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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 60-66页

作者：徐茹霜杨凌霄宋关斌重庆大学生物工程学院重庆400030 重庆市第六人民医院重庆400060

目的研究plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系,揭示plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法首先,Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中plectin的表达。其次,构建plectin下调的肝癌细胞株,设立对照组(shNC组)和shPLEC组... 详细信息

目的研究plectin的表达与肝癌细胞迁移能力的关系,揭示plectin表达影响肝癌细胞迁移行为的分子机理。方法首先,Western blot检测正常肝细胞和肝癌细胞中plectin的表达。其次,构建plectin下调的肝癌细胞株,设立对照组(shNC组)和shPLEC组,各组分别设溶剂对照组(shNC+DMSO组或shPLEC+DMSO组)和F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide组(shNC+Jasp组或shPLEC+Jasp组)。采用Western blot检测各组肝癌细胞中plectin的表达及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子(N-cadherin、vimentin和E-cadherin)的表达;采用Transwell小室法分析肝癌细胞的迁移能力;采用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析与plectin基因有关的信号通路;采用免疫荧光技术检测plectin表达变化对细胞骨架F-actin聚合的影响。结果与正常肝细胞相比,plectin在肝癌细胞中高表达。与shNC组相比,shPLEC组plectin的表达降低(Pplectin的联系最为密切,shPLEC组肝癌细胞骨架F-actin发生解聚。采用F-actin骨架聚合诱导剂Jasplakinolide处理后,与shPLEC+DMSO组相比,shPLEC+Jasp组肝癌细胞迁移能力增强(Pplectin在肝癌细胞中高表达,肝癌细胞中plectin通过诱导F-actin聚合促进肝癌细胞的迁移和EMT。

关键词： plectin 肝癌细胞细胞迁移分析上皮-间质转化细胞骨架 F-actin

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plectin与癌细胞迁移

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医用生物力学 2022年第6期37卷 1177-1182页

作者：徐茹霜宋关斌重庆大学生物工程学院重庆400030

细胞迁移是细胞的一项基本生理活动,不仅在血管重建、炎症反应、组织发育、伤口愈合等方面发挥重要作用,还与癌细胞的侵袭转移有关。plectin(499~533 kDa)是在多种组织和细胞中广泛表达的一种大分子骨架蛋白,具有重要的生物学功能,参与... 详细信息

细胞迁移是细胞的一项基本生理活动,不仅在血管重建、炎症反应、组织发育、伤口愈合等方面发挥重要作用,还与癌细胞的侵袭转移有关。plectin(499~533 kDa)是在多种组织和细胞中广泛表达的一种大分子骨架蛋白,具有重要的生物学功能,参与细胞的多种生理病理过程。plectin可以通过调控细胞骨架影响迁移,也可以通过相关信号分子通路影响迁移。本文主要综述plectin在癌细胞迁移中的作用及其相关分子机制研究进展,为深入认识和研究plectin与癌细胞迁移的关系及其靶向干预提供理论参考。

关键词： plectin 细胞迁移细胞骨架癌细胞

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plectin在猪肉宰后成熟过程中的表达及其与保水性的相关性研究

Plectin在猪肉宰后成熟过程中的表达及其与保水性的相关性研究

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作者：田筱娜南京农业大学

学位级别：硕士

肌肉宰后成熟过程中保水性的变化一直是肉品科学领域的研究热点。近期研究表明关键结构蛋白的降解对宰后成熟过程中鲜肉保水性的变化具有重要贡献。网蛋白（plectin）是广泛分布于肌细胞中的连接蛋白,其特殊的结构和广泛的连接功能对肌... 详细信息

