水平均显著高于空白对照组和阴性对照组(P均reck通路在胃癌的发生和发展中扮演着癌基因的角色。

关键词：胃肿瘤微RNAs 小鼠,裸 reck基因