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环球中医药 2024年

作者：沈一凡韩琳孟佳贾奇张晓宇秦建国上海中医药大学附属中医医院急诊与重症医学科北京中医药大学中医学院北京中医药大学东方医院经开区院区综合内科北京中医药大学东直门医院脑病科北京中医药大学东方医院重症监护室北京中医药大学东方医院肾病科

目的探讨通络益肾方对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化及压电式机械敏感离子通道组件1(piezo-type mechanosensitive ion channel component 1,piezol)的影响。方法以UUO大鼠为模型,以通络益肾方为干预手段,以缬沙坦为阳性药,连续给药14天。观察大鼠血肌酐和尿素氮变化。采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察:大鼠肾脏病理形态学变化。采用Ⅲ型胶原免疫组化评估大鼠肾间质纤维化程度。采用CD34免疫荧光观察大鼠肾脏肾小管周毛细血管(peritubular capillary,PTC)变化。采用免疫组化、免疫蛋白印记法和转录PCR观察大鼠肾脏piezo1及其下游分子mRNA以及蛋白表达改变。结果与假手术组相比,模型组血清肌酐和尿素氮水平升高(P0.05)较低。与假手术组相比,模型组镜下观察肾间质纤维化改变明显,PTC明显减少,piezo1表达增加,经通络益肾方和缬沙坦干预后UUO大鼠肾脏间质纤维化程度改善,PTC增多,piezo1表达减少。与假手术组相比,模型组piezo1蛋白表达显著增加(P<0.05),通络益肾方和缬沙坦干预均能降低piezo1蛋白表达(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠肾组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达增多(P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组PlGF表达增多(P<0.05);模型组PlGF的受体血管内皮生长因子受体1(FMS-like tyrosine kinase1,flt1)表达较假手术组减少(P<0.05),缬沙坦组与通络益肾方组与模型组相比flt1表达水平的升高。结论通络益肾方能明显改善UUO大鼠肾间质纤维化进展,其机制可能是通过下调piezo1蛋白表达,上调ADM、PlGF及其受体flt1表达,减轻PTC损伤,起到拮抗肾间质纤维化的作用。

关键词：肾间质纤维化通络益肾方 UUO大鼠 piezol 肾小管周毛细血管胎盘生长因子血管内皮生长因子受体1

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基于piezol调节的姜黄素对骨肉瘤细胞迁移及凋亡的影响及机制研究

基于piezol调节的姜黄素对骨肉瘤细胞迁移及凋亡的影响及机制研究

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作者：姜山广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:实验一:通过收集骨肉瘤及癌旁组织临床病理标本,研究piezol在骨肉瘤样本中的表达情况,阐述piezol与骨肉瘤发病的潜在关联。实验二:通过细胞实验,观察piezol在姜黄素干预的骨肉瘤细胞系U2-0S中的表达情况,并分析piezol及姜黄素共同... 详细信息

目的:实验一:通过收集骨肉瘤及癌旁组织临床病理标本,研究piezol在骨肉瘤样本中的表达情况,阐述piezol与骨肉瘤发病的潜在关联。实验二:通过细胞实验,观察piezol在姜黄素干预的骨肉瘤细胞系U2-0S中的表达情况,并分析piezol及姜黄素共同干预对细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响。方法:实验一:收集临床骨肉瘤病理标本,本实验共纳入5例骨肉瘤患者癌组织及对应癌旁组织的石蜡标本;制作石蜡切片进行免疫组化分析,检测piezol的表达。所有病理标本均来自广州中医药大学第一附属医院。实验二:通过U2-0S细胞系,将细胞以不同浓度姜黄素进行干预,应用转录组测序技术检测姜黄素干预细胞后转录组基因表达情况,应用姜黄素、siRNA分别及共同干预细胞后,Q-PCR、western blot、钙成像检测piezol基因及蛋白表达,划痕实验检测细胞迁移功能,Annexin V/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡及增殖。成果:免疫组化结果示对比癌旁组织,在骨肉瘤组织中piezol基因表达较高;且转录组测序结果示姜黄素干预细胞后piezol基因明显下调,QPCR、western blot及钙成像验证姜黄素对piezol的下调作用及piezol沉默的作用。划痕实验、流式细胞术结果表明姜黄素及沉默piezol后可抑制细胞的迁移和增殖,促进细胞凋亡,当姜黄素及siRNA共同干预细胞后,细胞增殖及迁移能力进一步下降,诱导细胞进一步凋亡。结论:piezol在骨肉瘤组织中高表达,可能是骨肉瘤诊断、治疗的潜在靶点。另,piezol蛋白在骨肉瘤细胞系的多种生理活动中起重要作用,piezol特异性沉默可增加骨肉瘤细胞对姜黄素的敏感性,可进一步抑制骨肉瘤细胞的迁移并促进细胞凋亡,为骨肉瘤的治疗提供的新的思路。

关键词：骨肉瘤姜黄素 piezol

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机械敏感性离子通道Piezo1在循环系统疾病中的研究进展

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中国心血管杂志 2022年第6期27卷 597-601页

作者：陈翠申锷上海市胸科医院上海交通大学医学院附属胸科医院超声科200030

Piezo1通道是一种非选择性阳离子机械敏感性离子通道,主要表达于非兴奋细胞中,是多种生理过程不可或缺的部分。Piezo1通道结构和功能异常可导致多种疾病病理生理过程,如淋巴水肿、主动脉瓣二叶瓣、胚胎血管重构缺陷等。本文将从心脏、... 详细信息

Piezo1通道是一种非选择性阳离子机械敏感性离子通道,主要表达于非兴奋细胞中,是多种生理过程不可或缺的部分。Piezo1通道结构和功能异常可导致多种疾病病理生理过程,如淋巴水肿、主动脉瓣二叶瓣、胚胎血管重构缺陷等。本文将从心脏、血管、淋巴系统三方面综述Piezo1与循环系统疾病的研究进展。

关键词： piezol 机械敏感性离子通道循环系统疾病

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机械敏感性通道蛋白Piezo1在大鼠肺内外动脉平滑肌细胞的表达及功能研究

机械敏感性通道蛋白Piezo1在大鼠肺内外动脉平滑肌细胞的表达及功...

