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miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

南方医科大学学报 2023年第1期43卷 68-75页

作者：谈秋瑜吴旭纪方吴少云颜亮皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 海军军医大学附属长海医院上海200433 芜湖医药卫生学校安徽芜湖241000

目的探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EdU和Tra... 详细信息

目的探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EdU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞h FOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EdU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EdU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达明显下调(P3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P3、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(PRAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断(PRAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

关键词： miR-125b-5p RAB3D 骨肉瘤细胞细胞增殖细胞迁移

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RAB3D在癌症发生发展中的研究进展

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医药论坛杂志 2023年第1期44卷 109-112,F0003页

作者：魏晓楠杨一琼李晓珂韦笑笑张敬美济宁医学院精准医学研究院山东济宁272067 济宁医学院行为医学教育研究所山东济宁272067

目前,癌症仍然是全世界最常见的发病和死亡原因之一。癌症的治疗方法主要是手术、放疗、化疗为主。随着科技的发展,癌症的发病机制也逐步被揭示出来。本文主要介绍了RAB3D作为原癌基因在肺癌、结直肠癌、胶质瘤、骨肉瘤、乳腺癌、食管... 详细信息

目前,癌症仍然是全世界最常见的发病和死亡原因之一。癌症的治疗方法主要是手术、放疗、化疗为主。随着科技的发展,癌症的发病机制也逐步被揭示出来。本文主要介绍了RAB3D作为原癌基因在肺癌、结直肠癌、胶质瘤、骨肉瘤、乳腺癌、食管癌、肝癌、肾癌、黑色素瘤等9种癌症中的分子机制及其研究进展,RAB3D有望成为新的癌症诊断和治疗靶点,以期为研究者开发癌症治疗药物提供参考依据。

关键词：癌症 RAB3D 原癌基因分子机制治疗靶点

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RAB3D在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用

Rab3D在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用

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作者：袁东方新乡医学院

学位级别：硕士

背景食管癌是我国常见恶性肿瘤之一,病理类型约90%为鳞癌。据Chen W[1]等人统计表明,肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、食管癌是5种常见的消化道肿瘤,其中肺癌、肝癌、胃癌和食道癌是我国癌症死亡的主要原因。近几年来随着手术、放化疗技术的... 详细信息

背景食管癌是我国常见恶性肿瘤之一,病理类型约90%为鳞癌。据Chen W[1]等人统计表明,肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、食管癌是5种常见的消化道肿瘤,其中肺癌、肝癌、胃癌和食道癌是我国癌症死亡的主要原因。近几年来随着手术、放化疗技术的不断提高,但是食管癌发病率及死亡率仍然很高。尤其食管鳞癌仍缺乏临床确切的治疗靶点。RAB3D为RAS癌基因家族成员之一,为鸟苷酸磷酸酶(guanosine triphosphate,GTP)结合蛋白,在人体组织中广泛表达,尤其在癌细胞系和原发肿瘤中表达明显较高。但针对RAB3D对食管鳞癌发生、发展的具体研究尚未见报道过。目的本研究通过免疫组织化学技术分析20例食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜组织及64例食管鳞癌组织中RAB3D蛋白的表达差异及临床病理学意义。构建pc dNA3-RAB3D重组质粒与RAB3D-si RNA干扰序列,转染至食管鳞癌细胞中,上调或下调食管鳞癌细胞中RAB3D蛋白的表达,通过MTT与Western Blot实验检测RAB3D蛋白表达的变化对食管鳞癌细胞增殖能力的影响及对细胞中Cyclin d1表达的影响。从而探讨RAB3D在食管鳞癌组织中的意义及对食管鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。以期为食管鳞癌的靶向治疗及病情评估提供新的方法与思路。方法1.RAB3D在食管鳞癌细胞癌中的表达及其临床病理学意义选取20例食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管粘膜组织及含有44例食管鳞癌标本的组织芯片,运用免疫组织化学技术检测RAB3D蛋白在20例食管鳞癌组织中的表达差异及44例食管鳞癌组织中的临床病理学意义。2.MTT实验检测RAB3D对食管鳞癌细胞增殖的影响构建真核表达重组质粒pc dNA3-RAB3D及RAB3D-si RNA,经脂质体介导将pc dNA3-RAB3D重组质粒转染至RAB3D蛋白表达较低的食管鳞癌细胞中,通过MTT、Western Blot等方法探讨RAB3D蛋白的过表达对食管鳞癌细胞增殖的影响;将RAB3D-si RNA转染至RAB3D蛋白表达较高的食管鳞癌细胞中,通过MTT、Western Blott等方法观察降低RAB3D蛋白的表达对食管鳞癌细胞增殖的影响。3.Western blot实验检测RAB3D蛋白表达变化对细胞中Cyclin d1蛋白表达的影响将真核表达重组质粒pc dNA3-RAB3D及RAB3D-si RNA(RAB3D小干扰RNA)转染入RAB3D蛋白表达较低的两株细胞株及RAB3D蛋白表达较高的两株细胞株中,通过Western Blot实验探讨RAB3D蛋白表达的改变对食管鳞癌细胞中Cyclin d1蛋白表达的影响,从而探讨RAB3D对食管鳞癌细胞增殖的可能机制。结果1.RAB3D在食管鳞癌细胞癌中的表达及其临床病理学意义20例正常食管粘膜组织RAB3D蛋白高表达率为10%(2/20),癌旁组织中RAB3D蛋白高表达率为30%(6/20),食管鳞癌组织中RAB3D蛋白高表达率为90%(18/20)。三组两两对比,差异均有显著统计学意义(PRAB3D蛋白的表达分析:TNM分期中早期(Ⅰ+Ⅱ期)食管鳞癌组织中RAB3D高表达率为38.70%(12/31),晚期(Ⅲ+Ⅳ期)食管鳞癌组织中RAB3D高表达率为66.67%(22/33),两者相比有显著统计学意义(PRAB3D高表达率为37.93%(11/29),有淋巴结转移食管鳞癌组织RAB3D高表达率65.71%(23/35),两者相比有显著统计学意义(PRAB3D对食管鳞癌细胞增殖的影响MTT结果显示:转染RAB3D质粒的食管鳞癌细胞株增殖率明显高于转染空载体的对照组细胞的增值率;转染RAB3D-si RNA的食管鳞癌细胞株增殖率明显低于转染阴性对照的阴性对照组细胞的增值率,两者相比有显著统计学意义(P3.Western Blot实验检测RAB3D蛋白表达的变化对细胞中Cyclin d1蛋白表达的影响Western Blot结果显示,KYSE410、KYSE450细胞转染RAB3D组Cyclin d1蛋白较本细胞株对照组增高,差异有统计学意义(Pd1蛋白较本细胞株阴性对照组降低,差异有统计学意义(PRAB3D的表达与食管鳞癌癌分化程度及食管鳞癌临床分期、淋巴结转移明显相关。RAB3D的表达对食管鳞癌细胞的增殖能力具有促进作用。其机制可能与促进Cyclin d1的表达有关。因此,我们认为RAB3D可能成为预测食管鳞癌进展程度的指标,可能成为食管鳞癌临床治疗的靶点。

