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MPLA联合r848诱导巨噬细胞向M1型极化的作用及初步机制研究

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MPLA联合R848诱导巨噬细胞向M1型极化的作用及初步机制研究

作者：吴奕萱吉林大学

学位级别：硕士

近年来,TLrs激动剂作为肿瘤疫苗佐剂被广泛投入应用,可单独使用,为增强疫苗的免疫反应,也可将其联合应用。将TLrs配体联合应用于免疫细胞作用不尽相同,可能表现为协同促进,亦可能相互间拮抗。因此,研究巨噬细胞被TLrs配体作用后对其极... 详细信息

近年来,TLrs激动剂作为肿瘤疫苗佐剂被广泛投入应用,可单独使用,为增强疫苗的免疫反应,也可将其联合应用。将TLrs配体联合应用于免疫细胞作用不尽相同,可能表现为协同促进,亦可能相互间拮抗。因此,研究巨噬细胞被TLrs配体作用后对其极化的影响及机制有望为TLrs信号在免疫细胞间的联合应用机制研究提供理论基础。本组前期研究发现TLr4激动剂LPS以及TLr7/8激动剂r848联合可协同诱导小鼠巨噬细胞系(rAW264.7)向M1型极化。然而,LPS作为一种内毒素,本身具一定的副作用,不适用于后续的动物实验及疫苗佐剂的开发。因而,本研究选用TLr4激动剂——单磷酰脂质A(MPLA)替换LPS,将其与TLr7/8激动剂r848联合作用,探讨其对巨噬细胞极化影响并初步探讨其机制:首先,为验证MPLA及r848联合对巨噬细胞极化的影响,将MPLA和r848单独或联合作用于rAW264.7,采用Griess法、Western blot、q PCr检测巨噬细胞极化指标NO分泌,及i NOS、Arg-1的表达情况。结果显示:与对照或单独给药组相比,MPLA及r848联合作用后,NO分泌量及i NOS的表达水平最高,Arg-1的表达水平最低,提示两药联合作用于巨噬细胞可使其活化并向M1型极化的效果最显著。然后,我们使用小鼠腹腔巨噬细胞用IL-4刺激诱导M2型巨噬细胞,随后加入MPLA及r848,通过检测i NOS、Arg-1,探讨MPLA和r848联合能否将M2型巨噬细胞翻转为M1型,结果表明:MPLA及r848单独作用时,不具备翻转能力,二者联合作用时可将M2型腹腔巨噬细胞翻转为M1型。进一步,我们以STAT3的表达情况为切入点,探讨MPLA和r848联合诱导巨噬细胞极化的机制,采用Western blot、q PCr分析STAT3的上下游信号AKT、STAT1、SOCS3、SOCS1、IκB的表达,结果表明:MPLA及r848处理巨噬细胞后,单独组中STAT3、SOCS3与IκB的表达与对照组相比均升高,AKT、STAT1和SOCS1的表达均降低;当两药联合后,STAT3、SOCS3与IκB的表达升高最为显著,AKT、STAT1、SOCS1的表达降低最显著。随后,为验证在巨噬细胞极化过程中STAT3起到的作用,我们加入STAT3抑制剂后,再分析MPLA及r848对巨噬细胞极化及信号的影响。结果显示:加入STAT3抑制剂后,MPLA或r848单独给药组i NOS的表达与对照组相比略微升高,但与未加入抑制剂相比,显著降低,两药联合组中的协同效果被解除,而Arg-1的变化趋势不显著;在加入STAT3抑制剂后,单独组中SOCS3与IκB的表达与对照组相比略有降低,两激动剂联合组中的表达与对照组相比略有升高,但与只加入激动剂相比其协同效果被解除,STAT1和SOCS1的效果不显著。提示STAT3在MPLA联合r848诱导的巨噬细胞极化中起重要作用。本研究提示MPLA和r848联合可使巨噬细胞活化并向M1型极化,且可以翻转由IL-4诱导的M2型巨噬细胞为M1型,同时,揭示了STAT3在巨噬细胞极化过程中起着重要作用。研究有望为肿瘤治疗提供理论基础,同时为免疫佐剂的研发提供新策略。

关键词： MPLA r848 巨噬细胞极化 STAT3

TLr7激动剂（r848）为佐剂的OVA纳米疫苗治疗OVA过敏性哮喘的机制研究

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TLR7激动剂（R848）为佐剂的OVA纳米疫苗治疗OVA过敏性哮喘的机制...

