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pin1反义核酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖及周期的影响

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肿瘤防治研究 2007年第12期34卷 917-920页

作者：周金华朱涛李红雨徐钢卢运萍马丁华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心武汉430030

目的本研究利用pin1反义核酸阻断乳腺癌MCF-7细胞中pin1表达,观察其对增殖及周期的影响。方法构建pin1反义核酸真核表达质粒ppin1as,用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞,G418筛选稳定表达重组质粒的克隆,RT-PCR检测pin1基因表达水平... 详细信息

目的本研究利用pin1反义核酸阻断乳腺癌MCF-7细胞中pin1表达,观察其对增殖及周期的影响。方法构建pin1反义核酸真核表达质粒ppin1as,用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞,G418筛选稳定表达重组质粒的克隆,RT-PCR检测pin1基因表达水平,Western blot检测pin1蛋白的表达,MTT检测细胞增殖状况,流式细胞术检测细胞周期。结果稳定表达pin1反义核酸的MCF-7细胞内pin1基因表达在mRNA水平和蛋白水平都显著降低;MTT实验显示MCF-7pinas细胞的增殖速度较MCF-7细胞明显减慢(Ppinas细胞和MCF-7细胞的周期分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论阻断pin1可以显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性,提示pin1可能成为乳腺癌基因治疗的新的靶点。

关键词： pin1 反义核酸乳腺癌

pin1与β-链蛋白—Wnt信号途径的致肿瘤机制

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生命的化学 2007年第2期27卷 154-156页

作者：胡英曾昭淳重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

β-链蛋白(β-catenin)是Wnt信号途径核心成员。Wnt信号传入细胞核致β-链蛋白磷酸化以后,磷酸化依赖肽酰脯氨酰异构酶(pin1)特异性地催化β-链蛋白(p)丝/苏氨酰-脯氨酰肽键的顺反异构[反式(trans)到顺式(cis)],结果β-链蛋白结构稳定... 详细信息

β-链蛋白(β-catenin)是Wnt信号途径核心成员。Wnt信号传入细胞核致β-链蛋白磷酸化以后,磷酸化依赖肽酰脯氨酰异构酶(pin1)特异性地催化β-链蛋白(p)丝/苏氨酰-脯氨酰肽键的顺反异构[反式(trans)到顺式(cis)],结果β-链蛋白结构稳定、保持活性状态。pin1机制是Wnt信号途径致肿瘤重要新机制,并与途径信号分子基因突变等完全无关。

关键词： pin1 β-链蛋白 Wnt信号途径

利用CRISPR/Cas9建立pin1基因敲除的成体神经干细胞系

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南京医科大学学报（自然科学版） 2021年第4期41卷 483-488,521页

作者：胡廷栋王蒙刘晓蕊杨海元戴一凡王盈江苏省异种移植重点实验室南京医科大学医学遗传学系江苏南京211166

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除成体神经干细胞(neural stem cell,NSC)pin1基因,建立pin1基因敲除的成体神经干细胞系。方法:取8周龄C57BL/6小鼠脑室下区的脑组织进行体外培养;设计靶向小鼠pin1基因的单导向RNA(single guide RNA... 详细信息

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除成体神经干细胞(neural stem cell,NSC)pin1基因,建立pin1基因敲除的成体神经干细胞系。方法:取8周龄C57BL/6小鼠脑室下区的脑组织进行体外培养;设计靶向小鼠pin1基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以PX330质粒为骨架,构建pin1的Cas9打靶载体,转染小鼠的成体神经干细胞,通过puro筛选和测序鉴定获得pin敲除的单克隆细胞;利用免疫荧光染色和Western blot测定pin1蛋白表达水平,免疫荧光染色鉴定神经干细胞的特征性标志物巢蛋白(Nestin)的表达,Beta Ⅲ Tubulin免疫荧光染色鉴定神经干细胞分化为神经元的能力。结果:成功构建pin1基因的Cas9/sgRNA表达载体,转染后获得pin1敲除的神经干细胞克隆9个。免疫荧光染色及Western blot显示pin1蛋白无表达,免疫荧光染色显示pin1敲除的神经干细胞Nestin阳性,神经干细胞分化培养时可部分分化为BetaⅢTubulin阳性的神经元细胞。结论:CRISPR/Cas9基因编辑技术可实现对小鼠成体神经干细胞pin1基因的编辑。在pin1基因敲除后pin1蛋白无表达,初步表型分析显示,神经干细胞仍表达特征性标志物Nestin,并具有向神经元分化的能力。

