检索结果-南通市图书馆

中国性科学 2022年第8期31卷 136-140页

作者：吴学良戴礼记王威李兴张妮易军曾志平刘拥荣湖南中医药大学附属宁乡医院男科中心湖南宁乡410600 湖南中医药大学附属宁乡医院药学部湖南宁乡410600 湖南中医药大学附属宁乡医院医学检验中心湖南宁乡410600

目的研究淋病奈瑟球菌(NG)表面porin b(Por b)蛋白特异性及免疫保护性在临床中的应用价值。方法登录Gen bank获取NG世界卫生组织(WHO)标准株E株Por b-PIA基因,设计引物与合成,培养WHO标准株E株,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出Por b-PIA DN... 详细信息

目的研究淋病奈瑟球菌(NG)表面porin b(Por b)蛋白特异性及免疫保护性在临床中的应用价值。方法登录Gen bank获取NG世界卫生组织(WHO)标准株E株Por b-PIA基因,设计引物与合成,培养WHO标准株E株,通过聚合酶链反应(PCR)扩增出Por b-PIA DNA片段,采用GST·bind^(TM)树脂纯化Por b蛋白,对噬菌体随机12肽库进行筛选并对阳性克隆进行提取,应用DNA测序及MIXOX软件分析;将培养后的人尿道上皮细胞分别与Por b蛋白特异性结合的多肽、NG活菌进行培养,并将未加入抗体作为对照组。观察Por b蛋白的纯化表达,Western blot检测Por b蛋白与NG特异性关系,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测筛选后蛋白的特异性抗体水平,比较Por b蛋白特异性结合多肽对细胞内形成微菌落的差异。结果Ecoli-bL21中克隆表达的诱导产物经Ni+-NTA Purification System纯化后,获得纯度较高的Por b蛋白;制备出Por b蛋白相应的特异性结合多肽,蛋白出现特异性条带;间接ELISA检测筛选后蛋白的特异性抗体水平,筛选后蛋白的抗体水平在1∶200;加入Por b蛋白特异性结合多肽的组形成的微菌落显著少于对照组(Pb蛋白发挥显著特异性和免疫保护性,但还需大量研究及临床试验来证明其临床效果并进一步分析Por b蛋白的相关机制和作用,为临床NG疫苗的研究提供依据。

关键词：淋病奈瑟球菌 porin b蛋白特异性免疫性

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淋病奈瑟菌外膜蛋白porin b通过抑制CD4^(+)T细胞增殖调控机体免疫应答的分析

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吉林医学 2024年第9期45卷 2033-2036页

作者：朱有葱杨鹏罗浪益阳医学高等专科学校湖南益阳413002

目的:探究淋病奈瑟菌(NG)外膜蛋白porin b能否通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。方法:从Genbank中获取NG菌株的porin b基因的DNA序列,以NG菌株FA1090的DNA为模板,扩增目porin b基因,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对porin b基因... 详细信息

目的:探究淋病奈瑟菌(NG)外膜蛋白porin b能否通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。方法:从Genbank中获取NG菌株的porin b基因的DNA序列,以NG菌株FA1090的DNA为模板,扩增目porin b基因,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对porin b基因进行检测。将得到的PCR产物用bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后克隆到酶切的载体pET30a中得到重组质pET30a-porin b,并采用1.5%琼脂糖凝胶电泳对pET30a-porin b进行检测。从C57bL/6小鼠的脾脏和淋巴结中分离CD4^(+)T细胞,分为对照组、低剂量pET30a-porin b(LPb)组、中剂量pET30a-porinb(MPb)组和高剂量PET30a-porinb(HPb)组,对照组不做任何处理,LPb组、MPb组和HPb组分别与低、中、高剂量的pET30a-porin b共培养。采用流式细胞术检测各组CD4^(+)T细胞增殖及凋亡情况并进行比较分析。结果:将PCR扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,在1.0 kb处得到一条清晰的条带,表明扩增出了正确的porin b基因;将pET30a-porin b进行1.5%琼脂糖凝胶电泳测定,出现1.0 kb的目的片段和5.4 kb的载体片段,说明重组质粒pET30a-porin b构建成功。与对照组比较,LPb组、MPb组和HPb组的CD4^(+)T细胞增殖指数均显著下降,且随着重组质粒pET30a-porin b的剂量增加,CD4^(+)T细胞增殖指数下降显著;与对照组比较,LPb组、MPb组和HPb组的CD4^(+)T细胞凋亡比例均显著增加,且随着重组质粒pET30a-porin b的剂量增加,CD4^(+)T细胞凋亡比例增加更显著。结论:porin b能够抑制CD4^(+)T细胞的增殖并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。这表明porin b能够通过抑制CD4^(+)T细胞增殖来调控机体免疫应答。后期还需大量研究及临床试验来证明porin b的临床效果,为临床NG疫苗的研究提供基础临床数据。

关键词：淋病奈瑟菌外膜蛋白 porin b蛋白 CD4^(+)T细胞免疫

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