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por基因敲除、回补及过表达LO2细胞株的构建及作为AFB_(1)染毒模型的初步应用

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浙江农业学报 2024年第2期36卷 272-283页

作者：王琳袁建林缪昌马玉晗曹三杰赵勤四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站四川成都611130

为了构建por基因稳定敲除(por^(KO))、回补(porCO)、过表达(por^(OE))的LO2细胞株,以便为后续深入开展por基因在AFB_(1)致毒性机理中的功能研究提供细胞模型。本研究首先利用CRISPR/Cas9技术设计2条靶向por基因的sgRNA并克隆至lentiCRIS... 详细信息

为了构建por基因稳定敲除(por^(KO))、回补(porCO)、过表达(por^(OE))的LO2细胞株,以便为后续深入开展por基因在AFB_(1)致毒性机理中的功能研究提供细胞模型。本研究首先利用CRISPR/Cas9技术设计2条靶向por基因的sgRNA并克隆至lentiCRISPR v2载体,进行慢病毒包装与感染,筛选出LO2 por^(KO)单克隆细胞后进行测序及Western blot鉴定。其次用同源重组方法构建pcDNA3.1(+)/myc-His B-por重组质粒,经对por^(KO)细胞和野生型细胞转染分别构建LO2 porCO及LO2 por^(OE)细胞株,以G-418筛选后进行Western blotting鉴定。再用4μmol·L^(-1)及8μmol·L^(-1)AFB_(1)分别对野生型、LO2 por^(KO)、LO2 porCO、LO2 por^(OE)细胞株染毒48 h,观察细胞形态并测定细胞存活率。结果表明,靶向exon5的sgRNA-2可成功敲除por基因,得到LO2 por^(KO)细胞株;成功构建表达por重组蛋白的LO2 porCO及LO2 por^(OE)细胞株。对AFB_(1)处理后的各细胞存活率测定结果表明,相较于野生型LO2细胞43.66%±0.58%和27.90%±0.46%的存活率,LO2 por^(KO)细胞存活率具有极显著性差异,均为100%(PporCO细胞存活率仍有显著性差异,分别为57.07%±0.74%和42.54%±0.68%(Ppor^(OE)细胞存活率则显著降低,分别为24.58%±0.92%和17.99%±0.81%(Ppor^(KO)、LO2 porCO、LO2 por^(OE)细胞株,并以AFB_(1)染毒处理分别研究了各细胞株的存活率和细胞形态学变化,发现por基因对AFB_(1)所致细胞毒性的影响巨大。研究结果为后续深入开展por基因在AFB_(1)致毒性机理中的功能研究奠定了基础。

关键词： por CRISPR/Cas9 LO2细胞 AFB_(1)

PPOS方案、LPOS方案和拮抗剂方案在por患者IVF/ICSI-ET中的临床应用效果

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2024年第7期 0001-0004页

作者：陈琤云南省昆明市昆明安琪儿妇产医院云南昆明650000

分析卵泡期外源性高孕激素下促排卵方案(progestin-primed ovarian stimulation,PPOS),黄体期内源性高孕激素下促排卵(luteal-phase ovarian stimulation,LPOS)方案和拮抗剂方案在高龄卵巢低反应((poor ovarian response,por)患者体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intra cytoplasmicsperm injection-embryo transfer,IVF/ICSI-ET)助孕中的临床应用效果。方法选取本院2023年01月至2023年12月间100例IVF/ICSI-ET助孕por患者作为观察对象,依据促排卵方案不同,分为3组,对照组(拮抗剂方案)(38例)、观察1组(PPOS方案)(32例)、观察2组(LPOS方案)(30例),比较应用效果。结果观察1组、观察2组促排卵周期资料无统计学意义(P>0.05),但优于对照组(P<0.05);获卵数、周期取消率、卵裂数等实验室指标,观察1组、观察2组优于对照组(P<0.05)。结论与拮抗剂相比,LPOS、PPOS方案更好,均可起到显著促排卵效果。

关键词： PPOS LPOS 拮抗剂 por IVF/ICSI-ET 实验室指标R714

Effects of heme precursors on CYP1A2 and por expression in the baculovirus/Spodoptera frugiperda system

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The Journal of Biomedical Research 2010年第3期24卷 242-249页

作者： Huiyuan Lu Jun Ma Nian Liu Shoulin Wang Key Lab of Modern Toxicology of Ministry of Education School of Public Health Nanjing Medical University Nanjing 210029 Jiangsu Province China

