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percoll Gradient Optimization for Blood CD133+ Stem Cell Recovery

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Stem Cell Discovery 2014年第3期4卷 61-66页

作者： Rosa María López-Franco Jorge E. Moreno-Cuevas María Teresa González-Garza Servicio de Terapia Celular School of Medicine CITES Tecnológico de Monterrey Monterrey México

Circulating CD133+ stem cells from the peripheral blood have been shown to be able to differentiate into numerous cell lineages. However, adults have only a small number of these circulating stem cells. The aim of the present study was to assess a new isolation and enrichment technique for CD133+ stem cells from peripheral blood with the use of percoll density gradients. Our results demonstrated the presence of two large mononuclear bands when whole blood was centrifuged with 48% and 50% percoll concentrations. Flow cytometric analysis (FACS) revealed a major CD133+ enrichment at the 48% percoll concentration in one of the two bands. Further culture of these cells resulted in the formation of multiple colony-forming units. Our results suggest an advantage from using a simple percoll gradient for successful CD133+ cell recovery, which could aid in differentiation and transplantation protocols.

关键词： Stem Cells Recovery CD133+ percoll Density Gradients

percoll离心结合免疫磁珠分选的方法从外周血分离单核细胞

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免疫学杂志 2021年第5期37卷 454-460页

作者：肖剑梅何韦韦王昊亮万星邓国宏西南大学生命科学学院重庆400715 陆军军医大学西南医院感染病科感染病研究重庆市重点实验室重庆400038

目的探讨采用percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴... 详细信息

目的探讨采用percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选从人外周血富集白细胞层中分离提纯单核细胞的方法。方法采用Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞得到外周血单个核细胞,percoll密度梯度离心从外周血单个核细胞中富集单核细胞,免疫磁珠阴性分选纯化单核细胞。流式细胞术检测细胞CD14和CD16的表达,分析单核细胞分离纯度。M-CSF诱导单核细胞分化为巨噬细胞。IFN-γ诱导巨噬细胞促炎性分化后,流式细胞术分析共刺激分子及HLA-DR的表达,RT-qPCR检测其细胞因子表达。结果percoll分离结合免疫磁珠阴性分选分离出纯度为93.1%±1.5%的单核细胞。分离出的单核细胞呈煎蛋形,能成功分化为体积大、黏附力强、且呈纺锤状的巨噬细胞。与对照组相比,巨噬细胞在IFN-γ刺激下促炎性分化后,共刺激分子及HLA-DR表达显著上调,TNF-α、IL-6、CXCL10和CXCL11 mRNA表达也均显著上调。结论percoll密度梯度离心结合免疫磁珠阴性分选能分离出高纯度且具有功能活性的单核细胞。

关键词： percoll 免疫磁珠分选单核细胞巨噬细胞分离

percoll密度离心富集慢性粒细胞白血病DC前体细胞

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吉林大学学报（医学版） 2007年第1期33卷 102-104页

作者：李杰邵明柏康丽花吉林大学第一医院干部病房吉林长春130021 吉林大学第一医院血液肿瘤科吉林长春130021

目的:建立一种有效、费用低的富集慢性粒细胞白血病树突状细胞(DC)前体细胞的方法。方法:Ficoll-Hypaque液常规分离慢性粒细胞白血病(CML)外周血单个核细胞,55%percoll密度离心,比较percoll分离后的低密度层细胞(B组)、高密度层细胞(C组... 详细信息

目的:建立一种有效、费用低的富集慢性粒细胞白血病树突状细胞(DC)前体细胞的方法。方法:Ficoll-Hypaque液常规分离慢性粒细胞白血病(CML)外周血单个核细胞,55%percoll密度离心,比较percoll分离后的低密度层细胞(B组)、高密度层细胞(C组)及未经percoll分离细胞(A组)的细胞分类、诱导后CD1a、CD86表达。结果:55%percoll混悬液分离后的B组细胞中早幼粒和中幼粒细胞所占百分比高于A组(Ppercoll混悬液分离外周血单个核细胞可提高DC诱导的比率,且该方法无毒、费用低、易操作、分离细胞数量大,可充分满足临床DC的回输需要。

关键词： percoll 富集白血病髓样慢性树突状细胞

percoll非连续等密度梯度离心法纯化牛肾上腺嗜铬细胞

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解剖学杂志 2005年第2期28卷 234-236,F003页

作者：张晓慧王为于炜婷雄鹰张旭朗张英马小军中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组大连116023

肾上腺髓质嗜铬细胞是具有合成、储存和分泌儿茶酚胺功能的神经元样细胞[1,2],对疼痛和帕金森病的治疗具有显著效果[3].但是,肾上腺髓质嗜铬细胞在体外无增殖能力,只能依赖于肾上腺髓质的分离来获取.牛的肾上腺髓质细胞(Bovine Chromaff... 详细信息

肾上腺髓质嗜铬细胞是具有合成、储存和分泌儿茶酚胺功能的神经元样细胞[1,2],对疼痛和帕金森病的治疗具有显著效果[3].但是,肾上腺髓质嗜铬细胞在体外无增殖能力,只能依赖于肾上腺髓质的分离来获取.牛的肾上腺髓质细胞(Bovine Chromaffin Cells, BCC)由于产量高,易分离获取而成为首选的细胞来源,同时建立一种能够满足临床移植需要的BCC分离纯化方法也显得十分重要.但目前通常采用的方法[4～7]很少考虑细胞的产率、纯度及工艺成本.为此,本文建立了一种稳定、经济、简单的BCC分离纯化方法,为细胞临床移植提供充足、健康的细胞来源.

