检索结果-南通市图书馆

作者：姚尧广州医科大学

学位级别：硕士

小鼠胚胎干细胞（mouse Embryonic Stem Cell,m ESCs）是小鼠胚胎着床前晚期胚泡的内部细胞团中分离出来的,可以在体外培养,具有多能性及自我更新能力,即在体外具有无限自我复制的增殖能力和多向分化的能力的细胞。从内细胞团中分离出... 详细信息

小鼠胚胎干细胞（mouse Embryonic Stem Cell,m ESCs）是小鼠胚胎着床前晚期胚泡的内部细胞团中分离出来的,可以在体外培养,具有多能性及自我更新能力,即在体外具有无限自我复制的增殖能力和多向分化的能力的细胞。从内细胞团中分离出来并注射到囊胚内具有形成嵌合体细胞或组织的能力的ESCs,这类细胞发育状态被称为na（?）ve状态。而取自小鼠胚胎上胚层细胞的干细胞（mouse Epiblast Stem Cell,m Epi SCs）注射到囊胚后不能形成嵌合体细胞,这种小鼠胚胎发育状态称为primed状态。研究小鼠胚胎primed状态向na（?）ve状态的转变,筛选促进转变的条件,从而提高na（?）ve状态胚胎干细胞的获得效率,为人源胚胎干细胞的primed-na（?）ve转变打下基础。利用胚胎干细胞通过异种嵌合获得组织或器官,特别是人源的胚胎干细胞,能嵌合获得人源的组织或器官,为再生医学领域及人造器官医疗事业提供更多的选择。钙离子是细胞内重要的离子之一,高度参与细胞生长发育过程,维持细胞生理活动,对细胞具有重要意义。调节细胞内钙离子的方式之一就是通过钙离子通道,电压门控钙离子通道（Voltage-Gated Calcium Channel,VGCC）通过调节细胞内钙离子含量,对细胞生长发育过程中的增殖、分化及新陈代谢具有重要影响。VGCC中L型钙通道被广泛研究与应用,L型钙通道的拮抗剂被称为CCBs,是研究各类神经性,心血管类等疾病方面的重要药物;L型钙通道的常用激动剂是Bay K 8644,在研究中主要作为CCBs的对照组,对其在机制研究方面并没有过多相关报道。钙通道对细胞生长发育具有重要的调节作用,在维持胚胎干细胞多能性状态也有着重要的作用。但是,关于胚胎干细胞内Ca调节促进胚胎干细胞由primed状态向na（?）ve状态转变的分子机制,目前尚未有相关研究报道。L型钙通道对胚胎干细胞的状态转变的作用是什么,激活了哪些关键下游基因,通过哪些细胞通路来发挥作用?本课题组前期已建立过表达Klf4诱导prime向na（?）ve转变（PNT转变）的体系,为探究该问题,我们在此转变体系基础上进行研究。对Epi+Klf4细胞感染测Ca质粒XCa Mp-R,对PNT转变过程中的细胞钙离子变化进行监测,发现在PNT转变早期细胞内Ca含量随天数逐渐升高,随着转变成功,细胞内的Ca含量降低至钙稳定状态。我们进一步检测细胞质钙离子升高可能来自细胞钙库内质网,我们抑制内质网上钙离子释放通道能显著抑制细胞质钙离子的升高。Bay K 8644是L型钙通道的激动剂,通过增加通道开放来增加细胞外Ca向细胞的内流,通过流式细胞技术,对加入Bay K 8644的PNT体系进行转变效率的检测,结果显示,相比于对照组加入Bay K 8644对PNT转变有促进作用。为了探究L型钙通道在PNT中的作用,q RT-PCR初步检测编码L型钙通道α亚基基因的表达情况,结果显示,随着转变天数增加,Cacna1C,Cacna1D和Cacna1S表达量均有明显增加的趋势,进一步探究L型钙通道对PNT的影响,分别对编码L型钙通道亚基的基因进行过表达和敲低,检测其对PNT转变效率的影响,结果显示,过表达钙通道编码基因对PNT转变效率有明显促进作用,而在加入Bay K 8644的情况下对钙通道亚基进行敲低,对PNT转变效率也有明显的抑制效果。以上结果表明,L型钙通道对PNT转变效率具有调节作用,可通过激活L型钙通道促进PNT效率。为进一步研究L型钙通道调节PNT的机制,我们通过q RT-PCR检测已报道的能调控PNT转变的基因表达情况,相较于对照组,Bay K 8644处理组Sp5和Stat3基因在转变早期就有较高的表达且在转变后期表达有明显升高;Klf2,Esrrb以及Gbx2在转变早期加Bay K 8644处理组的表达量并没有对照组高,但转变后期表达量升高并超过对照组的表达量。这些数据表明L型钙通道可能通过Sp5和Stat3促进PNT转变,具体的机制还需要进一步的研究。之后通过蛋白质免疫印迹实验对L型钙通道调控的钙离子相关通路及其它钙离子通道进行研究,在Bay K 8644药物处理后,Ca MK2蛋白与ERK蛋白表达加药实验组与对照组并无明显差异,并且细胞膜钙离子外排通道蛋白ATP2B1的表达随着转变天数的增加逐渐增加,说明转变后期荧光克隆稳定形成,细胞内Ca开始外流,细胞内Ca恢复钙稳态,但L型钙通道导致胞质内钙离子升高影响PNT效率,可能并不通过Ca Mk2和ERK信号通路。综上所述,本课题揭示小鼠胚胎干细胞primed状态向na（?）ve状态转变中Ca变化情况,发现Bay K 8644可以促进小鼠胚胎干细胞primed状态向na（?）ve状态转变;Bay K