关键词：成体神经干细胞 CRISPR/Cas9 pin1

胰腺导管腺癌肿瘤间质特征与肿瘤细胞pin1表达的相关性

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临床与实验病理学杂志 2019年第4期35卷 397-401,406页

作者：卢梅蔡夕倩张声陈余朋陈林莺福建医科大学附属第一医院病理科福州350005

目的探讨胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)肿瘤间质特征与临床病理特征,及与肿瘤细胞脯氨酸顺反异构酶pin1表达的关系。方法收集2010～2016年PDAC临床样本120例,评价组织切片肿瘤间质特征,构建组织芯片,行肿瘤细胞P... 详细信息

目的探讨胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)肿瘤间质特征与临床病理特征,及与肿瘤细胞脯氨酸顺反异构酶pin1表达的关系。方法收集2010～2016年PDAC临床样本120例,评价组织切片肿瘤间质特征,构建组织芯片,行肿瘤细胞pin1免疫组化染色,并分析PDAC的临床病理特征。结果 120例PDAC患者中,肿瘤间质成熟型33例,不成熟型53例,中间型34例;低肿瘤间质容量85例,高肿瘤间质容量35例;肿瘤细胞pin1低表达48例,高表达72例。肿瘤间质成熟度与PDAC组织学分级(P=0. 029)、淋巴结转移(P=0. 027)有相关性,肿瘤间质容量与PDAC组织学分级显著相关(P1)。肿瘤间质成熟度与肿瘤间质容量(P 1)和肿瘤细胞pin1表达有相关性。Kaplan-Meier生存分析显示PDAC中具有肿瘤间质成熟型(Log-rank=6. 03,HR=1. 83,95%CI=1. 13～2. 98,P=0. 014)和高肿瘤间质容量(Log-rank=15. 23,HR=2. 72,95%CI=1. 74～4. 27,P 1)的患者预后较好。Cox多因素分析显示肿瘤间质容量是患者独立的预后指标。结论 PDAC肿瘤间质特征与PDAC预后差的临床病理特征及肿瘤细胞pin1表达有关。pin1可能参与PDAC肿瘤间质微环境的重塑,有望成为其靶向治疗的潜在分子。

关键词：胰腺导管肿瘤肿瘤间质特征临床病理特征 pin1

pin1在胃癌中高表达的机制及其在胃癌侵袭转移中的作用研究

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PIN1在胃癌中高表达的机制及其在胃癌侵袭转移中的作用研究

作者：陈杨西南大学

学位级别：硕士

肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一,其中胃癌的发病率及死亡率均据前列,在我国甚至居于消化系统首位。随着近年来胃癌诊断和治疗技术的不断提高,其发病率及死亡率均不断降低,但是目前绝大多数胃癌患者仍然是在中晚期才被发现确诊,因此... 详细信息

肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一,其中胃癌的发病率及死亡率均据前列,在我国甚至居于消化系统首位。随着近年来胃癌诊断和治疗技术的不断提高,其发病率及死亡率均不断降低,但是目前绝大多数胃癌患者仍然是在中晚期才被发现确诊,因此其预后效果及生存期往往不甚理想。肿瘤细胞侵袭转移是中晚期肿瘤的重要标志,也是造成肿瘤患者治疗效果不佳甚至死亡的重要原因之一,因此,研究胃癌发展的机制,特别是侵袭转移的机制具有重大的科学及临床意义,相关结果将为探索新的胃癌治疗手段提供理论基础。脯氨酸具有特殊的侧链结构,蛋白质中的肽基-脯氨酰基序天然存在反式和顺式构象,而肽基-脯氨酰顺反异构酶（PPIases）能够催化其顺反构象的变化,进而调控蛋白质的折叠、稳定性、细胞定位及相互作用等。pin1是PPIase家族一员,它是目前已知唯一能介导磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸基序（p Ser/Thr-Pro）构象变化的PPIase。由于Ser/Thr-Pro基序广泛存在于蛋白质中,因此pin1在众多的细胞过程中发挥重要的作用。其表达或活性的异常与多种疾病相关,其表达不足可导致阿尔兹海默病、帕金森综合征以及亨廷顿舞蹈症等,而高表达可导致系统性红斑狼疮和多种肿瘤的发生发展。最新的研究表明,pin1在胃癌中高表达,它可以通过上调BRD4、PI3K/AKT以及Wnt/β-catenin等促进胃癌进展。但是pin1在胃癌中高表达的机制,以及在胃癌侵袭转移中的作用还鲜有报道。据此,本课题拟首先阐明pin1在胃癌侵袭转移中的作用,其次在转录后水平揭示pin1在胃癌中高表达的机制。目的:阐明pin1在胃中高表达的分子机制及其在胃癌侵袭转移中的作用。方法:1.采用q RT-PCR和Western Blot检测系列胃癌细胞株中pin1的本底表达水平,然后在低表达的细胞株中过表达pin1,在高表达细胞株中干扰pin1。同时检测pin1在临床胃癌和癌旁组织标本中的表达水平,验证pin1在胃癌中的高表达;2.通过CCK-8及Transwell实验探索pin1在胃癌增殖、侵袭和转移中的作用;3.不同数据库（mir Tarbase、mi Randa、Target Scan、mi RNApath和starbase）预测潜在靶向pin1的microRNA,以取交集的方法筛出备选;4.通过qRT-PCR及Western Blot实验筛选出抑制pin1表达的microRNA;5.采用RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）技术及双萤光素酶报告实验证明目标microRNA直接结合pin1 m RNA的3’UTR并阐明结合位点;6.采用CCK-8及Transwell实验探索目标microRNA在胃癌增殖、侵袭和转移中的作用;7.通过CCK-8及Transwell实验确定目标microRNA通过抑制pin1的表达发挥抑胃癌作用;8.检测目标microRNA在胃癌临床标本及组织芯片中的表达水平,比较癌和癌旁组织中表达水平的区别,并统计与pin1表达、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移的相关性。同时统计目标microRNA表达与患者生存期的感受性（ROC）曲线,并以此为标准统计目标microRNA表达水平与患者生存期的关系。结果:***1在胃癌临床标本以及胃癌细胞株中普遍高表达;***1显著促进胃癌的增殖、侵袭和转移;3.在胃癌细胞中mi R-628-5p直接抑制pin1的表达;***-628-5p通过抑制pin1进而抑制胃癌的增殖、侵袭和转移;***-628-5p在胃癌组织中普遍低表达,其表达水平与pin1表达水平、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移负相关,而与患者生存期正相关。MiR-628-5p表达水平与患者生存期ROC曲线下面积为0.7369。结论:本研究在细胞及临床标本水平验证了pin1在胃癌中的高表达。高表达pin1可以显著促进胃癌的增殖、侵袭和转移,而mi R-628-5p能够通过抑制pin1进而抑制胃癌细胞的上述进展。MiR-628-5p的表达水平与pin1表达、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移负相关,而与患者的生存期正相关。MiR-628-5p表达水平与患者生存期的ROC曲线下面积为0.7369,提示以mi R-628-5p表达水平预测患者预后具有一定的准确性。但是,在胃癌组织中mi R-628-5p表达普遍低于癌旁组织,说明mi R-628-5p表达不足可通过促进pin1表达进而促进胃癌进展。以上结果提示mi R-628-5p和pin1可以作为胃癌治疗的潜在靶点以及预测预后的潜在标志。

关键词： pin1 miR-628-5p 胃癌侵袭转移

pin1和Cyclin D1在原发性肝癌中的表达及意义

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Pin1和Cyclin D1在原发性肝癌中的表达及意义

作者：郑东林广西医科大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过检测原发性肝癌、相应癌旁组织及正常肝组织中pin1及Cyclin D1的表达,探讨这两个基因在肝癌发病中的作用及与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(RQ RT-PCR)方法,对收集的48例经手术切除及... 详细信息