作者：罗丹西南医科大学

学位级别：硕士

目的:制作PLGA-OVA-r848纳米疫苗,对其形貌特征进行表征及其内包裹的过敏原蛋白成分进行鉴定,并探讨其在鸡卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的过敏性哮喘小鼠舌下免疫治疗(Sublingual immunotherapy,SLIT)的机制,为过敏性哮喘的过敏原免疫疗... 详细信息

目的:制作PLGA-OVA-r848纳米疫苗,对其形貌特征进行表征及其内包裹的过敏原蛋白成分进行鉴定,并探讨其在鸡卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的过敏性哮喘小鼠舌下免疫治疗(Sublingual immunotherapy,SLIT)的机制,为过敏性哮喘的过敏原免疫疗法(Allergen immunotherapy,AIT)治疗策略提供新的方案。方法:采用复乳溶剂挥发法制备PLGA-OVA-r848纳米疫苗,观察其形貌特征及粒径大小;采用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测纳米颗粒中OVA蛋白的完整性、蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测纳米颗粒中蛋白的抗原性、非干扰型蛋白浓度测定法检测体外纳米颗粒中过敏原蛋白的累积释放率、反转录实时荧光定量PCr(rT-q PCr)检测纳米颗粒对小鼠巨噬细胞(rAW264.7)活性的影响。4-5周龄BALB/c雌性小鼠40只随机分为空白对照组(n=5)和OVA致敏组(n=35),对致敏组小鼠采用OVA混合佐剂AL(OH)皮下注射致敏及OVA滴鼻激发建立过敏性哮喘小鼠模型,正常组给予磷酸盐缓冲液(PBS)代替;ELISA检测致敏组小鼠血清表达OVA特异性免疫球蛋白E(sIgE)验证过敏性哮喘模型成功建立后,致敏组小鼠再随机分为7组分别给予相应药物进行为期2周的SLIT,每周给药2次。末次治疗结束后,除正常组小鼠给予PBS滴鼻激发外,其余各组小鼠均给予20 ug OVA滴鼻激发,每天1次,连续3天。激发后24 h处理小鼠。ELISA法检测各组小鼠血清OVA特异性Ig E、免疫球蛋白G1(Ig G1)、免疫球蛋白G2a(Ig G2a)的抗体水平及小鼠肺泡灌洗液上清、脾细胞培养上清中白细胞介素4、5、13(IL-4、IL-5、IL-13)及白细胞介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)等细胞因子水平;苏木素-伊红染色(H&E)和过碘酸-希夫(PAS)染色观察小鼠肺组织炎症浸润情况;CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖抑制情况;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中OVA特异性调节性T细胞(Tregs)比例。结果:1、PLGA-OVA-r848纳米颗粒呈表面光滑的圆球形,外观形态良好、无破损、裂口,纳米颗粒分散性好、无粘连,粒径大小为(219.20±18.56)nm,包封率为(68.25±2.05)%,载药量为(6.75±0.2)%。纳米颗粒中的OVA蛋白分别于SDS-PAGE及WB中呈现出清晰的条带,并于37℃,100 rpm/min,PH 7.40的条件历经132 h后显示出最大累积释放率为45.65%。2、PLGA-OVA-r848纳米颗粒可诱导rAW264.7产生白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的m rNA表达增加。3、SLIT后,PLGA-OVA-r848纳米疫苗可有效降低OVA过敏性哮喘小鼠血清中sIgE、sIgG1水平,并显著提高血清中sIgG2a水平。4、PLGA-OVA-r848纳米疫苗可有效降低过敏性哮喘小鼠肺泡灌洗液及脾细胞培养上清中IL-4、IL-5、IL-13细胞因子的含量,同时提高脾细胞上清中IL-10细胞因子含量。5、PLGA-OVA-r848纳米疫苗有效改善过敏性哮喘小鼠肺组织气道粘液高分泌现象及气道周围炎性细胞浸润。6、PLGA-OVA-r848纳米疫苗能有效抑制脾脏中OVA特异性淋巴细胞增殖。7、PLGA-OVA-r848纳米疫苗可有效促进小鼠脾淋巴细胞中OVA特异性Tregs比例升高。结论:1、本实验成功制备了纳米级别的过敏原疫苗,其内包裹的过敏原蛋白可保持良好的完整性及抗原性;纳米疫苗在37℃、PH 7.40的条件下仍具备长效缓释特性,并可有效刺激抗原提呈细胞(APC)分泌免疫调节因子,为过敏性哮喘小鼠的免疫治疗提供了良好的基础;2、PLGA-OVA-r848纳米疫苗通过诱导sIgG2a抗体生成阻止sIgE促进的过敏原呈递及特异性结合过敏原抑制过敏性炎症,并有效降低sIgG1含量;3、PLGA-OVA-r848纳米疫苗可有效逆转OVA过敏性哮喘小鼠的2型T辅助细胞(Th2)极化,有效恢复Th2和1型T辅助细胞(Th1)之间的平衡,改善过敏性哮喘小鼠的过敏性炎症;4、PLGA-OVA-r848纳米疫苗抑制体内过敏原特异性淋巴细胞的过度增殖,有效抑制过度、过强的免疫反应;5、PLGA-OVA-r848纳米疫苗促进过敏原特异性Tregs的增殖,有效调节不利的免疫反应。

