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牛plin1基因CDS区扩增及时序表达

西北农业学报 2020年第10期29卷 1472-1478页

作者：雷召雄魏大为汪书哲杨梦丽马云宁夏大学农学院银川750021

plin1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛plin1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPC... 详细信息

plin1(Perilipin1)基因是调控脂类代谢的“分子开关”,其编码的脂滴包被蛋白是脂滴表面含量最丰富的蛋白,在脂肪沉积中起关键作用。采用RT-PCR方法扩增牛plin1基因编码区序列,利用组织块法和消化法分离培养牛前体脂肪细胞,进一步利用qPCR技术检测plin1在牛皮下前体脂肪细胞诱导分化过程中(0、2、4、6、10 d)mRNA的相对表达水平。结果表明,牛plin1基因CDS区长为1551 bp,共编码517个氨基酸;细胞时序表达结果显示,诱导分化的第0天plin1不表达,随着分化时间的推移,其表达量呈上升趋势,与分化的第2天相比,在第6天和第10天表达量上升最快,PPARγ在分化的第0天有少量表达,表达趋势与plin1一致,在第6天和第10天显著升高。表明plin1在牛脂肪组织生成过程中起重要作用,在前体脂肪细胞分化阶段依赖于PPARγ的表达而表达。

关键词：牛 plin1 基因克隆时序表达

plin1对奶牛脂肪细胞脂代谢及炎性细胞因子合成的影响

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PLIN1对奶牛脂肪细胞脂代谢及炎性细胞因子合成的影响

作者：张世奇吉林大学

学位级别：硕士

围产期是奶牛酮病和脂肪肝等能量代谢障碍性疾病的高发期,由于奶牛干物质摄入减少而能量需求增加导致能量负平衡,进而引起脂肪大量动员,造成酮病、脂肪肝等能量代谢障碍性疾病。所以能量负平衡所引起的脂肪动员是奶牛围产期能量代谢障... 详细信息

围产期是奶牛酮病和脂肪肝等能量代谢障碍性疾病的高发期,由于奶牛干物质摄入减少而能量需求增加导致能量负平衡,进而引起脂肪大量动员,造成酮病、脂肪肝等能量代谢障碍性疾病。所以能量负平衡所引起的脂肪动员是奶牛围产期能量代谢障碍性疾病的重要环节。此外,脂肪组织作为机体重要的内分泌器官,分泌多种细胞因子如肿瘤坏死因子(TNFα)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)等,而这些细胞因子与酮病和脂肪肝等能量代谢障碍性疾病及乳房炎和子宫内膜炎等感染性疾病的发生发展密切相关。plin1是在脂肪细胞中大量表达的一种脂滴包被蛋白,在脂代谢过程中起着关键的作用。明确围产期能量负平衡奶牛脂肪组织的脂代谢特征,特别是脂代谢酶表达和活性的改变是缓解脂肪动员,防治围产期能量代谢障碍性疾病的关键。同时,plin1对脂肪细胞炎性因子的表达分泌可能也有着特别的作用。因此,本题拟通过围产期病牛在体实验和原代培养脂肪细胞过表达及沉默plin1体外实验,以期揭示plin1对脂肪组织脂代谢的调节机制以及炎性反应的发生机制,为采用缓解脂肪动员防治奶牛围产期能量负平衡性疾病奠定理论基础。体外分离培养奶牛原代脂肪细胞,转染plin1过表达腺病毒和沉默si RNA。结果表明plin1能显著上调SREBP-1c m RNA和蛋白表达并增强其下游脂肪酸合成关键酶ACC、FAS、SCD以及DGAT1和DGAT2的表达,同时下调PPARγm RNA和蛋白表达,且抑制脂肪分解关键酶HSL和ATGL的表达,最终导致脂肪细胞中脂质的积累和脂滴的增大;沉默plin1能显著下调SREBP-1c m RNA和蛋白表达并抑制其下游脂肪酸合成关键酶ACC、FAS、SCD以及DGAT1和DGAT2的表达,同时上调PPARγm RNA和蛋白表达,且促进脂肪分解关键酶HSL和ATGL的表达,最终导致脂肪细胞中脂质的消耗和脂滴的减少。体外分离培养奶牛原代脂肪细胞,转染plin1过表达腺病毒和沉默si RNA并添加LPS刺激。结果表明,过表达plin1可以抑制NF-κB炎症信号通路的激活,使TNFα、IL-1β和IL-6等炎性因子的表达量下降,起到抗炎作用;沉默plin1后,NF-κB炎症信号通路的激活增强,TNFα、IL-1β和IL-6等炎性因子的表达量显著增加,促进炎症反应的发生及发展。以上体外实验结果表明,plin1促进TG在脂肪细胞的积累和脂滴的增多增大,同时可以抑制由NF-κB炎症信号通路引起的炎症反应。