关键词： primed na(?)ve 胚胎干细胞 L型钙离子通道

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Adenoviral-like genetic elements in Hebeloma circinans and its relationship to other protein primed replicating genomes

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Chinese Medical Journal 1997年第10期 78-78页

ＡｄｅｎｏｖｉｒａｌｌｉｋｅｇｅｎｅｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎＨｅｂｅｌｏｍａｃｉｒｃｉｎａｎｓａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｏｔｈｅｒｐｒｏｔｅｉｎｐｒｉｍｅｄｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇｇｅｎｏｍｅｓＸｉｙ... 详细信息

ＡｄｅｎｏｖｉｒａｌｌｉｋｅｇｅｎｅｔｉｃｅｌｅｍｅｎｔｓｉｎＨｅｂｅｌｏｍａｃｉｒｃｉｎａｎｓａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｔｏｏｔｈｅｒｐｒｏｔｅｉｎｐｒｉｍｅｄｒｅｐｌｉｃａｔｉｎｇｇｅｎｏｍｅｓＸｉｙｕａｎＢａｉ，ＪüｒｇｅｎＳｃｈｒ...

关键词： Adenoviral-like genetic elements other primed its relationship protein Hebeloma

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鸡球虫病疫苗研发新思考

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中国农业大学学报 2023年第6期28卷 1-11页

作者：秦梅汤新明龚玉姣史芳芸王思索勋中国农业大学科学技术发展研究院/中国农业大学学报编辑部北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业大学动物医学院北京100193

虽然球虫激发宿主产生的保护性免疫应答机制已有很多相关研究,但是保护记忆性免疫应答机制这一关键点常常被忽视。高效保护记忆性免疫应答是球虫感染宿主和球虫病疫苗设计的基础。本研究对该领域50年的相关研究进行系统性回顾和分析,提... 详细信息

虽然球虫激发宿主产生的保护性免疫应答机制已有很多相关研究,但是保护记忆性免疫应答机制这一关键点常常被忽视。高效保护记忆性免疫应答是球虫感染宿主和球虫病疫苗设计的基础。本研究对该领域50年的相关研究进行系统性回顾和分析,提出开发高效球虫疫苗的设想和评估候选球虫病疫苗产生高效免疫保护的新策略,该设想和新策略基于产生高效保护性记忆免疫应答的三大关键点,即产生免疫水平的阈值、效应部位以及时间。结果表明:1)球虫病活卵囊疫苗与球虫重组蛋白疫苗、DNA疫苗、以病毒或细菌为载体的球虫病活载体疫苗免疫鸡群激发宿主产生的免疫应答存在本质区别,活卵囊疫苗免疫过的鸡对球虫的感染处于“primed”免疫状态(即免疫系统可快速高效地识别球虫百余个抗原,抵抗球虫再次感染的能力更高。),而非活卵囊疫苗对球虫的感染仍处于“Naive”状态(即免疫系统仅能识别特定的1个或几个球虫抗原,抵抗球虫再次感染的能力较弱。)。这也是目前研发的基于一个或几个抗原的球虫“死”疫苗效果不佳的根本原因。2)高效的保护性记忆免疫应答的主要机制是多种效应机制协同发挥作用,如肠道微环境中的组织常驻记忆细胞(Tissue resident memory cells,T_(RM))、循环的效应记忆细胞(Effector memory T cells,TEM)、中心记忆性T细胞(Central memory T cell,T_(CM)),尤其是T_(RM)的量和质起关键作用。在疫苗设计中可以将抗原靶向可激发宿主产生针对鸡球虫高效保护性记忆免疫应答的重要部位—肠道。3)抑制球虫早期裂殖生殖是记忆性免疫应答抵抗球虫感染最重要的特征,为评估高效球虫疫苗提供了新思路。综上,对鸡球虫感染过程中产生高效免疫保护的机制有清晰的认识和理解,是实现基于免疫学理论的球虫病科学防控的基础。

