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pokemon基因siRNA逆转录病毒的制备及其对Hela细胞增殖的影响

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免疫学杂志 2008年第3期24卷 259-263,267页

作者：石晶磊贾正才邓一静吴玉章倪兵第三军医大学全军免疫学基础医学部研究所重庆400038

目的针对多种肿瘤细胞高表达pokemon基因的特性,制备表达针对pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录... 详细信息

目的针对多种肿瘤细胞高表达pokemon基因的特性,制备表达针对pokemon基因的siRNA的逆转录病毒,研究其对感染肿瘤细胞中pokemon基因沉默情况,探讨肿瘤防治的新方法。方法首先利用siRNA预测软件得到4条siRNA编码DNA序列,再构建重组逆转录病毒siRNA表达质粒;利用RT-PCR技术筛选出高表达pokemon基因的肿瘤靶细胞。然后,将重组质粒转染靶细胞,利用实时定量RT-PCR和MTT等方法筛选出沉默效果最佳的siRNA。利用逆转录病毒包装细胞制备重组病毒,鉴定病毒滴度及其对体外培养细胞中pokemon基因的沉默效应。结果通过酶切鉴定和测序等方法证实了预测出的四条siRNA编码DNA片段成功地构建到逆转录病毒表达载体pSilencer5.1-H1中。通过将这些重组质粒转入高表达pokemon基因的Hela肿瘤细胞中,抗生素压力筛选出相应表达各种siRNA的细胞株,再从中筛选出了1个有50%以上沉默效应的候选siRNA。利用这一条siRNA表达质粒,在逆转录病毒包装细胞中制备出了滴度为105cfu/mL的重组病毒。此重组病毒感染Hela细胞后能显著降低其中pokemon基因的表达。结论成功制备了表达人pokemon基因siRNA的重组逆转录病毒,并且在体外实验中证实了该病毒能对肿瘤细胞Hela的增殖产生明显的抑制作用,为下一步的体内抗肿瘤研究提供了有力的佐证。

关键词： pokemon基因逆转录病毒 RNA 肿瘤治疗

pokemon基因siRNA逆转录病毒重组表达质粒的构建及鉴定

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 203-205,209页

作者：邓一静倪兵姜曼杨玓李凡吴玉章第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的针对pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRN... 详细信息

目的针对pokemon基因对于许多肿瘤抑制基因和原癌基因上游的作用,将其作为RNAi的靶基因,构建表达这些siRNA的重组逆转录病毒表达质粒。方法利用Ambion公司的网上设计工具设计针对pokemon肿瘤基因的4条siRNA序列,并化学合成4对互补的siRNA的DNA片段。将此双链DNA片段克隆到pSilencer 5.1-H1 Retro vector的BamHⅠ和HindⅢ位点,构建其逆转录病毒重组表达质粒。结果表达人类pokemon基因的siRNA逆转录病毒重组表达质粒构建成功。结论我们成功构建了人类pokemon基因的重组逆转录病毒重组表达质粒,为下一步pokemon基因的RNA干扰提供了实验依据,并且开辟了肿瘤基因治疗的新思路。

关键词： pokemon基因重组逆转录病毒 RNA干扰

pokemon基因在结直肠癌组织中的表达及其与p14ARF、P53蛋白表达的相关性

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中华消化杂志 2008年第4期28卷 273-275页

作者：周莹群徐选福邬赞斌刘珺牛培勤郭传勇同济大学附属第十人民医院消化科上海200072

pokemon是红系髓性致癌因子（POK）家族成员之一，作为第一个被证实的ARF特异性转录阻遏物，pokemon与肿瘤发生密切相关。已有研究证明，pokemon作用于许多肿瘤抑制基因和原癌基因的上游，pokemon的独特作用是以控制其他癌基因的活性，... 详细信息

pokemon是红系髓性致癌因子（POK）家族成员之一，作为第一个被证实的ARF特异性转录阻遏物，pokemon与肿瘤发生密切相关。已有研究证明，pokemon作用于许多肿瘤抑制基因和原癌基因的上游，pokemon的独特作用是以控制其他癌基因的活性，成为致癌分子通路的主要开关。目前研究证实，pokemon在某些类型的人类淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌和前列腺癌等肿瘤组织中高表达。本研究通过检测pokemon、p14^ARF。和P53在结直肠癌组织中的表达及相关性分析，探讨pokemon，p14^ARF和P53在结直肠癌发生发展过程中的作用及机制。