目的:本实验通过检测原发性肝癌、相应癌旁组织及正常肝组织中pin1及Cyclin D1的表达,探讨这两个基因在肝癌发病中的作用及与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(RQ RT-PCR)方法,对收集的48例经手术切除及病理学证实的原发性肝癌患者的癌组织标本及相应癌旁组织、8例正常肝组织,进行pin1及Cyclin D1基因检测,比较肝癌、癌旁组织及正常肝组织中两基因表达的差异,分析两者之间的相关性及其与肿瘤临床分期和病理特征的关系。结果: pin1基因在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中扩增的△Ct值均数分别为3.01±0.74、5.43±1.00、6.09±1.22,pin1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(△Ct值3.01±0.74对5.43±1.00, p1±0.74对6.09±1.22, p1基因在肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中扩增的△Ct值均数分别为4.58±0.90、6.76±0.84、6.97±1.12,Cyclin D1在肝癌组织中的表达亦明显高于癌旁组织(△Ct值4.58±0.90对6.76±0.84, p1.12, ppin1与Cyclin D1的表达密切正相关(p1),但pin1和Cyclin D1与性别、年龄、肿瘤的分期、肿块直径、有无包膜、有无癌栓、AFP等病理特征均无明显的相关性。结论: pin1和Cyclin D1在原发性肝癌中的表达明显增高,pin1可能间接或直接与Cyclin D1相互作用而调节细胞周期,从而在肝癌发生过程中起着重要作用,并可能成为治疗肝癌的新靶点。pin1及Cyclin D1的表达与原发性肝癌的临床病理特征无明显关系。

关键词：原发性肝癌基因 pin1 Cyclin D1 实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应

pin1在小鼠胚胎着床和蜕膜化过程中的表达及功能

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Pin1在小鼠胚胎着床和蜕膜化过程中的表达及功能

作者：徐瑞安徽医科大学

学位级别：硕士

胚胎着床和蜕膜化是早期妊娠过程中的两个关键环节,对于正常妊娠的建立和维持起着至关重要的作用。pin1（protein interaction with NIMA1）是一种肽基-脯氨酰异构酶（peptidyl-prolyl isomerases,PPIase）,其失调会导致包括肿瘤在内的... 详细信息

胚胎着床和蜕膜化是早期妊娠过程中的两个关键环节,对于正常妊娠的建立和维持起着至关重要的作用。pin1（protein interaction with NIMA1）是一种肽基-脯氨酰异构酶（peptidyl-prolyl isomerases,PPIase）,其失调会导致包括肿瘤在内的多种疾病的发生。然而,尚未见有关pin1在妊娠子宫中调节及功能的详细研究,且关于pin1在小鼠胚胎着床和子宫蜕膜化过程中的调控和功能的研究也未见报道。为了探讨在早期妊娠中pin1与胚胎着床和子宫蜕膜化的关系,首先通过免疫组化,RT-PCR和Western-Blot实验检测pin1在小鼠早期妊娠子宫中的定位表达情况。结果显示,pin1在妊娠D1和D4子宫的腔上皮和腺上皮上表达,在妊娠D5天,主要在着床点周围的基质细胞中表达,在妊娠D6～D8时,则开始在次级蜕膜区和胚胎上表达。RT-PCR结果显示,在妊娠D1～D8的小鼠子宫中pin1在m RNA水平的表达逐渐增强。Western-Blot结果进一步验证,随着妊娠的进行,pin1在小鼠子宫中的蛋白表达逐渐增强,并且在妊娠D5天着床点的表达高于非着床点。在人工诱导蜕膜化模型中,pin1在对照小鼠子宫的腔上皮和腺上皮上表达,而在诱导蜕膜化小鼠子宫中则在次级蜕膜区高表达,与正常妊娠D6～D8相似。雌激素和孕酮处理小鼠基质细胞进行体外诱导蜕膜化时,pin1在蜕膜化处理后表达明显增强。我们用pin1的特异性抑制剂Juglone处理妊娠小鼠来分别研究pin1在小鼠胚胎着床和子宫蜕膜化中的作用,发现经腹腔注射Juglone后在妊娠D5小鼠子宫中胚胎的着床位点数明显减少,且妊娠D7子宫蜕膜的大小明显小于对照组。RT-PCR结果验证,雌激素的效应基因Muc1作为一种抗性分子,在经Juglone处理小鼠后在妊娠D5小鼠子宫异常上调,蜕膜化标志分子Dtprp在Juglone处理小鼠后在妊娠D7小鼠子宫明显下调,而孕酮的效应基因Hand2,Hoxa10在Juglone处理小鼠后在妊娠D5和D7小鼠子宫中均下调,表明抑制pin1的表达对于小鼠胚胎着床和蜕膜化过程均是不利的。β-catenin作为Wnt信号通路一员,在胚胎着床和蜕膜化过程中均具有重要作用,在小鼠子宫中的表达定位与pin1相似,且已有研究表明pin1可以调节β-catenin的亚细胞定位,因此我们推测两者之间存在某种联系。Western-Blot结果发现腹腔注射Juglone后在小鼠胚胎着床和蜕膜化过程中pin1和β-catenin蛋白表达均明显减少。分别用1μM和5μM的Juglone抑制剂在体外处理小鼠基质细胞后,pin1和β-catenin的蛋白表达减少,且在5μM浓度时抑制效果最明显。在体外诱导蜕膜化的细胞中,转染pin1 siRNA,发现敲低pin1的表达后,β-catenin的表达降低,且蜕膜标志分子Dtprp表达也降低。最后,我们利用获取的临床标本（正常月经周期分泌中期的子宫内膜作为对照和反复着床失败的同时期的子宫内膜）通过RT-PCR实验检测了两个样本之间子宫内膜中pin1的表达变化,结果发现在反复着床失败患者子宫内膜中pin1的表达显著下调。综上所述,我们推测pin1在调控胚胎着床和蜕膜化过程起重要作用。