关键词：鸡球虫病抗球虫病疫苗 Naive primed 肠道常驻记忆性T细胞

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LPA对猪孤雌胚胎早期发育及多能性标志基因的影响

LPA对猪孤雌胚胎早期发育及多能性标志基因的影响

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作者：朱秀生广西大学

学位级别：硕士

猪作为我国的大家畜,对我国的农业经济发展起着重要的作用。目前来说获得猪多能干细胞的主要方法是通过体外分离和重编程,但是存在的主要问题都是没有获得“naive”状态的猪ES细胞。为了进一步促进猪胚胎早期发育,获得更利于分离培养获... 详细信息

猪作为我国的大家畜,对我国的农业经济发展起着重要的作用。目前来说获得猪多能干细胞的主要方法是通过体外分离和重编程,但是存在的主要问题都是没有获得“naive”状态的猪ES细胞。为了进一步促进猪胚胎早期发育,获得更利于分离培养获得naive多能性状态的胚胎干细胞(ES)的囊胚材料,我们在本实验探讨Lysophosphatidic acid(LPA)对猪孤雌胚胎早期发育以及相关多能性基因表达的影响并对其信号通路进行了初步探讨。以期为下一步分离获得猪ES获得良好的材料。研究结果总结如下:***(Lysophosphatidic acid)对猪孤雌胚胎早期发育以及相关胚层的影响。首先对LPA作用的浓度进行探索,从囊赔率、卵裂率以及囊胚细胞数来看,发现50μM的LPA处理浓度要显著优于其他处理组,并且囊胚质量也优于对照组。为了进一步确认前面的试验结果,我们从蛋白水平选用了 OCT4抗体进行了免疫荧光染色,结果显示,50μM的LPA处理浓度免疫荧光强度也优于其他实验组和对照组,所以确定了 50μM的LPA处理浓度进行了后续的实验。随后探索了LPA对原始内胚层、原始外胚层以及滋养层标志基因的影响。QRT-PCR结果显示:LPA对原始外胚层标志基因没有显著影响,但是LPA可以显著上调滋养层标志基因的表达并且可以极显著地下调原始内胚层标志基因的表达。以上结果表明,LPA可以促进早期猪孤雌囊胚的发育,并且对猪早期胚胎原始内胚层有着重要的影响。***作用于猪孤雌胚胎相关信号通路的探索。首先探索FGF信号通路对猪孤雌胚胎原始内胚层的影响,QRT-PCR结果显示:30ng/mL的bFGF可以显著上调猪囊胚原始内胚层GATT4基因。在同时添加LPA和bFGF后,猪囊胚原始内胚层标志基因GATA4和单独添加LPA时结果一致,即GATA4基因显著下降。随后探索LPA是否通过ROCK信号通路起作用。使用ROCK信号通路抑制剂Y27632抑制ROCK信号通路表达以后再添加LPA后,猪囊胚原始内胚层标志基因GATA4没有显著变化。以上结果表明,与小鼠早期胚胎一样,FGF信号通路任然可以调节猪的原始内胚层的发育,而LPA主要通过ROCK信号通路对猪原始内胚层起作用,并且作用强度可能大于FGF信号通路。3.为了更进一步的研究LPA对猪早期囊胚发育中多能性基因表达的影响,对“naive”和“primed”两类候选基因进行了定量测定,结果显示:LPA对“naive”态基因没有显著影响,但是能显著下调“primed”多能基因NODAL和Activin-A的表达,并且能显著提高ES细胞自我更新因子OCT4和c-Myc的表达。以上结果表明:LPA可以促进猪孤雌胚胎早期发育,并且可能通过抑制primed多能基因的表达来促进和维持“naive”状态细胞的多能性,以上的研究结果有望促进naive猪ES细胞系的分离培养及建系。

关键词： LPA 囊胚 naive primed ROCK信号通路

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