关键词：过敏性哮喘过敏原免疫疗法舌下免疫治疗纳米疫苗 r848

r848对胸腺基质淋巴细胞生成素调控Naive T细胞分化的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2016年第5期37卷 671-677页

作者：陈壮桂邹小玲潘莉冯定云杨丽芬黎雅婷张天托中山大学附属第三医院儿科广东广州510630 中山大学附属第三医院呼吸内科广东广州510630

【目的】探讨咪喹莫特类似物r848对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)介导Naive T细胞分化的影响。【方法】从健康志愿者外周血中提取单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选出CD14+PBMC,随后用不同因素诱导分化为成熟树突状细胞(DC);另用免疫磁珠... 详细信息

【目的】探讨咪喹莫特类似物r848对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)介导Naive T细胞分化的影响。【方法】从健康志愿者外周血中提取单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选出CD14+PBMC,随后用不同因素诱导分化为成熟树突状细胞(DC);另用免疫磁珠阴性分选出Na觙ve T细胞后,将其与诱导分化后的DC共培养,并分组:A组为Naive T+PBS/DC;B组为Naive T+TSLP/DC;C组为Naive T+(TSLP+r848)/DC;D组为Na觙veT+(TSLP+anti-OX40L)/DC。ELISA检测上清液细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-13水平,荧光定量rT-PCr测定转录因子GATA-3及T-bet m rNA的表达。【结果】(1)TSLP诱导后DC表达OX40L增加,而r848可抑制OX40L表达(P0.05)。(3)C组和D组GATA-3 m rNA水平均低于B组,但高于空白对照A组,其中D组GATA-3 m rNA水平高于C组;C组表达T-bet m rNA水平高于其余三组(均P0.05)。【结论】TSLP通过上调人DC表达OX40L,在转录因子水平介导Na觙ve T细胞向Th2细胞分化;这种TSLP介导的Th2细胞优势反应可被r848所抑制。

关键词：支气管哮喘 T淋巴细胞细胞分化胸腺基质淋巴细胞生成素 r848

r848协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞功能改变

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免疫学杂志 2014年第5期30卷 393-396页

作者：李剑余秀雪陈殿慧吴凡李璐谢红艳黄俊广州医科大学基础医学院病原学与免疫学教研室 510182 广州医科大学基础医学院机能学实验中心

目的观察并初步分析1-[4-amino-2-(ethoxymethyl)imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-2-methylpropan-2-ol(r848)协同CD3抗体诱导C57BL/6小鼠脾脏中淋巴细胞发生的功能改变。方法分离正常C57BL/6小鼠脾脏的淋巴细胞,分别在anti-CD3、r848及anti-CD3+r848的作用下培养72 h。通过MTT法观察淋巴细胞的增殖情况;采用ELISA的方法检测脾脏淋巴细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;使用细胞内细胞因子染色的方法检测CD4+T和CD8+T细胞的IFN-γ和IL-4的产生情况;再用细胞表面分子染色的方法检测r848诱导不同淋巴细胞群活化的情况。结果单独使用r848对淋巴细胞的增殖作用不明显,但anti-CD3+r848可促进淋巴细胞的增殖;r848能辅助anti-CD3明显诱导脾CD4+T和CD8+T细胞分泌IFN-γ和IL-4;r848能够使淋巴细胞活化,且以B细胞亚群为主。结论 r848能够协助CD3抗体促进脾脏淋巴细胞的增殖,分泌IFN-γ和IL-4,其机制与r848能明显促进B淋巴细胞活化有关。