Objective：CYP1A2 and NADPH-CYP450 oxidoreductase（por）were expressed in the baculovirus/ Spodoptera frugiperda（sf9）*** aim of this study was to investigate the effects of heme precursors on the expression of CYP1A2 and ***：The heme precursors[δ-Aminolaevulinic Acid（5-ALA）,Fe^3＋and hemin]were introduced into the system to evaluate their effects on the expression of CYP1A2,por and their *** the proteins were identified using immunoblotting,CO-difference spectroscopy,or cytochrome c ***：In the present study,functional CYP1A2 and por were successfully expressed in the baculovirus/sf9 system,and both of them showed high ***-addition of 5-ALA and Fe^3＋significantly improved expression of CYP1A2 by about 50%compared with the addition of 5-ALA,Fe^3＋or hemin *** co-addition of 5-ALA and Fe^3＋or addition of 5-ALA or Fe^3＋alone improved the por expression level 2 fold and its activity 7-10 fold compared with control（no addition）.However,unlike CYP1A2,there was no difference between the co-addition and addition of these heme precursors *** ratios of BvCYP1A2 to Bvpor also affected the co-expression of CYP1A2 and por,with a 3：1 ratio of BvCYP1A2/Bvpor significantly increasing their ***,the addition of 0.1 mM 5-ALA or Fe^3＋alone,but not their co- addition,could significantly improve the CYP1A2 and por co-expression（P〈0.05）.Conclusion：5-ALA and Fe^3＋increased the expression of CYP1A2 and por in a baculovirus/sf9 system,but the pattern of their expression was different between their expression alone and co-expression.

关键词： CYP1A2 por baculovirus/Spodopterafrugiperda system co-expression heme precursors

Compound heterozygous variants in por gene identified by whole-exome sequencing in a Chinese pedigree with cytochrome P450 oxidoreductase deficiency

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Pediatric Investigation 2018年第2期2卷 90-95页

作者： Chanjuan Hao Jun Guo Ruolan Guo Zhan Qi Wei Li Xin Ni Beijing Key Laboratory for Genetics of Birth Defects MOE Key Laboratory of Major Diseases in Children Center for Medical Genetics Beijing Pediatric Research Institute Beijing Children's Hospital Capital Medical UniversityNational Center for Children's HealthBeijing China Beijing Pediatric Research Institute Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery Beijing Children's Hospital Capital Medical UniversityNational Center for Children's HealthBeijing China

Importance:Cytochrome P450 oxidoreductase deficiency (porD) is a rare disease exhibiting a variety of clinical *** condition specifically leads to disordered steroidogenesis,which can affect the development of the reproductive system,skeleton,and other parts of the *** severe form of porD is difficult to differentiate with Antley-Bixler syndrome (ABS).The genetic characters and clinical evaluation of porD are still unclear in ***:To perform an exome analysis and identify the pathogenic cause in order to assist clinicians to obtain a proper evaluation on the genetic ***:The proband underwent detailed physical *** of the proband and his parents was isolated and whole-exome sequencing (WES) was *** were analyzed and evaluation according to the ACMG ***:A 1-year-old Chinese boy with midface hypoplasia,choanal stenosis,multiple joint contractures,micropenis and right cryptorchidism was misdiagnosed with Crouzon *** trio-whole-exome sequencing,we identified an unreported compound heterozygous mutation (c.667C＞T,p.R223* and c.1370G＞A,p.R457H) in por in the *** mutation was inherited from healthy heterozygous parents,supporting the diagnosis of porD,which was further confirmed by biochemical ***:We have identified a pathogenic variant with an unreported compound heterozygous por mutation,which expands the clinical and genetic spectra of porD and emphasizes the usefulness of WES for genetic diagnosis.

关键词： Compound heterozygous mutation Cytochrome P450 oxidoreductase Disordered steroidogenesis por deficiency Whole-exome sequencing

por相关基因多态性对华法林维持剂量的影响

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生物化工 2023年第1期9卷 71-75页

作者：郑绮姗赵立子刘锐锋中山市人民医院药学部广东中山528403 中山大学药学院广东广州510006

目的:探讨por相关基因多态性对华法林维持剂量个体差异的影响。方法:2017年1月至2019年3月,在中山市人民医院、中山大学附属第一医院进行复查的188名机械瓣膜置换术患者被纳入研究,国际化标准比值及华法林维持剂量由患者的电子病历获得... 详细信息