关键词：能量负平衡脂肪细胞脂代谢紊乱 plin1 NF-κB炎症信号通路

橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其plin1基因表达的影响

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中药材 2023年第4期46卷 1016-1020页

作者：燕炯杨佳敏许祥高学坤张富强陈朝阳山西医科大学山西太原030001

目的:观察橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其plin1基因表达的影响,并探究其可能的作用机制。方法:4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,高脂饲料喂养诱导小鼠NAFLD模型,成模小鼠分为模型组、橙皮苷低剂量组(200 mg/kg)和橙皮苷高剂量组(4... 详细信息

目的:观察橙皮苷对高脂饮食诱导NAFLD小鼠及其plin1基因表达的影响,并探究其可能的作用机制。方法:4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,高脂饲料喂养诱导小鼠NAFLD模型,成模小鼠分为模型组、橙皮苷低剂量组(200 mg/kg)和橙皮苷高剂量组(400 mg/kg),另设正常对照组。喂养12 w后眼眶取血,颈椎脱臼处死小鼠,计算肝指数,检测小鼠血清TC、TG、LDL、HDL、ALT、AST水平,HE染色观察肝脏组织病理学,RT-PCR法检测肝组织plin1 mRNA表达,Western Blot检测肝脏组织plin1蛋白及ATGL、HSL等脂代谢相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组肝组织病理学改变明显;肝指数及血清ALT、AST、TC、TG、LDL水平显著升高,HDL水平显著降低;肝组织ATGL、HSL、p-HSL蛋白表达显著降低,HDL水平,plin1及蛋白表达显著升高。经橙皮苷干预后,模型小鼠上述指标均显著改善,高剂量的作用更为明显。结论:高脂饮食可诱导小鼠NAFLD和肝脏脂代谢紊乱,橙皮苷能调节肝脏脂质代谢和plin1表达,从而改善小鼠NAFLD。

关键词：橙皮苷 NAFLD plin1 肝脏脂代谢

猪plin1基因对骨骼肌卫星细胞代谢以及线粒体功能的影响

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猪PLIN1基因对骨骼肌卫星细胞代谢以及线粒体功能的影响

作者：彭玥晗扬州大学

学位级别：硕士

脂滴包被蛋白1(Perilipinl,plin1)是定位于脂肪细胞的表面蛋白,对调节脂肪分解、细胞代谢及线粒体功能均有影响作用。本课题组前期利用iTRAQ技术对不同猪种肌肉组织进行差异蛋白检测,筛选出包括plin1基因在内的一批差异基因,我们推测PL... 详细信息