关键词： pin1 胚胎着床蜕膜化

pin1对胶原诱导的关节炎小鼠影响及在RA患者外周血表达水平研究

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Pin1对胶原诱导的关节炎小鼠影响及在RA患者外周血表达水平研究

作者：王晓娟福建医科大学

学位级别：硕士

目的类风湿性关节炎是一种常见的慢性、累及多个关节的自身免疫性疾病,然而其发病机制尚不完全清楚。近几年发现pin1参与免疫应答反应,可能在RA的疾病进展发挥重要作用。为了解pin1在小鼠类风湿性关节炎疾病进展中发挥的作用,本课题通... 详细信息

目的类风湿性关节炎是一种常见的慢性、累及多个关节的自身免疫性疾病,然而其发病机制尚不完全清楚。近几年发现pin1参与免疫应答反应,可能在RA的疾病进展发挥重要作用。为了解pin1在小鼠类风湿性关节炎疾病进展中发挥的作用,本课题通过建立胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型,抑制pin1表达,观察CIA小鼠疾病进展及转归情况,分析pin1在CIA中的作用,为治疗RA提供新思路;检测RA患者外周血单个核细胞pin1表达水平,研究其表达水平与临床指标相关性。方法1、DBA/1小鼠55只,随机分组选取8只小鼠为健康对照组,其它小鼠均进行CIA造模,根据关节炎评分指数选出符合条件的CIA小鼠,随机为3组:pin1抑制剂治疗组6只皮下包埋全反式维甲酸全反式维甲酸(all transretinoic acid,ATRA)缓释片,地塞米松治疗组7只腹腔注射地塞米松磷酸钠溶液,疾病模型对照组7只注射与地塞米松等体积的生理盐水。检测小鼠足厚度、足体积及小鼠关节炎症评分。2、HE染色:取小鼠两侧踝关节固定、脱水、透明,石蜡包埋、切片,HE染色,镜下观察小鼠关节病变情况。3、免疫印迹Western blot检测不同治疗情况下小鼠滑膜组织中pin1及NF-κB的表达情况。4、收集47例RA患者,25例健康人抗凝血,分离出单个核细胞(PBMCs),Western blot和Q-PCR技术检测外周血单个核细胞pin1表达量。结果:1.成功建立DBA/1小鼠CIA模型,建模成功的小鼠在体重、足厚度、足体积、关节炎评分等与健康小鼠相比,差异均有统计学意义(Ppin1蛋白表达:CIA小鼠pin1蛋白表达量较健康对照组明显升高,在关节炎评分相近小鼠中,ATRA及地塞米松治疗组pin1表达组低于疾病对照组,且ATRA组低于地塞米松组。NF-κB表达趋势与pin1相同。关节炎评分越高的小鼠滑膜pin1相对表达量越高。4.收集RA患者血液标本47例,其中活动组26例,稳定组21例,健康对照组25例,二者年龄、性别均匹配。RA pin1 mRNA的表达水平明显高于健康对照组,二者之间表达有统计学差异(Ppin1蛋白表达水平无明显差异。结论:1.成功建立CIA小鼠模型,成功率70%左右。***小鼠关节滑膜pin1蛋白呈高表达,ATRA能够抑制pin1表达,同时能够降低CIA关节炎及其病理损害,pin1或许可作治疗RA的靶标之一。***患者外周血单个核细胞pin1 mRNA表达增高,并与关节压痛个数呈正相关,日后或可作为疾病进展或判断预后的参考指标之一。