目的:探讨por相关基因多态性对华法林维持剂量个体差异的影响。方法:2017年1月至2019年3月,在中山市人民医院、中山大学附属第一医院进行复查的188名机械瓣膜置换术患者被纳入研究,国际化标准比值及华法林维持剂量由患者的电子病历获得。por A503V基因型检测采用直接测序法,por 831-35C>T的基因型检测采用PCR-RFLP法。统计分析por A503V、por 831-35C>T各基因型对华法林剂维持剂量的影响。结果:por A503V各基因型的平均华法林维持剂量分别为CC型(2.75±1.42)mg/d、CT型(2.78±1.41)mg/d、TT型(3.10±1.46)mg/d,组间差异无统计学意义;排除混杂因素后,组间差异仍无统计学意义。por 831-35C>T各基因型的平均剂量为CC型(2.55±1.36)mg/d、CT型(2.90±1.40)mg/d、TT型(3.05±1.55)mg/d,CT型、TT型的剂量均显著高于CC型(P por 831-35C>T突变后与华法林维持剂量升高相关,患者在制定华法林个体化用药方案时应参考por 831-35C>T基因型。

关键词：华法林 por 单核苷酸多态性维持剂量个体差异

CYP3A5、ABCB1和por基因多态性对肾移植受者他克莫司浓度、剂量及肾功能的长期影响

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淮海医药 2023年第3期41卷 221-225页

作者：刘子琦邹素兰钱卿凌静蒋艳胡楠苏州大学附属第三医院/常州市第一人民医院药学部江苏常州213003

目的:研究CYP3A5、ABCB1和por基因多态性对术后3个月以上肾移植受者他克莫司(FK506)剂量、浓度以及肾功能的影响。方法:选取某院行同种异体肾移植手术的320例患者为研究对象,采用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分... 详细信息

目的:研究CYP3A5、ABCB1和por基因多态性对术后3个月以上肾移植受者他克莫司(FK506)剂量、浓度以及肾功能的影响。方法:选取某院行同种异体肾移植手术的320例患者为研究对象,采用聚合酶链式反应连接的限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法和测序法检测患者CYP3A5、ABCB1和por基因型;由于CYP3A5*3基因突变导致CYP3A5酶失活,因此将CYP3A5*3*3定义为CYP3A5非表达者(n=163),将CYP3A5*1*1和CYP3A5*1*3定义为CYP3A5表达者(n=157),比较CYP3A5表达者和非表达者间FK506血药浓度、剂量、浓度剂量比及肾小球滤过率(eGFR)的差异。结果:在移植后1、4年,CYP3A5表达的FK506血药浓度低于非表达者(P=0.0067,P=0.0004),其剂量在移植后长达8年高于非表达者(P=0.0004),而浓度剂量比则低于非表达者(P=0.0060),差异均有统计学意义。ABCB13435、ABCB11236和por基因多态性对FK506血药浓度、剂量及浓度剂量比均无影响,差异无统计学意义(P=0.3040,P=0.1190,P=0.3450)。在移植后3、6个月和2年后,CYP3A5非表达者的eGFR高于CYP3A5表达者,差异有统计学意义(P=0.0240,P=0.0187,P=0.0309),提示CYP3A5基因多态性对移植肾功能有长期影响。结论:CYP3A5基因多态性对肾移植受者FK506的浓度、剂量、浓度剂量比及移植后的肾功能有长期影响。

关键词：肾移植 CYP3A5 ABCB1 por 基因多态性

CYP3A4/5、por基因多态性与中国成年心脏移植受者他克莫司血药浓度相关性的研究

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中国药学杂志 2017年第19期52卷 1710-1714页

作者：周红张菁伍三兰刘亚妮师少军张玉韩勇华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科武汉430022

目的探讨CYP3A4/5和por单核苷酸多态性(SNP)与中国成年心脏移植受者他克莫司剂量校正浓度(ρ0/D)的相关性,为制定该人群个体化剂量调整方案提供参考。方法共纳入90例中国成年心脏移植术后早期的受者,采用焦磷酸测序法检测CYP3A4~*1G G>A... 详细信息