关键词： r848 T细胞 B细胞增殖细胞因子

重组MUC1-MBP融合蛋白联合r848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用

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吉林大学学报（医学版） 2017年第3期43卷 507-511页

作者：孙敏英刘果木接晶谢飞翟瑞萍陈潭秀袁红艳台桂香吉林大学基础医学院医学生物学实验中心吉林长春130021 吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

目的:研究MUC1-MBP联合TLr7/8激动剂r848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用,为寻找重组MUC1-MBP融合蛋白的合适佐剂提供实验依据。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为对照组(注射生理盐水)、MUC1-MBP+r848组(注射MUC1-MBP+r848)和MUC1-MBP+卡介... 详细信息

目的:研究MUC1-MBP联合TLr7/8激动剂r848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用,为寻找重组MUC1-MBP融合蛋白的合适佐剂提供实验依据。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为对照组(注射生理盐水)、MUC1-MBP+r848组(注射MUC1-MBP+r848)和MUC1-MBP+卡介苗(BCG)组(注射MUC1-MBP+BCG),每组7只。第2次免疫后第4~7天无菌取脾脏组织,测定脾指数;淋巴细胞增殖反应测定各组小鼠的刺激指数(SI);ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清中肿瘤坏死因子γ(TNF-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;流式细胞术检测小鼠脾细胞中T淋巴细胞亚群比例。结果:与对照组比较,MUC1-MBP+r848组和MUC1-MBP+BCG组小鼠脾指数均升高(Pr848组小鼠上述指标高于MUC1-MBP+BCG组(P0.05)。与对照组比较,MUC1-MBP+r848组和MUC1-MBP+BCG小鼠脾细胞中CD3^+细胞、CD4^+细胞和CD8^+细胞比例明显升高(Pr848或BCG均能诱导小鼠倾向于Th1的细胞免疫应答反应,r848是良好的MUC1-MBP候选佐剂分子。

关键词： MUC1-MBP r848 肿瘤疫苗佐剂

TLr7/8配体(r848)对人NK细胞杀伤功能的作用及其机制的探讨

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免疫学杂志 2010年第8期26卷 657-660页

作者：范艳莹付笑迎尹凌凡刘昀吴长有中山大学中山医学院免疫学教研室热带病防治研究教育部重点实验室广州510080

目的研究r848对人自然杀伤细胞(NK)杀伤功能的作用及其机制。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)、纯化NK细胞,加或不加r848进行培养。分别在0、2、6、24、48h收集培养细胞,流式细胞术检测r848对NK细胞表面活化分子CD25和CD69表... 详细信息

目的研究r848对人自然杀伤细胞(NK)杀伤功能的作用及其机制。方法分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)、纯化NK细胞,加或不加r848进行培养。分别在0、2、6、24、48h收集培养细胞,流式细胞术检测r848对NK细胞表面活化分子CD25和CD69表达的影响;检测r848活化的NK细胞杀伤靶细胞K562的作用、通过检测颗粒酶A、B、穿孔素、TrAIL和NK细胞与靶细胞共孵育后CD107a/b的表达,探讨r848促进NK细胞的杀伤功能机制。结果 r848活化的NK细胞在培养24h时CD69和CD25分子的表达百分率和平均荧光密度达到峰值,随后活化分子的表达有所下降;r848活化的NK细胞对靶细胞的杀伤功能明显增强,TrAIL在不同NK细胞亚群的表达显著增加(Pr848活化的NK细胞表面CD107a/b的表达较未刺激条件明显增加。结论 r848可直接作用于NK细胞促进其杀伤功能,其作用机制与NK细胞活化后释放颗粒酶和穿孔素增加,并且TrAIL的表达增加有关。

