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干扰NaV1.9对raw264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 225-228页

作者：罗悦晨周欣姬文婕孙海英卢芮伊姜铁民李玉明天津医科大学研究生院天津300070 武警后勤学院附属医院心血管病研究所心脏中心天津300162 武警后勤学院附属医院呼吸与重症医学科天津300162

目的应用RNA干扰技术沉默raw264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转... 详细信息

目的应用RNA干扰技术沉默raw264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至raw264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株。用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能。结果成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80%。CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(Praw264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低。

关键词： NaV1 9 raw264 7 增殖吞噬能力迁移能力

Ficolin 3的表达、纯化及其对raw264.7巨噬细胞的活化作用

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第7期30卷 677-680页

作者：郭江涛曹旭晴王志军宁夏人民医院肾内科宁夏人民医院神经内科宁夏医科大学总医院放射科宁夏银川750000

目的构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系raw264.7活化中的作用。方法从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定... 详细信息

目的构建人ficolin-3基因的原核表达载体在大肠杆菌中表达后纯化,检测可溶性His-ficolin在诱导巨噬细胞系raw264.7活化中的作用。方法从人外周血单个核细胞cDNA中扩增人ficolin-3基因的cDNA序列,将其插入pET22原核表达载体中,酶切鉴定并测序验证重组质粒pET22b-ficolin 3后,在大肠杆菌BL21中诱导表达并纯化His-ficolin 3。以His蛋白为对照,利用流式细胞术检测不同浓度可溶性His-ficolin 3对raw264.7细胞吞噬鸡红细胞能力的影响,利用ELISA检测His-ficolin 3对raw264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影响。结果酶切鉴定获得预期目的片段,测序证实重组质粒pET22b-ficolin 3构建成功。SDS-PAGE提示相对分子质量(Mr)33 000处有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表达,His柱纯化后产物纯度在90%以上。Western blot法检测证实纯化产物为His-ficolin 3。和His蛋白相比,His-ficolin 3对raw264.7细胞的吞噬能力具有剂量依赖性,即His-ficolin3浓度越高,吞噬能力越强;此外,His-ficolin3能显著诱导raw264.7细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性细胞因子。结论成功构建了pETb-Ficolin 3重组载体并获得了纯度为90%以上的His-ficolin 3。His-ficolin 3能够显著促进巨噬细胞raw264.7的活化。

关键词： pET22b 原核表达 raw264 7巨噬细胞细胞吞噬作用

miR-20b对小鼠raw264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第4期34卷 501-506页

作者：宋传旺陶象男唐洁申林蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心蚌埠233030

目的探讨miR-20b对小鼠raw264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠raw264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激raw264．7细胞6h，... 详细信息

目的探讨miR-20b对小鼠raw264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠raw264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激raw264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染raw264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠raw264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激raw264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠raw264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

关键词： miR 20b 血管内皮生长因子 raw264 7细胞

过表达小鼠干扰素调节因子8抑制raw264.7细胞向破骨样细胞的分化

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第3期30卷 229-232,236页

作者：杨小中朱云王正宇闫文龙姚海刘涛陈婷梅张健重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016 重庆医科大学教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016

目的构建及鉴定小鼠干扰素调节因子8(IRF8)重组腺病毒Ad-IRF8,并观察过表达的IRF8对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)诱导的raw264.7细胞分化的影响。方法 PCR扩增IRF8,亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化后与骨... 详细信息

目的构建及鉴定小鼠干扰素调节因子8(IRF8)重组腺病毒Ad-IRF8,并观察过表达的IRF8对小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配体(sRANKL)诱导的raw264.7细胞分化的影响。方法 PCR扩增IRF8,亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV中,PmeⅠ线性化后与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组获得重组腺病毒载体pAd-IRF8。pAd-IRF8经PacⅠ线性化后转染AD293细胞,包装出重组腺病毒(Ad-IRF8)。Ad-IRF8感染小鼠raw264.7细胞,经半定量反转录PCR(RT-PCR)和Western blot法检测IRF8的过表达,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测IRF8对sRANKL诱导的raw264.7细胞分化的影响。结果成功构建携带IRF8基因的穿梭载体pAdTrack-IRF8-CMV和重组载体pAd-IRF8,并且在AD293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-IRF8。半定量RT-PCR和Western blot法证实IRF8在raw264.7细胞中有过表达,TRAP染色结果显示过表达的IRF8有效抑制raw264.7细胞向破骨样细胞分化。结论成功构建重组腺病毒Ad-IRF8,在raw264.7细胞中检测到了IRF8过表达,并能有效抑制raw264.7细胞向破骨样细胞分化。

关键词：腺病毒 IRF8 分化 raw264 7细胞破骨样细胞

生姜油树脂对过氧化氢引起raw264.7巨噬细胞损伤的保护作用

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食品科学 2014年第1期35卷 244-249页

作者：卞梦瑶方勇裴斐赵立艳辛志宏安辛欣杨方美胡秋辉南京农业大学食品科技学院江苏南京210095 南京财经大学食品科学与工程学院江苏南京210046

目的:研究生姜油树脂对过氧化氢引起的raw264.7巨噬细胞损伤的影响。方法:以生姜油树脂为研究对象,建立raw264.7细胞的过氧化氢损伤模型,测定质量浓度分别为1、3、5μg/mL的生姜油树脂联合过氧化氢对raw264.7细胞和细胞培养液中丙二醛... 详细信息

