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Molecular cloning,expressional profiling,DNA binding and trans-activation property studies of qrap2 from Arabidopsis thaliana

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Science Bulletin 2005年第17期 59-64页

作者： WEI Gang, LEI Juan, GONG Wei & ZHU Yuxian National Laboratory of Protein Engineering and Plant Genetic Engineer-ing, College of Life Sciences, Peking University, Beijing 100871, China

Based upon analysis of data obtained from theATH1 microarrays, a cDNA that was highly induced afterdrought treatment, was isolated from Arabidopsis ***-PCR and Quantitative Real-Time (QRT)-PCR experi-ments showed that expression level of the gene increasedsignificantly upon drought, UV, abscisic acid, high salinityand salicylic acid treatments. It was classified as a DREBsubfamily member based on multiple sequence alignmentand phylogenetic characterization. Since it encoded a proteinwith a typical ERF/AP2 DNA-binding domain and containeda glutamine-rich region near its N terminus, we named itqrap2 (for glutamine-rich AP2). Gel retardation assay re-vealed that qrap2 was able to form a specific complex withthe previously characterized DRE element while did notshow any affinity to the GCC box or the mutant DRE *** fused to the GAL4 DNA-binding domain, either full-length qrap2 or its N-terminus functioned effectively as atrans-activator in the yeast one-hybrid assay with its C-ter-minus completely inactive. Our data indicate that qrap2could be a new member of the AP2/EREBP transcriptionfactor family involved in activation of down-stream targetgenes in response to environmental stress, especially underdrought conditions.

关键词： qrap2 stress DREB one-hybrid transcription factor.

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拟南芥qrap2基因的克隆、表达、DNA结合能力及体外转录活性分析

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科学通报 2005年第17期50卷 1863-1868页

作者：魏刚雷娟巩威朱玉贤北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871

通过对拟南芥ATH1基因芯片数据的分析,从拟南芥中鉴定到一个受干旱胁迫高水平诱导的cDNA片段,并用RACE方法获得了其全长***及定量实时PCR分析表明,该基因在经干旱、紫外线照射、脱落酸、高盐以及水杨酸等胁迫条件处理后表达量均有显著提... 详细信息

通过对拟南芥ATH1基因芯片数据的分析,从拟南芥中鉴定到一个受干旱胁迫高水平诱导的cDNA片段,并用RACE方法获得了其全长***及定量实时PCR分析表明,该基因在经干旱、紫外线照射、脱落酸、高盐以及水杨酸等胁迫条件处理后表达量均有显著提高,特别是干旱处理后短时间内表达量迅速提高,3h后即提高到对照样品的430多倍.通过多序列比对和系统进化分析,我们将该基因归于DREB亚家族.由于该基因编码蛋白含有典型的AP2/EREBPDNA结合结构域,并在N端有一段富含谷氨酰氨残基的区域,所以将它命名为qrap2(Glutamine-richAP2).凝胶阻滞实验结果显示,qrap2蛋白能够特异结合DRE顺式元件序列但不能与mDRE和GCC等非相关元件结合.酵母单杂交实验表明,qrap2蛋白全长序列或其N端112个氨基酸与GAL4DNA结合结构域形成的融合蛋白表现出转录激活功能,而其C端135个氨基酸与GAL4DNA结合结构域的融合蛋白则没有表现出转录激活活性.现有资料的分析表明,qrap2是AP2/EREBP转录因子家族的新成员,可能在干旱胁迫条件下参与激活相关下游基因的表达.

关键词： qrap2 胁迫 DREB 酵母单杂交转录因子 cDNA片段基因芯片体外转录拟南芥活性分析

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