关键词： NK细胞 TLr r848 杀伤功能

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r848对变应性鼻炎的作用及机制研究

R848对变应性鼻炎的作用及机制研究

作者：覃泰杰广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:resiquimod（r848）是一种Toll-like receptor7/8（TLr7/8）激动剂,目前研究表明r848具有抑制2型免疫的巨大潜能,但具体作用机制尚未十分清楚。本实验研究r848对卵清蛋（ovalbumin,OVA）和重组小鼠IL-33（recombinant mouse IL-33,rmIL-33）构建的小鼠变应性鼻炎（allergic rhinitis,Ar）的作用及机制。方法:利用OVA和rmIL-33构建BALB/c小鼠Ar模型,用r848进行干预治疗。用末次rmIL-33滴鼻打喷嚏和抓鼻子计数评估rmIL-33刺激小鼠鼻部症状改变,Hematoxylin and eosin（H＆E）和Periodic Acid-Schiff（PAS）染色分别检测小鼠鼻黏膜嗜酸性粒细胞浸润、杯状细胞增生情况,免疫荧光染色（immunofluorescence staining,IF）检测鼻部ST2的表达水平,酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）检测血清中上皮细胞来源的细胞因子IL-33、IL-25、TLSP水平和IFN-γ、IL-17水平,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测脾脏Th1、Th2、Treg和Th17细胞比例,实时荧光PCr（quantitative real-time rT-PCr,qrT-PCr）检测鼻粘膜IFN-γ、IL-17、Foxp3 mrNA表达水平。结果:r848降低OVA致敏引起的IL-25、IL-33和ST2的表达,升高OVA致敏小鼠的Th1/Th2细胞比例;减轻rmIL-33刺激引起的鼻部症状,减少rmIL-33刺激小鼠嗜酸性粒细胞在鼻粘膜的浸润、杯状细胞的增生和鼻黏膜ST2的表达,逆转rmIL-33引起的淋巴细胞增值分化、血清炎症因子及其在鼻粘膜局部mrNA表达水平的变化。结论:r848可能通过抑制IL-33/ST2信号有效地缓解变应性鼻炎。

关键词：变应性鼻炎 r848 IL-33 ST2 IL-25

Poly（I：C）与r848对大鼠脊髓小胶质细胞活性的影响

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中华神经医学杂志 2009年第8期8卷 764-768页

作者：苏艳华张志明张智仁赵本华厦门大学医学院预防医学系厦门361005 广东省佛山市顺德职业技术学院医学系 528300 72076德国Tuebingen大学脑研究所

目的研究Toll样受体3（TLr3）配体多聚肌胞苷酸[Poly（I：C）]与TLr7／8配体r848对小胶质细胞（MG）活性的影响。方法6～8周龄Lewis大鼠30只分为Poly（I：C）组（12只）、r848组（15只）和对照组（3只），前两组大鼠根据处死时间的不同... 详细信息

目的研究Toll样受体3（TLr3）配体多聚肌胞苷酸[Poly（I：C）]与TLr7／8配体r848对小胶质细胞（MG）活性的影响。方法6～8周龄Lewis大鼠30只分为Poly（I：C）组（12只）、r848组（15只）和对照组（3只），前两组大鼠根据处死时间的不同分别分为4、5个亚组，每亚组3只，分别单次腹腔注射1mLPoly（I：C）（5mg／kg）和r848（1mg／kg），对照组注射等量PBS；应用免疫组化检测大鼠脊髓内ED-1、同种异体移植炎性因子-1（AIF-1）、血管内皮单核细胞活化肽Ⅱ（EMAPⅡ）、OX-6和P2X4r的表达，应用免疫组化双染染色检测增殖的MG。结果与对照组相比，Poly（I：C）组和r848组注药后第4天ED-1^＋的MG明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05），Poly（I：C）组与r848组仅观察到少量EMAPⅡ^＋细胞，未观察到AIF-1^＋、OX6^＋、P2X4r^＋细胞，对照组未观察到EMAPII^＋、AIF-1^＋、OX6^＋及P2X4r^＋细胞：免疫组化双染显示Poly（I：C）组和r848组大鼠注射后第4天脊髓有少量BrdU^＋／ED-1^＋双染细胞，提示仅有少量MG增殖。结论TLr配体外周给药后可作用于脊髓内的固有免疫系统，进而影响脊髓内MG的免疫活性，提示这类制剂对调节脊髓损伤组织的再生修复有一定价值。

