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Protein-protein Interaction Between Domains of PDZ and BAR from PICK1

Chemical Research in Chinese Universities 2007年第2期23卷 191-195页

作者： XIAO Hong SHI Ya-wei WANG Li-li YUAN Jing-ming Institute of Biotechnology Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering of National Ministry of Education Shanxi University Taiyuan 030006 P. R. China

Two DNA fragments encoding PDZ domain （21-110 residues） and BAR domain （ 150-360 residues） from PICK1 （1-416 residues） were amplified by PCR and then introduced into vectors, pET-32M and pMAL-e2X respectively to generate recombinant plasmids, pE-pdz and pM-bar. Having been separately transferred into the hosts E. coli BL21 and E. coli JM109, these two strains can express fusion proteins： His-tagged PDZ（PDZ domain） and maltose binding protein-BAR（ MBP-BAR domain） respectively, as confirmed by both SDS-PAGE and Wostem blotting. The interaction between these two domains is dose-dependence, as identified by a pull-down test. Moreover, it has been shown from the ELISA analysis that the actual amount of PDZ bound to MBP-BAR-amylose beads reaches （ 16 ± 0. 5）%, as calculated by the molar ratio of PDZ to MBP-BAR. In addition, the interaction between BAR（bait） and PDZ（prey） in vivo was also examined with a yeast two-hybrid system.

关键词： BAR domain PDZ domain PICK1 Protein-protein interaction pull-down test Yeast two-hybrid

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