脂滴包被蛋白1(Perilipinl,plin1)是定位于脂肪细胞的表面蛋白,对调节脂肪分解、细胞代谢及线粒体功能均有影响作用。本课题组前期利用iTRAQ技术对不同猪种肌肉组织进行差异蛋白检测,筛选出包括plin1基因在内的一批差异基因,我们推测plin1可能和不同品种猪肌肉及脂肪发育差异有关。为了探究猪plin1基因对骨骼肌卫星细胞代谢及线粒体功能产生影响作用的机制,本研究利用CRISPR/Cas9基因敲除系统,制备并筛选了猪plin1基因敲除载体,并以具有成肌及成脂分化潜质的猪骨骼肌卫星细胞作为研究对象,通过调控plin1基因表达,检测plin1基因对猪骨骼肌卫星细胞代谢以及线粒体功能的影响。本研究主要包括以下几部分:研究一利用Crispr/Cas9系统构建猪plin1基因敲除载体及敲除效率检测plin1是具有调节基础脂解,促进线粒体和脂滴之间的相互作用的蛋白。本研究根据猪plin1基因序列,利用CRISPR/Cas9系统设计3条能够靶向切割plin1基因的sgRNA,并构建相应的基因敲除载体,通过序列检测在DNA水平确定敲低效率。提取各组细胞群总RNA及蛋白,并分别利用qRT-PCR及Western Blot测定plin1 RNA及蛋白水平。结果表明,各组细胞plin1 DNA均检测到碱基突变或片段缺失,plin1-KO1、plin1-KO2、plin1-KO3 细胞组 DNA 突变率分别为 8%、30%和18%;三组细胞plin1 RNA表达分别比正常细胞组(CON组)下降66.30%、78.26%和28.26%;和CON组相比,三组细胞plin1蛋白表达量分别下降55.00%、74.00%和63.00%,其中plin1-KO2突变效率最高,差异均极显著(P1)。研究二猪plin1基因对猪骨骼肌卫星细胞代谢及线粒体功能的影响本研究采集1日龄姜曲海猪背最长肌利用双酶消化法提取猪骨骼肌卫星细胞,利用细胞免疫荧光标记法检测骨骼肌卫星细胞标记基因MyoD1及PAX7的表达进行细胞纯度鉴定;以分离的猪骨骼肌卫星细胞为研究对象转染plin1空载体(plin1-NC)、plin1 敲除载体(plin1-KO)、plin1 过表达载体(plin1-EX),分别利用嘌呤霉素及博来霉素筛选,富集plin1敲低及过表达细胞群并利用qRT-PCR及Western Blot测定RNA水平和蛋白水平检测plin1表达量。为了研究猪plin1基因对细胞代谢以及线粒体功能的影响,利用Western Blot检测各细胞组细胞代谢及线粒体功能相关蛋白的表达,利用细胞流式术检测各组细胞中活性氧含量、细胞凋亡率以及线粒体膜电位水平,利用ATP检测盒检测细胞内ATP水平,借助透射电镜观察线粒体形态结构的变化。结果表明,分离出的细胞检测出标志性基因MyoD1及Pax7,细胞形态也和报道的猪骨骼肌卫星细胞一致,本研究成功分离出了猪骨骼肌卫星细胞。对实验各组细胞中plin1 mRNA及蛋白水平测定,结果表明,和NC组相比plin1-K O 组 mRNA 下降 47.9%,plin1-EX 组中 mRNA 上升 82.7%。相比 NC 组,plin 1-EX组蛋白表达量上升29.87%,plin1-KO组蛋白表达量下降40.85%,证明本研究成功富集plin1-KO及plin1-EX猪骨骼肌卫星细胞群。利用WB检测各组细胞中细胞代谢及线粒体指标功能相关蛋白水平,与NC组相比,plin1-KO及plin1-EX组细胞中Bax/Bcl2比值分别下降了 91%和59%(P1);与NC组相比,plin1-KO组细胞中代谢相关蛋白,Mfn2和OPA1蛋白的表达水平分别升高了 7%和9%(P1蛋白的表达水平降低24%(Pplin1-KO组细胞中代谢相关蛋白Mfn2和OPA1蛋白的表达水平分别升高11%和81%(P1蛋白的表达水平降低15%(P1-KO和plin1-EX组细胞中细胞凋亡率分别降低45%和14%(P1),细胞膜电位分别下降14%和4%(P1),plin1-KO组活性氧含量下降不明显,plin1-EX组下降28%;细胞周期检测结果表明,plin1-KO组细胞被阻断在G2细胞期,plin1-EX组细胞被阻断在S期。与NC组相比,plin1-EX组和plin1-KO组细胞中线粒体形态均有线粒体嵴结构模糊、线粒体形态呈肿胀或皱缩形态,细胞内线粒体数量均出现显著减少。上述结果表明,猪骨骼肌卫星细胞中plin1基因的稳定表达对维持细胞代谢和线粒体正常功能非常重要,在plin1基因敲低及过表达后均可

关键词： plin1 猪骨骼肌卫星细胞线粒体细胞代谢

利用细胞和小鼠模型研究plin1基因对肌肉发育的影响

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利用细胞和小鼠模型研究PLIN1基因对肌肉发育的影响

作者：高娟扬州大学

学位级别：硕士

围脂滴蛋白1(plin1)是脂滴表面最丰富的结构蛋白,对脂质的合成和脂解起到重要的调控作用。本研究小组前期利用不同猪种模型开展猪体型发育、肌肉发育差异研究,筛选出包括plin1基因在内的一批不同肌肉组织中表达差异显著的基因。本研究... 详细信息