目的探讨CYP3A4/5和por单核苷酸多态性(SNP)与中国成年心脏移植受者他克莫司剂量校正浓度(ρ0/D)的相关性,为制定该人群个体化剂量调整方案提供参考。方法共纳入90例中国成年心脏移植术后早期的受者,采用焦磷酸测序法检测CYP3A4~*1G G>A(rs2242480),Sanger法检测CYP3A5~*3 A>G(rs776746),por~*28 C>T(rs1057868),酶放大免疫测定法(EMIT)测定他克莫司血药谷浓度。分析上述基因型与ρ0/D、达靶浓度时间和达靶浓度所需剂量的相关性。结果 CYP3A4~*1G、CYP3A5~*3、por~*28等位基因频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。CYP3 A5~*3/~*3基因型心脏移植患者ρ0/D比~*1/~*1和~*1/~*3携带者显著增加,达靶浓度时间显著缩短,达靶浓度所需剂量显著降低。CYP3A4~*1/~*1G等位基因携带者ρ0/D显著低于野生型。基于CYP3 A5分层分析,在CYP3 A5表达与不表达组中,CYP3A4和por不同基因型均与他克莫司ρ0/D无相关性。por~*28/~*28基因型受者达靶浓度时间显著延长。结论中国成年心脏移植受者CYP3A4~*1G和CYP3A5~*3基因型与他克莫司ρ0/D显著相关,移植前进行检测将有助于他克莫司的临床个体化用药。

关键词：他克莫司 CYP3A4/5 por 心脏移植

por基因多态性与肾移植术后患者他克莫司全血谷浓度的相关性研究

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POR基因多态性与肾移植术后患者他克莫司全血谷浓度的相关性研究

por基因多态性与肾移植术后早期患者他克莫司浓度的相关性研究

第四届全国治疗药物监测学术年会

作者：刘澍李嘉丽王雪丁王长希黄红兵黄民中山大学肿瘤防治中心华南肿瘤学国家重点实验室肿瘤医学协同创新中心中山大学临床药理研究所中山大学附属第一医院器官移植中心

目的:回顾性研究细胞色素P450氧化还原酶por基因多态性与肾移植手术后早期他克莫司全血谷浓度的相关性,探讨por基因多态性对CYP3A介导的他克莫司体内代谢的影响,为优化他克莫司的个体化给药提供依据。方法:纳入肾移植术后服用他克莫司+... 详细信息

目的:回顾性研究细胞色素P450氧化还原酶por基因多态性与肾移植手术后早期他克莫司全血谷浓度的相关性,探讨por基因多态性对CYP3A介导的他克莫司体内代谢的影响,为优化他克莫司的个体化给药提供依据。方法:纳入肾移植术后服用他克莫司+霉酚酸酯+糖皮质激素的患者96例,采用PCR-RFLP法检测CYP3A5*3基因多态性,采用Sequenom MassARRAY SNP genotype analysis法检测porA503V、por831-35C＞T、porrs17685基因多态性,术后第七天他克莫司全血谷浓度（CO）为临床治疗药物监测（TDM）数据,采用SPSS16.0软件统计分析。结果:96例中国肾移植患者中,porA503VCC型、CT型、TT型频率分别为53.97%、38.10%、7.93%,C等位基因频率为64.84%,T等位基因频率为35.16%。por 831-35C＞T CC型、CT型、TT型频率分别为44.57%、42.39%、13.04%,C等位基因频率为65.76%,T等位基因频率为34.24%。por rs17685 CC型、CT型、TT型频率分别为45.05%、41.76%、13.19%,C等位基因频率为65.93%,T等位基因频率为34.07%。以上基因型均符合Hardy-Weinberg平衡。por A503V CC、CT、TT型患者术后第七天他克莫司全血谷浓度剂量比分别为112.73±51.00、128.05±70.35、101.56±3 4.75ng/mL per mg/kg,三种基因型组间不存在统计学差异（P＞0.05）;por 831-35C＞T CC CT、TT型患者术后第七天他克莫司全血谷浓度剂量比分别为114.73±49.44、126.35±72.12、103.73±41.36ng/mL per mg/kg,三种基因型组间不存在统计学差异（P＞0.05）;por rs17685CC、CT、TT型患者术后第七天他克莫司全血谷浓度剂量比分别为125.78±6 8.94、115.22±44.24、104.69±34.63ng/mL per mg/kg,三种基因型组间不存在统计学差异（P＞0.05）。进一步的研究排除他克莫司全血谷浓度的主要影响因素CYP3A5*3基因型的影响,以CYP3A5*3基因型分层后分析发现,无论是在CYP3A5表达型者还是非表达型者中,均未发现上述三个SNP与他克莫司全血谷浓度剂量比存在相关性。讨论:应进一步纳入更多的与他克莫司转运、代谢相关的影响因子的基因多态性进行考察,确定与他克莫司全血谷浓度显著相关的SNP,为临床个体化给药提供依据。且目前研究纳入病人例数较少,需进一步扩大样本量后进行分析。

关键词：肾移植 por 基因多态性他克莫司

来源： cnki会议评论

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POR基因多态性与肾移植术后早期患者他克莫司浓度的相关性研究