关键词：食管鳞癌 RAB3D 增殖免疫组织化学

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RAB3D对食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素d1表达的影响

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新乡医学院学报 2016年第5期33卷 369-372页

作者：袁东方武莉萍吴冬梅杨留勤杨万才新乡医学院河南新乡453003 新乡市中心医院放射治疗科河南新乡453000 新乡医学院病理学教研室河南新乡453003

目的探讨RAB3D对人食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素d1(Cyclin d1)表达的影响。方法采用Western blot法从8株人食管鳞状细胞癌细胞系KYSE410、KYSE450、TE-1、TE-7、KYSE510、KYSE150、EC9706、EC109中筛选出RAB3D表达较低的2株食... 详细信息

目的探讨RAB3D对人食管鳞状细胞癌细胞系增殖及细胞周期素d1(Cyclin d1)表达的影响。方法采用Western blot法从8株人食管鳞状细胞癌细胞系KYSE410、KYSE450、TE-1、TE-7、KYSE510、KYSE150、EC9706、EC109中筛选出RAB3D表达较低的2株食管鳞状细胞癌细胞株KYSE410、KYSE450及RAB3D表达较高的2株食管鳞状细胞癌细胞株EC109、EC9706,将KYSE410、KYSE450细胞株分别分为转染RAB3D质粒的RAB3D组和转染空载体的对照组,将EC109、EC9706细胞株分别分为转染RAB3D小干扰RNA(siRNA)的RAB3D siRNA组和转染阴性对照的阴性对照组,MTT法检测RAB3D对食管鳞状细胞癌细胞的增殖及Cyclin d1表达的影响,Western blot检测Cyclin d1蛋白的表达。结果 KYSE410、KYSE450食管鳞状细胞癌细胞株转染RAB3D组细胞的吸光度与本细胞株对照组比较,在转染后12 h差异无统计学意义(P>0.05),转染后24、48、72 h均高于本细胞株对照组,差异有统计学意义(P0.05),转染后48、72 h均低于本细胞株阴性对照组(PRAB3D组Cyclin d1蛋白表达水平较本细胞株对照组增高(Pd1蛋白表达水平较本细胞株阴性对照组降低(PRAB3D促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖,机制可能与促进Cyclin d1的表达有关。

关键词：食管鳞状细胞癌细胞株 RAB3D 增殖

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