肌肉宰后成熟过程中保水性的变化一直是肉品科学领域的研究热点。近期研究表明关键结构蛋白的降解对宰后成熟过程中鲜肉保水性的变化具有重要贡献。网蛋白（plectin）是广泛分布于肌细胞中的连接蛋白,其特殊的结构和广泛的连接功能对肌纤维骨架结构的完整性和稳定性具有重要意义。本研究旨在探究plectin在猪背最长肌中的分布模式和降解模式,并以plectin-desmin中间丝结构网络为切入点,研究其降解规律与成熟过程中猪肉保水性变化的相关性,以期更好地阐释宰后鲜肉成熟过程中保水性变化的机理。1.猪背最长肌中plectin的分布模式本章通过对宰后成熟Oh的肌肉样品进行免疫荧光染色分析,探究plectin在猪肉中的分布模式。以猪背最长肌（第10到第14根肋骨）为试验材料,通过冷冻切片制备肌肉组织横切和纵切样品,进行plectin和fast-myosin heavy chain的免疫荧光单一染色试验,plectin与desmin、μ-calpain和m-calpain的免疫荧光双重染色试验。结果显示,plectin在猪背最长肌的肌纤维横截面上呈蜂窝状分布模式,在肌纤维纵切面上呈垂直于肌纤维方向的高度有序的条纹状分布。plectin在猪背最长肌细胞中的分布与肌纤维类型相关,且特异性地分布于快肌纤维,而在慢肌纤维中几乎检测不到。此外,plectin与desmin在肌细胞质和细胞膜上存在大量共定位,这种共定位在细胞质中呈现出与肌纤维方向垂直的有规律的条纹状分布。plectin与μ-calpain在肌细胞质和细胞膜上存在大量共定位,但未发现plectin与m-calpain的共定位现象。这表明猪背最长肌中plectin与μ-calpain在时间和空间上存在相互反应的可能性。因此,plectin在猪背最长肌宰后成熟过程中可能会被降解。2.猪背最长肌宰后成熟过程中plectin的降解规律本章通过对宰后成熟过程中的肌肉样品进行免疫印迹分析和免疫荧光分析,探究plectin的降解模式,同时运用calpain抑制剂和caspase抑制剂探究在肌肉宰后成熟过程中降解plectin的内源酶,并通过免疫荧光染色分析作进一步验证。以猪背最长肌（第10到第14根肋骨）为试验材料,真空包装后4℃条件下成熟Oh、6h、12 h、1d、3d、7d和13 d后,进行plectin的免疫印迹分析。结果显示,在猪背最长肌宰后成熟过程中,plectin发生了显著且快速的降解,且呈二次降解模式。完整plectin在1d内被快速降解,在3d内几乎被降解完全。产生分子量约240 kDa的降解产物,该产物在3 d后发生二次降解,同时检测到分子量约20 kDa的降解片段,可能是plectin二次降解的产物。此外,将用于抑制剂浸泡试验的样品切块（0.2g/块）后按1:1（w/v）浸泡于抑制剂溶液中,在4℃条件下成熟1d、3d和7 d后对plectin进行免疫印迹分析。结果显示,calpain抑制剂MDL-28170可以很大程度上抑制猪背最长肌宰后成熟过程中plectin的降解,而caspase抑制剂Ac-DEVD-CHO对plectin的降解几乎没有抑制作用。免疫荧光双重染色试验表明plectin与μ-calpain在猪背最长肌宰后成熟0d和3 d时均存在大量共定位。因此,可以推测μ-calpain可能是猪背最长肌宰后成熟过程中降解plectin的主要内源酶。3.猪背最长肌宰后成熟过程中plectin降解与保水性的相关性研究本章通过对宰后成熟过程中中间丝结构蛋白降解和鲜肉保水性的测定,探究plectin及其相关蛋白的降解与鲜肉水分分布变化的相关性。以猪背最长肌为试验材料,真空包装后4℃条件下成熟0h、6h、12h、1 d、3d、7d和13d后,对样品进行低场核磁共振横向弛豫分析和滴水损失的测定,同时进行plectin、desmin和μ-calpain的免疫印迹分析,然后作相关性分析。结果显示,在猪背最长肌宰后成熟过程中完整plectin和desmin的含量与低场核磁共振横向弛豫参数P21、T21和T22呈显著负相关,而与P22呈显著正相关。且这种相关性建立在成熟早期时完整plectin和desmin的含量与成熟后期的LT-NMR T2参数之间。此外,完整plectin和desmin在宰后成熟过程中具有相似的降解模式。μ-calpain自溶与成熟1d和3d时plectin的表达和成熟1 d、3 d和7 d时desmin的表达具有显著相关性。在成熟13 d内,μ-calpain 80 kDa和78 kDa亚基的含量与P21呈负相关,而与P22呈正相关,这表明μ-calpain可能通过参与细胞骨架结构蛋白、中间丝网状结构和关键膜蛋白的降解作用于肌纤维骨架结构的变化,从而影响成熟过程中水分分布的变化。最