关键词：类风湿性关节炎胶原诱导关节炎模型单个核细胞 pin1 滑膜

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pin1在黑色素瘤干细胞中的作用

Pin1在黑色素瘤干细胞中的作用

作者：黎美青福建医科大学

学位级别：硕士

研究目的:探讨pin1在黑色素瘤干细胞中的作用及pin1靶向药物治疗的潜在作用,为黑色素瘤的治疗提供实验基础和开拓新的思路。研究方法:1.通过包装pin1 shRNA慢病毒、感染黑色素瘤细胞及药物筛选,获得稳定敲减pin1基因的黑色素瘤细胞株。... 详细信息

研究目的:探讨pin1在黑色素瘤干细胞中的作用及pin1靶向药物治疗的潜在作用,为黑色素瘤的治疗提供实验基础和开拓新的思路。研究方法:1.通过包装pin1 shRNA慢病毒、感染黑色素瘤细胞及药物筛选,获得稳定敲减pin1基因的黑色素瘤细胞株。用Western Blot和流式细胞术探索敲减黑色素瘤细胞pin1基因后干细胞标志物的表达水平。2.敲减黑色素瘤细胞pin1基因,利用软琼脂克隆形成实验探索黑色素瘤细胞克隆增殖和采用黑色素瘤干细胞微球形成方法探讨干细胞微球形成能力。3.在裸鼠后翼一侧皮下注射1*10^6个敲减pin1基因的黑色素瘤细胞,另一侧注射同数量的对照细胞,探讨敲减pin1基因的黑色素瘤细胞裸鼠体内致瘤性。4.敲减pin1基因的黑色素瘤细胞梯度稀释行裸鼠皮下成瘤实验探讨黑色素瘤干细胞的致瘤性。5.裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组裸鼠尾静脉注射2*10^6个敲减pin1基因的黑色素瘤细胞,对照组注射同数量的对照细胞,探讨黑色素瘤细胞pin1基因敲减后裸鼠肺部转移能力。6.黑色素瘤细胞注射裸鼠皮下,成瘤后随机分组,单药处理分2组,联合用药处理分4组,用pin1抑制剂ATRA或联合Vemurafenib用药处理裸鼠,探讨pin1抑制剂ATRA对黑色素瘤的治疗作用以及探讨联合Vemurafenib治疗黑色素瘤的研究。7.用免疫组织化学染色方法检测人临床样本和黑色素瘤组织芯片中pin1蛋白的表达程度。研究结果:*** Blot显示与黑色素瘤细胞干性标志物NANOG在pin1基因敲减后下调,分化相关标志物MITF在pin1基因敲减后上调。2.流式细胞术显示pin1基因敲减后下调黑色素瘤干细胞相关的标志物CD271和ALDH1表达。3.软琼脂克隆形成实验显示黑色素瘤细胞克隆增殖能力在敲减pin1基因后降低;黑色素瘤干细胞微球形成实验显示相比对照组,敲减pin1基因的黑色素瘤细胞微球数少且体积小。4.裸鼠皮下异种移植黑色素瘤细胞的肿瘤生长和裸鼠尾静脉注射黑色素瘤细胞的肺部转移能力在黑色素瘤细胞敲减pin1基因后受到抑制。5.黑色素瘤细胞敲减pin1基因后梯度稀释裸鼠皮下成瘤实验显示在1*10^3、1*10^4、1*10^5个细胞梯度中没有观察到肿瘤的形成。***单药处理裸鼠皮下黑色素瘤细胞荷瘤,实验显示与对照组相比,pin1抑制剂ATRA单药能抑制裸鼠皮下肿瘤的生长。7.免疫组织化学染色人临床样本和黑色素瘤组织芯片显示156例病人中有22例高表达(+++),43例中表达(++),46例低表达(+),45例不表达(-)。结论:我们研究的结果显示有14.1%黑色素瘤病人肿瘤组织高表达pin1。在黑色素瘤细胞中敲减pin1基因后细胞克隆增殖降低,与干性或分化相关的标志物表达异常,黑色素瘤干细胞标志物及干细胞微球形成能力均下调。裸鼠黑色素瘤细胞的肿瘤生长和肺部转移的能力均在黑色素瘤细胞pin1基因敲减后得到抑制。pin1抑制剂ATRA能够抑制裸鼠皮下黑色素瘤细胞的肿瘤生长。因此,我们认为pin1通过调控黑色素瘤干细胞而促进黑色素瘤发展,其抑制剂的应用有可能为临床上治疗黑色素瘤提供一个新的思路。

关键词： pin1 黑色素瘤干细胞 ATRA Vemurafenib