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慢病毒介导shRNA沉默qki-6基因对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

现代肿瘤医学 2016年第13期24卷 2011-2014页

作者：柯昌康王武平康树宏白峻峰吕峰倪云峰第四军医大学唐都医院胸腔外科陕西西安710038

目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默qki-6基因对人肺腺癌A549细胞qki-6基因表达、细胞周期、克隆形成和细胞迁移的影响。方法:构建qki-6-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞,阴性对照组转染无意义序列,空白对照组为A549细胞。运用RT-PCR... 详细信息

目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默qki-6基因对人肺腺癌A549细胞qki-6基因表达、细胞周期、克隆形成和细胞迁移的影响。方法:构建qki-6-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞,阴性对照组转染无意义序列,空白对照组为A549细胞。运用RT-PCR及Western blot检测各组细胞qki-6 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期,琼脂成瘤实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果:实验组qki-6 mRNA及蛋白表达均较阴性对照组及空白对照组降低。实验组较阴性对照组及空白对照组,G_0/G_1期细胞比例降低(Pqki-6能够抑制肺腺癌细胞生长、克隆形成及迁移,qki-6有望成为肺癌治疗的新靶点。

关键词：肺癌 qki-6 细胞周期克隆形成迁移

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山羊qki基因家族克隆及其在骨骼肌发育中的表达模式

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农业生物技术学报 2021年第8期29卷 1546-1556页

作者：薛亚男翟泓帆唐敏杨辰宇周欣怡李利张红平占思远四川农业大学畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室

qki (quaking)是RNA结合蛋白家族的成员之一,参与调控细胞增殖、分化与凋亡等过程。为了探究qki家族基因在山羊(Capra hircus)肌肉发育中的生物学功能,本研究以简州大耳羊为研究对象,采用TA克隆技术获得山羊qki家族基因的编码区序列,并... 详细信息

qki (quaking)是RNA结合蛋白家族的成员之一,参与调控细胞增殖、分化与凋亡等过程。为了探究qki家族基因在山羊(Capra hircus)肌肉发育中的生物学功能,本研究以简州大耳羊为研究对象,采用TA克隆技术获得山羊qki家族基因的编码区序列,并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR和Western blot检测qki家族基因在出生后3 d不同组织(大脑,心脏,肝脏,脾脏,肺脏,肾脏,背最长肌,半膜肌,半腱肌,腓肠肌,腰大肌和内收肌)和不同发育阶段(胚胎期90 d, 105 d, 135 d和出生后3 d, 150 d)半膜肌中的表达,及其在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells, SMSCs)增殖分化过程中的表达。结果发现,山羊qki-5 (GenBank No. MW651981)、qki-6 (GenBank No. MW651982)和qki-7 (GenBank ***651983)的完整编码区分别为1 026、978和960 bp,依次编码341、325和319个氨基酸;核苷酸序列比对发现,qki-5、qki-6和qki-7在物种间高度保守,且与绵羊(Ovis aries)和牛(Bos taurus)的亲缘关系最近;山羊qki-5、qki-6和qki-7蛋白二级和三级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,存在1个共同的保守功能结构域—KH (K homology)结构域。qRT-PCR结果表明,qki-5、qki-6和qki-7基因在山羊骨骼肌组织中的表达显著高于其他组织(Pqki-5、qki-6和qki-7呈现先升后降的表达趋势,出生3 d表达量最高(Pqki-5蛋白仅在山羊骨骼肌组织中检测到表达,且主要在出生后表达。此外,qki-5、qki-6和qki-7基因在山羊SMSCs增殖分化过程中均呈现持续上升的表达趋势,分化7 d达到峰值(Pqki-5、qki-6和qki-7基因的编码区全序列,初步揭示了qki-5、qki-6和qki-7基因在山羊骨骼肌组织中的高表达,以及在山羊SMSCs增殖分化过程中持续上升的表达规律,表明qki家族基因可能在山羊骨骼肌发育过程中发挥重要作用。本研究为后续开展qki调控山羊肌肉发育的分子机理提供了基础资料。

关键词：山羊 qki-5 qki-6 qki-7 克隆基因表达

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