目的:研究生姜油树脂对过氧化氢引起的raw264.7巨噬细胞损伤的影响。方法:以生姜油树脂为研究对象,建立raw264.7细胞的过氧化氢损伤模型,测定质量浓度分别为1、3、5μg/mL的生姜油树脂联合过氧化氢对raw264.7细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化指标的影响。结果:生姜油树脂各剂量组均能显著缓解过氧化氢引起的raw264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液内的丙二醛含量,提高谷胱甘肽含量以及超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,其中5μg/mL生姜油树脂对过氧化氢引起的细胞损伤的保护作用效果最好。结论:生姜油树脂对过氧化氢引起的raw264.7细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能是生姜油树脂通过调节细胞氧化还原系统,提高抗氧化能力,有效清除自由基的产生,从而对细胞的氧化性损伤起保护作用。

关键词：生姜油树脂 raw264 7 过氧化氢抗氧化

2型登革病毒诱导raw264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响

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中国病理生理杂志 2013年第12期29卷 2245-2250页

作者：张林黄俊琪中山大学中山医学院免疫学研究所教育部热带病防治研究重点实验室广东广州510080

目的:探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导raw264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法:用DENV2感染raw264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western ... 详细信息

目的:探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导raw264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法:用DENV2感染raw264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果:DENV2感染raw264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导raw264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论:登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导raw264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。

关键词：登革病毒细胞凋亡 raw264 7 细胞

小鼠EPCs和raw264.7细胞株体外联合培养体系的建立

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第三军医大学学报 2013年第2期35卷 119-122页

作者：付生龙庞浩吴雪晖许建中第三军医大学西南医院骨科全军矫形外科中心重庆400038

目的体外建立小鼠血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)和破骨细胞前体细胞raw264.7细胞株共培养体系。方法 EPCs和raw264.7细胞株共培养为实验组,加了等量细胞培养液但没有加入EPCs的细胞作为对照组。利用分离式培养小... 详细信息

目的体外建立小鼠血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)和破骨细胞前体细胞raw264.7细胞株共培养体系。方法 EPCs和raw264.7细胞株共培养为实验组,加了等量细胞培养液但没有加入EPCs的细胞作为对照组。利用分离式培养小室进行细胞联合培养,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测细胞的增殖,通过检测光密度值绘制共培养过程中raw264.7细胞生长曲线;逆转录PCR检测共培养1、3、5、7 d后raw264.7细胞VEGFR-2和CXCR4 mRNA的表达;TRAP染色检测破骨细胞活性。结果和EPCs细胞联合培养能加快raw264.7细胞的增殖速率,和raw264.7单独生长比较,共培养3、5、7 d后,2组的光密度值差异有显著性(Praw264.7细胞分化为破骨细胞。结论在体外联合培养体系中,EPCs具有促进宿主破骨细胞前体细胞增殖与分化的作用。

关键词：小鼠血管内皮祖细胞 raw264 7 联合培养

雷公藤次碱对脂多糖诱导raw264.7细胞分泌炎症因子的影响

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中国医院药学杂志 2014年第14期34卷 1164-1167页

作者：杨丽娜刘志宏张晶宋洪涛福建中医药大学药学院福建福州350108 南京军区福州总医院药学科福建福州350025

目的观察雷公藤次碱（wilforine）对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系raw264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法采用LPS刺激生长良好的raw264.7细胞,建立细胞炎症模型。以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对raw264.7细胞的毒性作用;... 详细信息

目的观察雷公藤次碱（wilforine）对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系raw264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响。方法采用LPS刺激生长良好的raw264.7细胞,建立细胞炎症模型。以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对raw264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）的含量。结果雷公藤次碱在11.5-115 μmolL-1的浓度范围内,对raw264.7细胞无毒性作用（p〉0.05）;脂多糖可以明显诱导raw264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO（p〈0.01）;雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制（p〈0.05,p〈0.01）。结论雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的raw264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关。

关键词：雷公藤次碱脂多糖 raw264 7细胞肿瘤坏死因子-α 白介素-6 一氧化氮

维药罗勒提取物对小鼠巨噬细胞raw264.7生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响

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中成药 2013年第8期35卷 1599-1604页

作者：米娜瓦尔.哈帕尔阿孜古丽.吐尔逊周文婷程路峰依巴代提.吐乎提娜迪热.热依木艾尼瓦尔.吾买尔新疆医科大学基础医学院药理教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院细胞生物学室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二附属医院内科新疆乌鲁木齐830063

目的观察罗勒提取物对小鼠腹腔巨噬细胞(raw264.7)生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响。方法采用MTT比色法检测罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物对正常raw264.7细胞和经脂多糖刺激的raw264.7细胞生长的影响,求出其IC50值;用罗勒乙酸... 详细信息

目的观察罗勒提取物对小鼠腹腔巨噬细胞(raw264.7)生长及其胞内5-脂氧酶活性的影响。方法采用MTT比色法检测罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物对正常raw264.7细胞和经脂多糖刺激的raw264.7细胞生长的影响,求出其IC50值;用罗勒乙酸乙酯提取物或罗勒正丁醇提取物分别干预经脂多糖处理的raw264.7细胞,采用ELISA法测定并比较上清液中白三烯B4的质量浓度,求出其抑制率。结果罗勒乙酸乙酯提取物和罗勒正丁醇提取物对正常raw264.7细胞的生长有不同程度的抑制作用,给药时间为24 h的IC50值分别为312.5μg/mL、350.9μg/mL,具有浓度依赖性;两种提取物对经脂多糖刺激的raw264.7的生长有一定的增殖作用(Praw264.7细胞生长的最大抑制质量浓度为100μg/mL,对细胞内5-脂氧酶活性具有抑制作用。

关键词：罗勒 raw264 7细胞脂多糖 5-脂氧酶