围脂滴蛋白1(plin1)是脂滴表面最丰富的结构蛋白,对脂质的合成和脂解起到重要的调控作用。本研究小组前期利用不同猪种模型开展猪体型发育、肌肉发育差异研究,筛选出包括plin1基因在内的一批不同肌肉组织中表达差异显著的基因。本研究拟从细胞层面研究plin1基因对骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)成肌和成脂分化功能的影响,并且构建骨骼肌组织中特异性敲除plin1基因的条件性敲除小鼠模型研究plin1基因对骨骼肌发育的表型变化及功能影响。从而全面研究plin1基因对肌肉发育和肉质的具体影响,有助于推进家猪产肉性状改良工作。研究一利用细胞模型研究plin1基因对成肌及成脂分化功能的影响本研究以姜曲海猪SMSCs为对照组(NC),以plin1基因表达敲低(plin1-KO)及plin1基因过表达(plin1-EX)SMSCs为实验组,3组细胞成肌诱导后检测各组细胞中成肌分化标志因子MYH1和MyoD1的表达变化来研究plin1基因对成肌分化的影响;各组细胞成脂诱导分化后,通过检测各组细胞中成脂分化标志基因PPARγ和成脂分化抑制基因PRKAG2的表达;利用油红O染色及定量检测细胞中脂肪量;测定细胞中甘油三脂(TG)含量等方法检测plin1基因对成脂分化的影响。结果表明,各组细胞成肌分化诱导4天后,NC组细胞中MYH1和MyoD1的mRNA表达均极显著高于plin1-KO及plin1-EX组(P1);NC组细胞中MYH1和MyoD1蛋白表达也极显著高于plin1-KO及plin1-EX组(P1);细胞免疫荧光检测MYH1和MyoD1的结果和上述趋势一致。各组细胞成脂分化后,NC组细胞中油红O染色及定量水平均显著高于plin1-KO及plin1-EX组(P1),NC组细胞中PPARγ基因的表达显著高于plin1-KO及plin1-EX组(Pplin1-KO 及 plin1-EX 组(P1),NC 组细胞 TG 水平显著高于 plin1-KO 及plin1-EX组(P1)。综上所述,plin1基因稳定表达对骨骼肌卫星细胞分化功能非常重要,plin1基因过表达或者敲低后均会导致SMSCs成肌、成脂分化能力显著下降。研究二利用小鼠模型研究plin1基因对肌肉发育的影响本研究在小鼠plin1基因第3外显子两端设计2个sgRNA序列,构建含plin1 exon3两端带loxp序列的同源臂的Donor载体,通过原核期胚胎显微注射制备plin1 Flox小鼠,通过和骨骼肌组织中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠交配,筛选出骨骼肌组织中plin1基因特异性敲除的基因编辑小鼠。以野生型C57BL/6J小鼠为对照(WT),首先在DNA、RNA和蛋白水平对plin1基因编辑小鼠进行分子生物学鉴定;通过绘制生长曲线、测定8周龄小鼠股四头肌和腓肠肌脏器系数及肌肉形态进行小鼠表型检测。采集两组小鼠腓肠肌,通过索氏抽提检测腓肠肌总脂肪含量、制备冰冻切片后通过油红O测定肌肉组织脂质含量、利用试剂盒测定肌肉组织中TG的含量、HE染色观察肌肉组织中肌纤维横截面积;分别通过qRT-PCR及WB检测骨骼肌组织中成肌标志基因MyoD1、MYH和成脂标志基因PPARγ、LPL mRNA及蛋白表达以检测plin1基因对肌肉组织分化功能的影响。提取两组小鼠骨骼肌组织线粒体,检测线粒体膜电位、活性氧和ATP水平,以全面检测plin1基因对肌肉代谢的影响。结果表明,plin1 cKO组小鼠plin1 mRNA在心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮肤、脂肪中表达和WT组小鼠差异不显著,在骨骼肌极中显著低于WT组小鼠(P1),plin1 cKO组小鼠骨骼肌中plin1蛋白相对表达量极显著低于WT组(P1)。测量小鼠出生后8周的生长体重,从第2周后WT组较plin1 cKO组有显著上升(Pplin1 cKO组(Pplin1 cKO组(P1);腓肠肌组织冰冻切片油红O染色结果表明,WT组肌肉组织中脂类物质相对量极显著高于plin1 cKO组(P1);WT组小鼠腓肠肌内的脂肪含量显著高于 plin1 cKO 组(P1、PPARγ和 LPLmRNA表达水平均显著高于plin1 cKO组(P1),WB检测成肌分化标志蛋白MyoD1、Myog、MYH及成脂分化标志蛋白PPARy和LPL表达,WT组均显著高于plin1 cKO组(P<0.05)。和W