关键词： P53蛋白表达 p14ARF pokemon基因直肠癌组织 p14^ARF 多肿瘤抑制基因致癌因子原癌基因

pokemon基因在肝癌细胞中的表达及意义

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肿瘤防治研究 2012年第2期39卷 137-139页

作者：赵心恺宁巧明孙晓宁田德安华中科技大学同济医学院同济医院消化内科武汉430030 海南省人民医院消化内科

目的探讨pokemon在肝癌细胞中的表达及意义,进一步阐明肝细胞癌发生发展过程中的分子机制。方法选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法检测pokemon在不同细胞中的表达;应用基因沉默方法抑制pokemon在... 详细信息

目的探讨pokemon在肝癌细胞中的表达及意义,进一步阐明肝细胞癌发生发展过程中的分子机制。方法选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法检测pokemon在不同细胞中的表达;应用基因沉默方法抑制pokemon在肝癌细胞中的表达,应用流式细胞仪观察肝癌细胞的凋亡情况。结果 pokemon在肝癌细胞HepG2、SMMC7721中的表达明显高于人胚胎肝细胞LO2;siRNA抑制pokemon的表达后,肝癌细胞凋亡明显增加。结论原癌基因Poke-mon在肝癌细胞中表达明显增高,pokemon可能在肝癌的发生、发展过程中起重要作用。

关键词： pokemon基因肝细胞癌基因沉默

沉默pokemon基因对鼻咽癌细胞株CNE-2放射敏感性的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2012年第6期33卷 733-738页

作者：牛道立李建锋何芬邹俊涛周琼芳魏旋李杨陈龙华南方医科大学附属南方医院放疗科广东广州510515 广州医学院第一附属医院放疗科广东广州510070 中山大学中山医学院人体解剖学教研室广东广州510080

【目的】探讨沉默pokemon基因对鼻咽癌细胞(CNE-2)放射敏感性的影响,寻求放射治疗鼻咽癌的新方法。【方法】首先利用siRNA预测软件得到3条siRNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和免疫印迹法检测其沉默pokemon基因的效果,筛选出沉... 详细信息

【目的】探讨沉默pokemon基因对鼻咽癌细胞(CNE-2)放射敏感性的影响,寻求放射治疗鼻咽癌的新方法。【方法】首先利用siRNA预测软件得到3条siRNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和免疫印迹法检测其沉默pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后观察其对CNE-2细胞p53基因表达的影响、MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的凋亡、克隆形成法检测转染siRNA联合放射处理后细胞的放射增敏比。【结果】成功筛选出了沉默效应最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后能显著降低其pokemon基因的表达、提高p53基因的表达、降低细胞的增殖活性、加速细胞的凋亡,同时增加了CNE-2细胞的放射敏感性。【结论】沉默pokemon基因能增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,这为临床鼻咽癌的放射增敏治疗提供了新思路。

关键词： pokemon基因鼻咽癌放射敏感性

X射线对人肺腺癌A549细胞pokemon基因表达的影响

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中华放射医学与防护杂志 2011年第2期31卷 177-179页

作者：王璐邹跃江其生李伟宋秀军周湘艳王翠兰大学放射医学与公共卫生学院苏州215123 解放军第二炮兵总医院中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所

目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞pokemon基因表达的影响。方法用吸收剂量分别为2、4、6和8Gy的X射线照射体外培养的人肺腺癌A549细胞，2、4、8、12、24、48和72h后，用实时定量PCR技术检测其中的pokemon... 详细信息

目的研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对人肺腺癌A549细胞pokemon基因表达的影响。方法用吸收剂量分别为2、4、6和8Gy的X射线照射体外培养的人肺腺癌A549细胞，2、4、8、12、24、48和72h后，用实时定量PCR技术检测其中的pokemonmRNA表达水平，以未照射组为对照。结果在2、4、6、8GyX射线照射后的早期（除2Gy照射后的2和4h外）pokemonmRNA的表达降低，但在晚期（48h以后）呈升高趋势，在大部分时间点实验组与对照组的差异有统计学意义（t=3.40～154.76，P〈0.05）。结论较大剂量的X射线在早期可下调A549细胞pokemon基因mRNA的表达，诱导肿瘤细胞凋亡；但在晚期又可诱导A549细胞高表达pokemonmRNA，这可能与辐射所致A549细胞的DNA损伤修复和细胞周期调控有关。

