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An inducible constitutive expression system in Bombyx mori mediated by phic31 integrase

Insect Science 2021年第5期28卷 1277-1289页

作者： Feng Wang Yan-Ting Ji Chi Tian Yuan-Cheng Wang Shen Xu Ri-Yuan Wang Qian-Qian Yang Ping Zhao Qing-You Xia State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology Chongqing Engineering and Technology Research Center for Novel Silk MaterialsBiological Science Research CenterSouthwest UniversityChongqingChina

Inducible gene-expression systems play important roles in gene functional assays in the post-genome *** phage-derived phic31 integrase,which mediates an irreversible site-specific cassette exchange between the phage attachment site(attP)and the bacterial attachment site(attB),provides a promising option for the construction of a controllable gene-expression ***,we report a phic3I integrase-mediated promoter flip system(FLIP)for the inducible expression of target genes in silk-worm(Bombyx mori).First,we constructed a FLIP reporter system,in which a BmAct4 promoter with enhanced translational efficiency was flanked by the attB and attP sites in a head-to-head orientation and further linked in a reverse orientation to a DsRed reporter *** coexpression of a C-terminal modified phic3 I-NLS integrase carrying a simian virus 40(SV40)nuclear localization signal(NLS)effectively flipped the BmAct4 promoter through an attBlattP exchange,thereby activating the downstream expression of DsRed in a silkworm embryo-derived cell line,***,the FLIP system,together with a system continuously expressing the phic3 I-NLS integrase,was used to construct binary transgenic silkworm *** between FLIP and phic31-NLS transgenic silkworm lines resulted in the successful flipping of the BmAct4 promoter,with an approximately 39%heritable transformation efficiency in silkworm offispring,leading to the constitutive and high-level expression of DsRed in silkworms,which accounted for approximately 0.81%of the silkworm pupal *** successful development of the FLIP system offers an effective alternative for manipulating gene expression in silkworms and other lepidopteran species.

关键词： inducible gene expression phic31 integrase promoter flipping silkworm

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