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蛋白质相互作用研究的常用方法进展及比较

中国当代医药 2012年第14期19卷 18-20页

作者：涂占晗林旭福建医科大学基础医学院福建福州350008

如今蛋白质间的相互作用已成为生命科学领域研究的重点,而各种蛋白质间相互作用的研究方法的飞速发展成为蛋白质研究的重点。本综述中将着眼于酵母双杂交方法新进发展与Sos系统、噬菌体展示、GST-pull down、免疫共沉淀、串联亲和纯化... 详细信息

如今蛋白质间的相互作用已成为生命科学领域研究的重点,而各种蛋白质间相互作用的研究方法的飞速发展成为蛋白质研究的重点。本综述中将着眼于酵母双杂交方法新进发展与Sos系统、噬菌体展示、GST-pull down、免疫共沉淀、串联亲和纯化等蛋白质相互作用研究方法做一比较分析。以便在未来的研究中,根据不同方法的优缺点选择合适的研究技术。

关键词：酵母双杂交 Sos系统噬菌体展示 GST pull-down 免疫共沉淀串联亲和纯化

黄花棘豆OoABF2与OoSnRK2s蛋白互作研究

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黄花棘豆OoABF2与OoSnRK2s蛋白互作研究

陕西省毒理学会防控毒物危害与优化生态环境研讨会

作者：杨友锋牛斐傅艳萍尉亚辉西北大学生命科学学院西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室

黄花棘豆作为主要的草原毒害草之一,由于其自身极强的抗逆性和适应性而广泛蔓延。本文以ABA信号通路的核心组分OoABF2转录因子为研究切入点,筛选并克隆出上游的调控基因SnRK2激酶家族的8个基因OoSnRK2.1-OoSnRK2.8。利用酵母双杂交、双... 详细信息

黄花棘豆作为主要的草原毒害草之一,由于其自身极强的抗逆性和适应性而广泛蔓延。本文以ABA信号通路的核心组分OoABF2转录因子为研究切入点,筛选并克隆出上游的调控基因SnRK2激酶家族的8个基因OoSnRK2.1-OoSnRK2.8。利用酵母双杂交、双分子荧光互补和pull-down试验对OoABF2与OoSnRK2s的互作进行筛选与验证结果表明OoABF2与OoSnRK2.1和OoSnRK2.6存在相互作用且作用位点在细胞核。该结论为解析黄花棘豆ABA信号通路奠定了基础。

关键词：黄花棘豆 OoABF2 OoSnRKs 酵母双杂交双分子荧光互补 pull-down

IRSp53和MIM同源结构域IMD相互作用蛋白质的鉴定

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激光生物学报 2009年第3期18卷 359-364页

作者：钟娈娈石妮梁宋平王迎湖南师范大学生命科学学院

IRSp53（胰岛素受体酪氨酸激酶底物）和MIM（肿瘤转移消失蛋白）的同源结构域（IMD结构域）在IR—Sp53／MIM家族调控肌动蛋白动态变化的过程中起重要作用。IMD结构域具有使肌动蛋白纤维成束的活性，与小分子GTPase家族Racl也存在相互作... 详细信息

IRSp53（胰岛素受体酪氨酸激酶底物）和MIM（肿瘤转移消失蛋白）的同源结构域（IMD结构域）在IR—Sp53／MIM家族调控肌动蛋白动态变化的过程中起重要作用。IMD结构域具有使肌动蛋白纤维成束的活性，与小分子GTPase家族Racl也存在相互作用。然而，IMD结构域是否存在其它相互作用蛋白并不清楚。本研究利用GST pull down技术结合质谱分析从大鼠小脑中筛选IMD结构域的相互作用蛋白，得到了几个候选蛋白。其中，神经发育中下调蛋白NEDD9与IRSp53及MIM在小脑中存在类似的分布，体外实验进一步证明了两者之间的相互作用，暗示NEDD9是一种新的IMD结构域相互作用蛋白质。

关键词： IMD功能域 NEDD9 GST pull-down

钙调蛋白对电压门控性钠通道Na_V 1.1的调节作用

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解剖科学进展 2019年第2期25卷 213-215,219页

作者：年青洋李佳宁佟欣邓海东贾婉莹赵东仪刘君妍张诗琪张晓红郭凤中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110122