关键词：牛肾上腺嗜铬细胞密度梯度离心法 percoll 肾上腺髓质嗜铬细胞肾上腺髓质细胞神经元样细胞分离纯化方法 Cells 儿茶酚胺帕金森病增殖能力细胞来源 BCC

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percoll密度梯度离心分离牛精子初探

中国畜牧杂志 1991年第3期27卷 12-14页

作者：陈元明黄美玉邵桂芝崔可仕吕奇于德洪中国农科院畜牧所北京市奶牛研究所

用2.9％柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26％percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵黄的牛冷冻稀释液平衡滴冻,解冻后活力可达0.4左右。分离后精子的受胎率为52.2％(47/90),母犊率为44.2％(19/43),对照组母犊率为36.8％(21/57)。说明分离后精子可正常受胎,并有提高母犊率的趋势。

关键词：牛精子分离 percoll

味蕾细胞的percoll梯度离心纯化技术研究

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食品与生物技术学报 2010年第1期29卷 118-122页

作者：王腾浩秦玉梅张根华邓少平浙江工商大学食品与生物工程学院浙江杭州310035 常熟理工学院生物与食品工程学院江苏常熟215500

以ICR小鼠的菌状味蕾细胞为研究对象,利用percoll梯度离心技术纯化小鼠菌状味蕾细胞,通过台盼蓝染色和免疫组织化染色方法分别比较纯化前后的味蕾细胞存活率与纯度的变化,应用透射电镜从超微结构鉴定味蕾细胞。结果显示:通过不连续的Per... 详细信息

以ICR小鼠的菌状味蕾细胞为研究对象,利用percoll梯度离心技术纯化小鼠菌状味蕾细胞,通过台盼蓝染色和免疫组织化染色方法分别比较纯化前后的味蕾细胞存活率与纯度的变化,应用透射电镜从超微结构鉴定味蕾细胞。结果显示:通过不连续的percoll密度梯度离心法对味蕾细胞进行纯化,细胞分层效果明显,主要位于体积分数20%与40%的percoll工作液之间;免疫组化结果表明:纯化后味蕾细胞的纯度显著提高,从10%提高到65%(P<0.01),台盼蓝染色结果显示:纯化后细胞活度达94%,电镜则从超微结构上证实了纯化的细胞为味蕾细胞。

关键词：味蕾细胞纯化技术 percoll 超微结构

percoll非连续梯度法分离未成年绵羊精原细胞的研究

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Percoll非连续梯度法分离未成年绵羊精原细胞的研究

作者：武小虎甘肃农业大学

学位级别：硕士

精原细胞的体外培养、诱导分化、体外受精以及同种移植技术给精原细胞水平的遗传资源传播和稀有动物资源的保护以及治疗人类精子发生障碍导致的不育提供了新思路，但是不同物种精原细胞的分离纯化和坚定技术还不能满足当前乃至以后科学... 详细信息

精原细胞的体外培养、诱导分化、体外受精以及同种移植技术给精原细胞水平的遗传资源传播和稀有动物资源的保护以及治疗人类精子发生障碍导致的不育提供了新思路，但是不同物种精原细胞的分离纯化和坚定技术还不能满足当前乃至以后科学研究的需要。精原细胞体外培养技术的不完善，诱导分化条件不成熟，移植后检测相对困难是限制这些新方法发展的主要因素。我们以新鲜绵羊睾丸为实验材料，研究了不同酶解方法和不同密度梯度离心分离绵羊精原细胞的效果。使用流式细胞仪对分离得到的细胞进行倍性分析和抗体染色分析，以评价分离效果。研究显示：（1）0.3%胰蛋白酶解离绵羊睾丸组织所得细胞的活性和完整性均较好，有望用于进一步的研究。（2）850g、30min的离心条件下，得到了自下而上明显的三层细胞。借助流式细胞术分析细胞倍性和特异抗体染色特性，结合细胞计数分析，所得三层细胞中，第一层中二倍体细胞含量最高，达到了94.66%，其中PGP9.5阳性细胞达到了76.76%，较之前人研究成果有所提高。结果表明：本研究所探索的单酶消化法结合percoll非连续密度梯度离心法对绵羊精原细胞有较好的分离效果，为后续研究奠定了一定的基础。

关键词： percoll 精原细胞单酶消化 PGP9.5 流式细胞术

percoll梯度离心与精子运动轨迹图像分析

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男科学报 1998年第3期4卷 178-180页

作者：商学军黄宇烽徐建平王咏梅南京军区南京总医院解放军医学检验中心南京市210002

目的：研究percoll梯度离心后精子运动轨迹的变化。方法：percoll梯度离心法处理精子运动状况较差的精液标本，分析精子运动轨迹的变化。结果：在24例精液标本中，percoll处理前后的精子平均运动速度分别为18.4±4.6μm／s和25.7±5.4μ... 详细信息

目的：研究percoll梯度离心后精子运动轨迹的变化。方法：percoll梯度离心法处理精子运动状况较差的精液标本，分析精子运动轨迹的变化。结果：在24例精液标本中，percoll处理前后的精子平均运动速度分别为18.4±4.6μm／s和25.7±5.4μm／s.二者之间具有显著差异（P＜0.01）。结论：用percoll梯度离心法处理精子，可提高精子运动速度，改善精子质量。

关键词： percoll 梯度离心精子运动轨迹图像分析

percoll差密度离心法分离嗜酸性粒细胞研究

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山东医药 2006年第4期46卷 62-63页

作者：邝军张立波杨力郭光云陈功潘国栋郧阳医学院附属人民医院

嗜酸性粒细胞(EOS)作为终末功能细胞在人体内白细胞中含量较少,分离困难,运用较少.近年来,我们应用percoll差密度离心法可快速有效分离EOS.现报告如下.

关键词：嗜酸性粒细胞 percoll 离心法分离密度功能细胞白细胞人体内 EOS