关键词： plectin 宰后成熟 desmin μ-calpain 保水性

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LncRNA DLX6-AS1在前列腺癌发生发展中的作用及机制研究

LncRNA DLX6-AS1在前列腺癌发生发展中的作用及机制研究

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作者：段秋婷昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本课题基于TCGA数据库分析并筛选出与前列腺癌相关的长链非编码RNA,并研究其在调节前列腺癌增殖和侵袭转移过程中的作用机制,探寻前列腺癌新的治疗靶点,寻找前列腺癌微创体液诊断特异性高的生物标志物,为前列腺癌的个体化诊治提... 详细信息

[目的]本课题基于TCGA数据库分析并筛选出与前列腺癌相关的长链非编码RNA,并研究其在调节前列腺癌增殖和侵袭转移过程中的作用机制,探寻前列腺癌新的治疗靶点,寻找前列腺癌微创体液诊断特异性高的生物标志物,为前列腺癌的个体化诊治提供新的方案。从而为探索研发新型前列腺癌靶向药物、优化临床治疗方案提供可靠的理论依据。[方法]1.采用TCGA数据库对52例前列腺癌患者的癌旁正常组织和499例前列腺癌组织进行聚类分析,筛选出显著差异表达的肿瘤相关lncRNA分子;2.体外培养4种前列腺癌细胞系PC3、DU145、22Rv1和LnCaP以及人正常前列腺上皮细胞RWPE-2,分别提取RNA后利用实时荧光定量法检测lncRNA DLX6-AS1在这五种细胞中的mRNA表达量;3.通过核质分离试验检测lncRNA DLX6-AS1在前列腺癌细胞中的定位;4.慢病毒转染前列腺癌细胞系PC3、DU145、22Rv1 和 LnCaP 通过表达 shRNA 下调 lncRNADLX6-AS1后,CCK8细胞增殖活性试剂盒检测lncRNADLX6-AS1敲减对前列腺癌细胞增殖能力的影响,克隆形成实验检测lncRNA DLX6-AS1敲减对前列腺癌细胞存活能力的影响,Transwell小室实验检测lncRNA DLX6-AS1敲减对前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响,凋亡试剂盒检测lncRNADLX6-AS1敲减对前列腺癌细胞抗凋亡能力的影响;***-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测lncRNADLX6-AS1敲减对于前列腺癌细胞对EMT相关标志物的影响;*** pull-down和RIP实验捕获并验证与lncRNADLX6-AS1特异结合的功能蛋白。[结果]1.通过TCGA数据分析后确定lncRNA DLX6-AS1为实验所研究的目的基因;***3细胞mRNA表达量(10.36±0.32)、DU145细胞mRNA表达量(4.59±0.09)、22Rv1 细胞 mRNA 表达量(2.47±0.13)、LnCaP 细胞mRNA表达量(2.70±0.20)均高于人正常前列腺上皮细胞RWPE-2 mRNA表达量(1.00±0.16)(pplectin蛋白能与lncRNADLX6-AS1特异性结合;[结论]*** DLX6-AS1在前列腺癌细胞系中高表达,可能在前列腺癌中起到促癌基因的作用;2.1ncRNA DLX6-AS1可以促进前列腺癌细胞的增殖、侵袭及转移,而抑制凋亡;***6-AS1通过促进EMT过程进而促进前列腺癌的侵袭和转移;*** DLX6-AS1可能通过与plectin结合促进前列腺癌的发生与发展,有望成为临床诊断及治疗的潜在新靶点。