关键词：肺癌 pokemon基因 A549细胞 X射线照射

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pokemon基因研究进展

实用肿瘤学杂志 2007年第1期21卷 98-100页

作者：李剑峰白玉贤哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内二科哈尔滨150081

pokemon基因即POK红系髓性致癌因子(POKerythroid myeloid Ontogenic factor),也被称为LRF,OCZF,FBI-1,是被发现的第一个ARF特异性转录抑制物,通过ARF-p53路径对肿瘤的发生发展进行调解,在一些人类肿瘤如淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌... 详细信息

pokemon基因即POK红系髓性致癌因子(POKerythroid myeloid Ontogenic factor),也被称为LRF,OCZF,FBI-1,是被发现的第一个ARF特异性转录抑制物,通过ARF-p53路径对肿瘤的发生发展进行调解,在一些人类肿瘤如淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌和膀胱癌中表达水平很高.

关键词：基因研究进展 pokemon基因多肿瘤抑制基因人类肿瘤致癌因子前列腺癌原癌基因肿瘤治疗

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pokemon基因研究进展

医学信息（下旬刊） 2011年第5期24卷 377-378页

作者：刘换新唐松山武警广东总队医院病理科 510507 广东药学院基础学院生物化学教研室 510006

pokemon基因,即POK红系髓性致癌因子（POK erythroid myeloid Ontogenic factor）,是最近发现的一种抑癌基因,该基因参与一些细胞基因转录的调节及细胞分化,它也是重要抑癌基因-可变读框基因（alterative reading frame,ARF）的中心调... 详细信息

pokemon基因,即POK红系髓性致癌因子（POK erythroid myeloid Ontogenic factor）,是最近发现的一种抑癌基因,该基因参与一些细胞基因转录的调节及细胞分化,它也是重要抑癌基因-可变读框基因（alterative reading frame,ARF）的中心调节因子.现研究发现,pokemon基因在多种人类肿瘤中过度表达,并且缺乏pokemon基因的细胞对致癌转化不应答,它还能控制其他癌基因的活性,并对肿瘤细胞的一些重要特性产生影响,促进癌瘤发生.已经证实一些人类肿瘤如淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌和膀胱癌中其表达水平很高,因此,对pokemon基因的研究有可能为肿瘤的治疗提供新的途径和方法该基因在肿瘤发生过程中起着关键性作用,并有望成为肿瘤治疗的新靶点.

关键词： pokemon基因人类肿瘤抑癌基因细胞基因转录肿瘤发生过程致癌因子细胞分化调节因子

miRNA干扰pokemon基因对大肠癌细胞增殖的影响及机制

维普期刊数据库评论

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临床肿瘤学杂志 2011年第11期16卷 970-973页

作者：白玉贤刘磊隋红魏孝礼苑珩珩哈尔滨医科大学附属第三临床医院肿瘤内科哈尔滨150081

目的探索miRNA干扰pokemon基因后对大肠癌细胞系LoVo增殖和细胞周期的作用。方法构建靶向pokemon基因的miRNA重组质粒并转染LoVo细胞,设重组质粒组、阴性对照质粒组和脂质体空白对照组,运用实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰后LoVo细胞中Po... 详细信息

目的探索miRNA干扰pokemon基因后对大肠癌细胞系LoVo增殖和细胞周期的作用。方法构建靶向pokemon基因的miRNA重组质粒并转染LoVo细胞,设重组质粒组、阴性对照质粒组和脂质体空白对照组,运用实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰后LoVo细胞中pokemon mRNA的表达,MTT法和流式细胞仪技术分析转染后细胞的增殖和周期变化。结果成功构建含miRNA片段的重组质粒,依次命名为mR22-1、mR22-2、mR22-3和mR22-4;分别转染LoVo细胞后,pokemonmRNA表达水平明显下调,以mR22-1最强,干扰效率为50%。MTT检测显示,mR22-1可明显抑制细胞增殖,24、48和72h的抑制率分别为(23±2.1)%、(47±3.0)%和(69±2.5)%,呈时间依赖性;流式细胞仪测定转染后LoVo细胞周期阻滞在G1期。结论采用RNAi技术可以特异性阻断pokemon基因的表达;pokemon基因有促进大肠癌细胞株LoVo增殖的作用。

关键词： pokemon基因大肠癌 RNA干扰