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作者：钟典广州医科大学

学位级别：硕士

[研究背景]肺动脉高压是严重的不可逆的致死性疾病,而血管重塑是肺动脉高压发生发展过程中的重要病理生理过程——肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和迁移可导致肺动脉中层肌层增厚以及平滑肌向... 详细信息

[研究背景]肺动脉高压是严重的不可逆的致死性疾病,而血管重塑是肺动脉高压发生发展过程中的重要病理生理过程——肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的增殖和迁移可导致肺动脉中层肌层增厚以及平滑肌向非肌性毛细血管内延伸。细胞内钙稳态在肺动脉平滑肌细胞的收缩、增殖和迁移中有重要意义[31][32]。Piezo1机械敏感性通道作为非选择性阳离子通道蛋白之一,对Ca2+有透过性,而Ca2+在血管的生理病理中有着非常关键的调节作用。同时已有研究证实,Piezo1参与血管内皮细胞及平滑肌细胞的生理病理过程,现如今对Piezo1与血管的研究大多聚焦在血管内皮上,在动脉平滑肌方面,已有证实其参与小动脉的结构重塑。除此以外,Piezo1还参与了压力感受反射过程,直接参与人体血压的调控[7]。另外,在高血压患者中,Piezo1开放增加对动脉平滑肌细胞的增殖作用,进而影响其直径和血管壁厚度。既往有学者认为,肺动脉高压的重塑仅在中小动脉显著,是因为SOCC及ROCC在近心和末梢肺动脉动脉平滑肌上的表达有差异,进而对钙离子调控的能力有差异,特别是TRPC1、6在肺动脉及肺动脉平滑肌细胞的表达,末梢皆大于近心[28],它们分别介导SOCE和ROCE,在钙离子调控方面,两者介导的钙离子内流在末梢大于近心段[28]。且在缺氧情况下,末梢细胞胞内钙离子增高水平较近心段的增高水平更高。那么在Piezo1上是否也会存在相似的情况呢?在肺动脉的重塑中,中小动脉的重塑较大动脉显著,这是否与机械敏感性钙通道在不同直径的肺动脉上表达或功能的差异相关,另外,缺氧时肺小动脉痉挛,而大动脉基本不会发生这种情况,相关研究也表明同为离子通道的TRPC瞬时电位受体通道蛋白在肺内外动脉表达有差异,进而对Ca2+的调控作用也不同[28],那么Piezo1在中小动脉和大动脉的表达是否也有差异,或是否与上述情况相关,尚未有研究表明,有待进一步探究。[研究目的]本研究的目的是探索机械敏感性通道蛋白Piezo1在大鼠不同肺段的表达情况,及其对Ca2+的调控作用。[研究方法]1、分离肺内外动脉并分别培养原代细胞,运用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测两者Piezo1mRNA及蛋白表达水平。2、运用钙离子成像技术,对比肺内外动脉平滑肌细胞在Yoda1刺激下,由Piezo1介导的细胞内钙离子调控(包括钙内流及钙释放)的差异。3、分别培养肺内外动脉平滑肌原代细胞并进行低氧处理,检测Piezo1表达及由Piezo1介导的细胞内钙离子调控的差异。4、用细胞增殖实验CCK-8试剂盒检测在一定浓度Yoda1慢性刺激下,肺内外平滑肌细胞增殖情况。[实验结果]1.肺内外动脉平滑肌细胞中的Piezo1mRNA表达无明显差异;肺内动脉平滑肌细胞Piezo 1蛋白表达高于肺外平滑肌细胞。2.肺内外动脉平滑肌细胞上的Piezo1都能介导钙离子内流,且二者基础钙水平无差异,但较肺外动脉平滑肌,肺内动脉平滑肌细胞上的Piezo1在Yoda1的急性刺激下,可引起更高水平的钙内流;而在去除Yoda1刺激,换用含钙PSS基础液灌流后,一定时间内,肺内动脉平滑肌的胞内钙水平下降更显著。3.肺内外平滑肌细胞在钙释放的能力上无显著差异。4.一定浓度Yoda1慢性刺激使Piezo1通道开放,一定时间内可使肺内动脉平滑肌细胞增殖,肺外动脉平滑肌细胞增殖不明显。5.低氧对肺内外动脉平滑肌细胞Piezo1的表达及功能影响不大。分别对比正常氧情况,单纯低氧处理后的肺内外平滑肌细胞由Piezo1介导的钙内流程度无明显差异,在细胞相对基础钙水平及Yoda1对Piezo1激活的持续程度方面亦无明显差别。[实验结论]Piezo1蛋白在肺内外动脉平滑肌细胞上的表达存在差异,在激动剂Yoda1的急性刺激下,二者对钙内流调控水平有差异,且肺内动脉平滑肌细胞对Yoda1更加敏感;肺内外动脉平滑肌细胞的细胞器储存Ca2+及细胞器膜上Piezo1通道钙释放功能无明显差异,肺内外动脉在受到同样的刺激使Piezo1激活时,胞内的钙离子浓度增加主要是由膜上Piezo1介导的胞外钙内流所致;激活Piezo1通道,肺内动脉平滑肌增殖,肺外动脉平滑肌增殖不明显。

关键词：肺动脉平滑肌细胞 piezol 钙离子调控

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