关键词： lncRNA DLX6-AS1 plectin 前列腺癌

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非B细胞来源免疫球蛋白κ型轻链作为细胞骨架相关蛋白参与细胞迁移和肿瘤转移

非B细胞来源免疫球蛋白κ型轻链作为细胞骨架相关蛋白参与细胞迁...

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第十三届全国免疫学学术大会

作者：王宠周温婧邱晓彦北京大学医学部

研究背景:经典免疫学理论认为免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)只能由B细胞产生,本课题组经过多年的研究已经证实非B细胞也可以产生Ig,特别是在肿瘤细胞中高水平表达。非B细胞来源的Ig与经典Ig的可变区呈现高度多样性相比,其可变区的多... 详细信息

研究背景:经典免疫学理论认为免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)只能由B细胞产生,本课题组经过多年的研究已经证实非B细胞也可以产生Ig,特别是在肿瘤细胞中高水平表达。非B细胞来源的Ig与经典Ig的可变区呈现高度多样性相比,其可变区的多样性是有限的,特别是相同谱系非B细胞中,其Ig可变区V-D-J(重链)或V-J(轻链)的重排模式是高度保守的,提示其功能可能也相对保守。前期工作发现,不同上皮来源的肿瘤细胞可以表达带有一致重排模式(包括突变模式)的Igκ型轻链——Vκ4-1/Jκ3型轻链(Vκ4-1/Jκ3 lightchain, Vκ4-1/Jκ3-LC)。经序列比对发现,此Vκ4-1/Jκ3-LC与轻链沉积病和系统性淀粉样变中致病的Vκ4-1型轻链具有高度同源性。利用针对Vκ4-1/Jκ3-LC的特异性单抗,发现其也会以游离、疏水形式存在,带有N-糖基化修饰,易形成二聚体和多聚体。Vκ4-1/Jκ3-LC广泛存在于多谱系来源的非B细胞中,并且高表达于肿瘤细胞中,在细胞内呈现丝网状结构,并与中间丝成分角蛋白相互作用,促进肿瘤细胞的周期演进和转移,提示Vκ4-1/Jκ3-LC可能是迄今未发现的一种细胞骨架相关蛋白。研究目的 :明确Vκ4-1/Jκ3-LC与三种经典细胞骨架(微丝、微管、中间丝)的关系,及其对肿瘤细胞迁移和侵袭的影响,探究其相互作用蛋白和发挥功能的分子机制。方法 :通过共定位分析及相互作用相关实验,明确Vκ4-1/Jκ3-LC与三种经典细胞骨架蛋白的关系,找到相互作用蛋白。通过敲减或过表达Vκ4-1/Jκ3-LC,明确其对细胞功能的影响。结果 :Vκ4-1/Jκ3-LC的丝状结构不依赖三种经典细胞骨架,其与中间丝(不与微丝和微管)存在共定位,与多种中间丝交联。敲减Vκ4-1/Jκ3-LC使中间丝和微丝组装障碍,细胞伪足形成减少、运动、侵袭及肿瘤细胞转移能力下降。机制研究发现,Vκ4-1/Jκ3-LC与一个近年来备受关注的可促进微丝与中间丝组装的蛋白-plectin相互作用,并促进plectin的稳定性,这可能是其影响微丝和中间丝组装的关键。结论 :Vκ4-1/Jκ3-LC是一种潜在的细胞骨架相关蛋白,与肿瘤细胞的运动能力密切相关。

关键词：非B细胞来源Ig Vκ4-1/Jκ3-LC 细胞骨架 plectin 肿瘤细胞运动

来源： cnki会议评论

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