目的探讨钙调蛋白对通道的调节功能,分析钙调蛋白与Na_V1.1 IQ在不同Ca^(2+)离子浓度下的结合情况,进一步探讨钙调蛋白和Na_V1.1结合的Ca^(2+)依赖性。方法应用pull-down技术检测不同Ca^(2+)离子浓度下Na_V1.1 IQ与钙调蛋白及其突变体... 详细信息

目的探讨钙调蛋白对通道的调节功能,分析钙调蛋白与Na_V1.1 IQ在不同Ca^(2+)离子浓度下的结合情况,进一步探讨钙调蛋白和Na_V1.1结合的Ca^(2+)依赖性。方法应用pull-down技术检测不同Ca^(2+)离子浓度下Na_V1.1 IQ与钙调蛋白及其突变体的结合情况。结果 CaM野生型与Nav1.1 IQ基序的结合随着钙浓度和CaM浓度的增加而增高,而CaM 1234与Nav1.1 IQ的结合也随着CaM_(1234)浓度的增加而增高,但在不同钙浓度下的结合无变化。结论 CaM野生型和CaM_(1234)对电压门控性钠通道Nav1.1具有调节作用。

关键词：钙调蛋白 pull-down NaV1.1 IQ 钙离子

暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）中脂滴包被蛋白CsCap20与乙酸激酶CsAck的互作验证

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暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）中脂滴包被蛋白CsCap20与...

中国植物病理学会2021年学术年会

作者：王娜王记圆宋苗刘文波李志刚李潇林春花缪卫国海南大学热带农林学院热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室

附着胞是炭疽菌等许多重要病原真菌的重要侵染结构,能否形成成熟附着胞与病原菌穿透寄主表皮形成寄生关系具有重要作用。暹罗炭疽菌是我国橡胶树田间优势病原种类,前期研究显示该病原菌的脂滴包被蛋白（CsCap20）与病原真菌附着胞膨压... 详细信息

附着胞是炭疽菌等许多重要病原真菌的重要侵染结构,能否形成成熟附着胞与病原菌穿透寄主表皮形成寄生关系具有重要作用。暹罗炭疽菌是我国橡胶树田间优势病原种类,前期研究显示该病原菌的脂滴包被蛋白（CsCap20）与病原真菌附着胞膨压的形成有关,影响病菌穿透寄主能力和致病力。为了进一步了解该脂滴包被蛋白的调控机制,本课题组前期通过酵母双杂交技术从橡胶树炭疽菌cDNA文库中筛选到16个与CsCap20互作的候选蛋白,本研究从中选取了乙酸激酶CsAck （Acetate kinase）利用pull-down和Co-IP （Co-Immunoprecipitation）技术进行体外和体内互作验证。研究结果进一步证明了脂滴包被蛋白CsCap20与乙酸激酶CsAck确实存在互作关系,为进一步研究炭疽菌脂滴包被蛋白CsCap20是否受到乙酸激酶CsAck的调控提供基础。

关键词：暹罗炭疽菌 CsCap20 CsAck 蛋白互作 pull-down Co-IP

家蚕HMGA（BmHMGA）表达及功能初步研究

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家蚕HMGA（BmHMGA）表达及功能初步研究

华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会

作者：赵燕童富淡浙江理工大学

＜正＞高迁移率族蛋白（high mobility group protein,HMG）是一系列染色质相关蛋白质,广泛存在于真核生物中,含量丰富,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中具有较高的迁移能力而得名,包括HMGA、HMGB和HMGN 3个家族。HMGA家族的每种蛋... 详细信息

＜正＞高迁移率族蛋白（high mobility group protein,HMG）是一系列染色质相关蛋白质,广泛存在于真核生物中,含量丰富,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中具有较高的迁移能力而得名,包括HMGA、HMGB和HMGN 3个家族。HMGA家族的每种蛋白质都含有3个高度

关键词： BmHMGA 重组质粒 Western blotting pull-down

麻疹病毒血凝集素、融合蛋白及其细胞受体SLAM相互作用表明新的融合三聚体模型

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麻疹病毒血凝集素、融合蛋白及其细胞受体SLAM相互作用表明新的融...