关键词： plin1 骨骼肌卫星细胞成肌分化成脂分化肌肉发育

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plin1^(-/-)小鼠高血压发生机制

生理科学进展 2016年第2期47卷 148-148页

作者：崔昌婷王威仪

脂肪组织功能紊乱与高血压密切相关,其可能机制包括炎症、氧化应激、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活和自主神经兴奋等。Perilipin 1基因敲除小鼠（plin1^（-/-））小鼠出现脂肪组织功能紊乱,研究人员通过监测不同周龄plin1^（-/-）小... 详细信息

脂肪组织功能紊乱与高血压密切相关,其可能机制包括炎症、氧化应激、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活和自主神经兴奋等。Perilipin 1基因敲除小鼠（plin1^（-/-））小鼠出现脂肪组织功能紊乱,研究人员通过监测不同周龄plin1^（-/-）小鼠主动脉血压,明确其可发生早发高血压,并初步探讨其机制。

关键词： plin1 鼠主动脉脂肪组织基因敲除小鼠氧化应激离体血管小鼠血浆炎性因子胸主动脉超氧阴离子

A Lipid Droplet-Associated GFP Reporter-Based Screen Identifies New Fat Storage Regulators in ***

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Journal of Genetics and Genomics 2014年第5期41卷 305-313页

作者： Zhenglong Liu Xia Li Qinlan Ge Mei Ding Xun Huang State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology Institute of Genetics and Developmental Biology Chinese Academy of Sciences University of the Chinese Academy of Sciences

Fat storage disorders including obesity are pandemic human health problems. As a genetically amenable model organism, Caeno- rhabditis elegans has often been used to explore the molecular mechanisms of fat storage regulation. Dye staining of fixed animals and stimulated Raman scattering （SRS） microscopy methods have been used successfully to study fat storage, but a genetic screening system that takes full advantage of C. elegans transparency to perform live imaging of fluorescent protein reporters has not yet been reported. Here, we investigated the tissue-specific expression of the GFP fusion of Perilipin 1 （plin1）, a Drosophila lipid droplet-associated protein, in C. elegans. Our results indicate that plinI：：GFP labels lipid droplets and can be used as a fat storage indicator in live worms. Through an RNAi screen, we further identified several previously uncharacterized new fat storage regulators.

关键词： Fat storage Lipid droplet plin1 C. elegans

脂滴包被蛋白的结构、功能及其与脂类疾病关联的研究进展

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中国畜牧杂志 2021年第6期57卷 59-67页

作者：庞永佳翟桂影李瑞李超王宇祥东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室黑龙江哈尔滨150030 农业农村部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030

脂滴包被蛋白(Perilipin,plin1)是PAT蛋白家族成员之一,其特异性地表达于脂滴表面,并受多种转录因子的调控。plin1在调控脂肪细胞基础脂解和激素刺激脂解的过程中发挥着重要作用,并且与Fsp27协同作用共同促进脂滴融合。此外,plin1还参... 详细信息

脂滴包被蛋白(Perilipin,plin1)是PAT蛋白家族成员之一,其特异性地表达于脂滴表面,并受多种转录因子的调控。plin1在调控脂肪细胞基础脂解和激素刺激脂解的过程中发挥着重要作用,并且与Fsp27协同作用共同促进脂滴融合。此外,plin1还参与机体能量代谢、炎症反应等生物学过程,与多种脂类疾病的发生和发展有重要联系。本文对plin1的命名、结构、表达调控、功能以及与相关疾病的关系进行综述,着重总结plin1发挥功能的分子机制,为plin1的深入研究提供参考。

关键词： plin1 脂解脂滴融合疾病

白术内酯Ⅲ调控MicoRNA-466c-5p对BMSCs成脂分化的机制研究

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白术内酯Ⅲ调控MicoRNA-466c-5p对BMSCs成脂分化的机制研究

作者：李可广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究白术内酯Ⅲ调控micoRNA-466c-5p的表达影响大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用机制。骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一种具有多项分化潜能的干细胞。在体外特定的条件下可诱导分化为成骨细胞... 详细信息