关键词：多聚肌胞苷酸 r848 小胶质细胞脊髓

Pam3CSK4、LPS及r848联合应用对巨噬细胞极化的影响

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Pam3CSK4、LPS及R848联合应用对巨噬细胞极化的影响

作者：杨晓宇吉林大学

学位级别：硕士

随着对TLr样受体（Toll-like receptor）调节免疫细胞活化的研究逐步深入,TLrs配体作为免疫佐剂用于肿瘤免疫治疗中已取得了一定疗效。这些TLr配体可以单独使用,为进一步增强疫苗的免疫效果,也可将他们联合使用。但是,TLrs配体的联合使... 详细信息

随着对TLr样受体（Toll-like receptor）调节免疫细胞活化的研究逐步深入,TLrs配体作为免疫佐剂用于肿瘤免疫治疗中已取得了一定疗效。这些TLr配体可以单独使用,为进一步增强疫苗的免疫效果,也可将他们联合使用。但是,TLrs配体的联合使用对免疫细胞活性的调节作用可能为相互协同、亦可能为相互拮抗;同样的TLrs配体在不同的免疫细胞上可以产生不同的作用;即使在同一免疫细胞上。巨噬细胞在肿瘤的发生发展中具有重要的作用,不同极化类型的巨噬细胞对肿瘤的发展具有不同的作用,而研究TLrs配体联合应用在M2型巨噬细胞表型转化中的调控作用将为肿瘤免疫治疗提供新策略。本研究采用TLr2激动剂（Pam3CSK4）、TLr4激动剂（LPS）以及TLr7/8激动剂（r848）体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞及rAW264.7,通过Griess法检测巨噬细胞分泌NO含量、采用qPCr结合ELISA法检测M1/M2型巨噬细胞标记分子,从而分析三种TLrs激动剂联用后对于巨噬细胞活化及极化的影响。结果显示,与Pam3CSK4、LPS及r848单独处理组及两两结合组相比,三者联用后使NO、IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平显著增加,提示它们可协同活化巨噬细胞;同时,三者联合后的M1型巨噬细胞标志iNOS、IL-12表达显著上调,而M2型标志Arg-1、IL-10的表达水平显著下降,提示Pam3CSK4、LPS及r848联合可促进巨噬细胞向M1型极化。进一步,以Lewis肺癌细胞培养上清模拟肿瘤微环境诱导小鼠腹腔巨噬细胞构建M2型巨噬细胞模型。然后再加入Pam3CSK4、LPS及r848,通过分析M1/M2巨噬细胞表型标志,探讨三者联用对于M2型巨噬细胞翻转能力的影响。结果显示,Pam3CSK4、LPS及r848单独使用时不足以逆转M2型巨噬细胞向M1型极化,两种激动剂联用可一定程度翻转,而三者联用时诱导产生的M1型巨噬细胞炎症因子更高。以上结果提示Pam3CSK4、LPS及r848联用可调控M2型翻转向M1型。最后,我们以TrAF3及TrAF6的平衡为切入点,初步探讨了Pam3CSK4、LPS及r848联合诱导促进巨噬细胞M1极化的机制,采用qPCr法联合western blot检测了MyD88、TrIF、TrAF3及TrAF6的表达含量。结果表明,Pam3CSK4、LPS及r848联合后显著上调TrIF、TrAF6表达及p-IκB/IκB比例,部分上调MyD88,同时下调TrAF3表达。提示TrAF3和TrAF6的平衡可能在调控巨噬细胞极化方面具有重要作用。本研究不仅揭示Pam3CSK4、LPS及r848联用可直接诱导M1型巨噬细胞极化,更揭示三者联用可逆转M2型巨噬细胞向M1型极化,研究为基于TLrs激动剂联合应用开发的新型免疫增强剂提供理论依据,并可以此为依据为肿瘤治疗提供新策略。

关键词： Pam3CSK4 LPS r848 巨噬细胞极化