湖北省生物工程学会2004年年会

作者：张鹏李凌云胡淳玲齐义鹏武汉大学生命科学学院教育部病毒学重点实验室分子病毒组

对于麻疹病毒来说,细胞融合是感染细胞中一个重要的步骤。最近的研究表明血凝集素蛋白首先引起融合蛋白的构象变化并共同引起融合。在本研究中,我们利用免疫共沉淀和pull—down技术以证明在血凝集素蛋白,融合蛋白和SLAM之间的相互作用... 详细信息

对于麻疹病毒来说,细胞融合是感染细胞中一个重要的步骤。最近的研究表明血凝集素蛋白首先引起融合蛋白的构象变化并共同引起融合。在本研究中,我们利用免疫共沉淀和pull—down技术以证明在血凝集素蛋白,融合蛋白和SLAM之间的相互作用。结果表明这三种蛋白能形成一个功能三聚体来共同介导融合。并且,融合蛋白不仅和

关键词：三聚体模型免疫共沉淀 pull-down co-capping 共聚焦

Ezrin的原核表达及与其相互作用蛋白的研究

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Ezrin的原核表达及与其相互作用蛋白的研究

山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议

作者：周小艳韩金祥崔亚洲钟宁山东省医学科学院山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室

目的体外筛选人胰腺癌细胞中与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。方法提取人胰腺癌Panc-1细胞总RNA,RT-PCR法扩增Ezrin基因。将扩增得到的Ezrin基因片段和pET15b质粒转化*** DH5a,获得pET15b-Ezrin重组质粒,双酶切后测序鉴定。将测序正确的重... 详细信息

目的体外筛选人胰腺癌细胞中与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。方法提取人胰腺癌Panc-1细胞总RNA,RT-PCR法扩增Ezrin基因。将扩增得到的Ezrin基因片段和pET15b质粒转化*** DH5a,获得pET15b-Ezrin重组质粒,双酶切后测序鉴定。将测序正确的重组质粒转化至*** BL21-CodonPlus（DE3）-RIL,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达,对表达产物进行Ni2+-NTA亲和层析和分子筛纯化后,行SDS-PAGE、MALDI-TOF-MS/MS质谱分析和蛋白质印迹鉴定。裂解Panc-1细胞,获得总蛋白提取液,采用pull-down方法体外筛选与Ezrin重组蛋白相互作用的蛋白,并对筛选出的目的蛋白进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF-MS/MS质谱鉴定。结果RT-PCR扩增出的Ezrin基因片段（1761 bp）与理论DNA表达片段大小一致,测序鉴定显示克隆的Ezrin基因序列与GenBank报道序列相符。SDS-PAGE、质谱分析和蛋白质印迹分析显示纯化后Ezrin重组蛋白相对分子质量为69400,与质谱分析的相对分子质量结果相符,为带有His-6标签的特异蛋白。双向凝胶电泳和质谱鉴定结果共筛选出可与Ezrin重组蛋白相互作用的7种蛋白,其分别为RNA-binding motif protein39（RBM39）、Transgelin（TAGLN）、Albumin（ALBU）、Formin-1（FMN 1）、Rho GTPases（RHGBA）、Tetratricopeptide repeat protein 16（TTC16）、Syntaxin-binding protein 1（STXBP1）。结论在大肠杆菌中成功表达、纯化了Ezrin蛋白,并在体外成功筛选出可信的与Ezrin蛋白相互作用的蛋白。

关键词： Ezrin 原核表达相互作用 pull-down 双向电泳

利用酵母双杂交技术筛选与hPOT1相互作用的新蛋白

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生物技术通讯 2011年第3期22卷 375-378页

作者：杨平勋马航航金蕊白云秀黄翠芬黄君健军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的:利用酵母双杂交系统筛选与人POT1(human protection of telomeres 1,hPOT1)相互作用的蛋白。方法:以hPOT1的300～634氨基酸片段为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与hPOT1相互作用的蛋白质;运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal实验排除... 详细信息

目的:利用酵母双杂交系统筛选与人POT1(human protection of telomeres 1,hPOT1)相互作用的蛋白。方法:以hPOT1的300～634氨基酸片段为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与hPOT1相互作用的蛋白质;运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对。结果:经过酵母双杂交筛选,发现7个与hPOT1相互作用的蛋白;选取NM23B与hPOT1通过GST-pull down和免疫共沉淀进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用。结论:hPOT1能与NM23B发生相互作用,在此实验基础上可以进一步研究NM23B与hPOT1相互作用的生物学意义。

关键词：人POT1 酵母双杂交 NM23B GST pull-down 免疫共沉淀