目的:研究白术内酯Ⅲ调控micoRNA-466c-5p的表达影响大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的作用机制。骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一种具有多项分化潜能的干细胞。在体外特定的条件下可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞。生理状态下,BMSCs成骨和成脂分化相互平衡;当BMSCs成骨成脂分化失衡时,多种病理性代谢性疾病随之产生,如骨质疏松、年龄相关性骨丢失、糖尿病、心脑血管疾病、肥胖等。本实验主要研究白术内酯Ⅲ和miR-466对BMSCs成脂分化的调控机制,初步探讨白术内酯Ⅲ和miR-466在成脂分化中的调控作用。前期课题组实验证明氧化应激能促进BMSCs成脂分化,100μM的过氧化氢(HO)能诱导BMSCs的成脂分化;白术内酯Ⅲ能抑制BMSCs的成软骨分化,其作用机制可能是通过抑制BMSCs的氧化应激反应抑制BMSCs的成软骨分化。课题组还证明部分micoRNA通过调控靶基因参与BMSCs的成脂成骨分化,白术内酯Ⅲ、micoRNA等可能在BMSCs成脂分化生理病理过程中扮演着某种重要角色。方法:1.运用全骨髓培养法培养大鼠BMSCs,流式细胞鉴定术鉴定取材的原代细胞。100μM浓度的HO诱导1 h后采用油红O实验、qRT-PCR、Western Blot技术鉴定BMSCs的成脂分化能力。运用CCK8法和油红O染色半定量法筛选出白术内酯Ⅲ影响成脂分化的最佳浓度。采用qRT-PCR和Western Blot证明白术内酯Ⅲ对HO诱导的BMSCs成脂分化的调控作用。运用qRT-PCR技术测定模型组和白术内酯Ⅲ药物组miR-466c-5p的含量变化。2.在生物信息学软件上预测miR-466c-5p可能存在的相关靶点,构建特异性表达的rno-miR-466c-5p的模拟物和抑制物,转染至BMSCs,经Western Blot检测靶蛋白的表达;通过构建靶基因-3,UTR区含rno-miR-466c-5p结合位点的双荧光素酶报告基因进一步明确miR-466c的靶基因。3.转染rno-miR-466c-5p的模拟物至模型组BMSCs,经油红O实验、Western Blot技术检验BMSCs成脂分化能力在空白组、模型组和miR-466模拟物组的变化,检测miR-466c是否能调控BMSCs成脂分化。4.筛选靶基因的干扰片段3个并予以合成,采用qRT-PCR方法明确最佳siRNA。最佳siRNA片段转染至BMSCs后,经油红O实验、Western Blot技术检验BMSCs成脂分化能力在空白组、模型组和靶基因siRNA组的变化,检测靶基因是否参与BMSCs成脂分化的调控。5.靶基因siRNA和miR-466c-5p mimics共转染BMSCs后,采用油红O实验、Western Blot技术检验BMSC成脂分化能力在空白组、模型组、共转染组的变化,阐明miR466-c-5p通过调控靶基因参与BMSCs成脂分化过程的机制。结果:1.全骨髓培养法培养的细胞经流式细胞术鉴定后确为BMSCs;100μM的HO诱导1h后可成功诱导BMSCs成脂分化,且20μM浓度白术内酯Ⅲ能较好抑制HO诱导的BMSCs成脂分化。qRT-PCR结果显示模型组miR-466c-5p表达下调,白术内酯Ⅲ能上调miR-466c-5p的表达(Pplin1,转染后经Western Blot检测,与NC(negative control)组相比,miR-466c模拟物组plin1表达下降,抑制物组plin1表达下降;报告基因结果也与Western Blot实验结果相同(Pplin1组和空白组脂滴含量均较模型组和NC组低(Pplin1组和空白组PPARγ、CEBPα、AP2蛋白较模型组和NC组表达均下降(P<0.05),差异具有统计学意义。5.共转染后,油红O、Western Blot结果表明,空白组和共转染组脂滴含量均较模型组和NC组减少(P<0.05),空白组和共转染组PPARγ、CEBPα、AP2蛋白表达均较模型组和NC组下降

关键词：骨髓间充质干细胞成脂分化白术内酯Ⅲ miR-466c-5p plin1 PPARγ