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生物钟基因per1在子宫内膜癌中的表达分析

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生物钟基因PER1在子宫内膜癌中的表达分析

作者：王福媛山西医科大学

学位级别：硕士

目的:分析生物钟基因周期蛋白1(period 1,per1)在子宫内膜癌中的表达情况以及夜班/倒班工作引起的昼夜节律紊乱与子宫内膜癌耐药性的关系。方法:收集了 2021年1月到2021年12月共10月中间就诊于山西医科大学第一医院的符合纳入标准的子... 详细信息

目的:分析生物钟基因周期蛋白1(period 1,per1)在子宫内膜癌中的表达情况以及夜班/倒班工作引起的昼夜节律紊乱与子宫内膜癌耐药性的关系。方法:收集了 2021年1月到2021年12月共10月中间就诊于山西医科大学第一医院的符合纳入标准的子宫内膜癌临床标本40例,其中昼夜节律异常组(有夜班/倒班工作史)病例20例,昼夜节律正常组(无夜班/倒班工作史)病例20例,采用实时荧光定量 PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)检测子宫内膜癌组织中节律基因per1的表达水平;采用免疫组织化学方法检测P170耐药蛋白在子宫内膜癌组织中的表达情况;采用SPSS 26.0及GraphPad Prism 9.0软件对RT-qPCR、Western blot、免疫组化检测结果进行数据处理和图表制作,进一步分析生物钟基因per1、P170耐药蛋白在昼夜节律正常组以及昼夜节律异常组的子宫内膜癌组织中的表达情况,以及夜班/倒班工作引起的昼夜节律紊乱与子宫内膜癌耐药性的关系。结果:1.用RT-qPCR检测子宫内膜癌组织中per1的表达,与昼夜节律正常组相比,昼夜节律异常组中per1表达明显降低,差异具有统计学意义(Pper1的表达,与昼夜节律正常组相比,昼夜节律异常组中per1表达明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:课题组前期通过人群流行病学研究和机制研究发现,生物钟节律紊乱会影响子宫内膜癌患者的化疗效果和预后的生存周期和质量,本研究在前期起研究基础上进一步发现:与昼夜节律正常组相比,per1在昼夜节律异常组的子宫内膜癌患者中呈现低表达,提示夜班/倒班可能会降低节律基因per1的表达;P170耐药蛋白在昼夜节律异常组中呈高表达,提示夜班/倒班引起的昼夜节律紊乱中P170耐药蛋白高表达可能是子宫内膜癌耐药机制之一。

关键词：子宫内膜癌生物钟节律 per1 P170蛋白

生物钟基因per1调节脂质代谢对西黄丸抗肝癌效应的影响

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生物钟基因PER1调节脂质代谢对西黄丸抗肝癌效应的影响

作者：宁迪敏湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:探究肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中生物钟基因per1与脂质代谢的关系、综合评价西黄丸抗肝癌效应及生物钟基因per1对西黄丸抗肝癌效应的影响。方法:1.生物钟基因per1与HCC脂质代谢相关研究:通过RT-PCR及Western Blot... 详细信息

目的:探究肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）中生物钟基因per1与脂质代谢的关系、综合评价西黄丸抗肝癌效应及生物钟基因per1对西黄丸抗肝癌效应的影响。方法:1.生物钟基因per1与HCC脂质代谢相关研究:通过RT-PCR及Western Blot实验检测课题组五种HCC细胞株（JHH-7、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF）中生物钟基因 per1表达量。使用搭载 per1 沉默慢病毒（shper1#1#2#3）及搭载空载质粒慢病毒（per1-NC）转染per1表达量最高HCC细胞株,体外构建生物钟基因per1沉默稳转株。验证转染效率后,提取实验组细胞mRNA,检测AMPK、SREBP-1、ACC1、SCD1的表达情况。油红O染色检测细胞内脂滴含量。CCK-8检测per 1沉默后HCC细胞的增殖情况。为进一步探讨per 1调控HCC脂质代谢的分子机制,设置空载质粒组（NC组）、per1沉默组（shper1组）、shper 1+AMPK抑制剂组（Compound C 组）,使用 Western Blot 检测 AMPK、p-AMPK、SREBP-1及其下游脂代谢关键酶类的蛋白表达水平。2.西黄丸抗肝癌效应研究:采用 50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、4 0 0μg/mL西黄丸萃取液作用于HCC细胞,CCK-8实验检测24h、48h、72h后450nm处OD值,并绘制细胞增殖曲线;集落实验检测西黄丸对 HCC细胞的集落生成率的影响;划痕实验检测西黄丸对HCC细胞的迁移率的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测西黄丸对 HCC 细胞侵袭转移能力的影响;流式细胞仪和Annexin-V/PI法检测西黄丸对HCC细胞凋亡率的影响。3.生物钟per1影响西黄丸抗肝癌效应研究:设置对照组、空载质粒组（NC组）、per1沉默组（shper1组）,400 μ g/mL西黄丸萃取液作用于NC组及shper1组。CCK-8、集落实验检测三组实验细胞增殖能力;划痕、Transwell实验检测三组实验细胞迁移及侵袭转移能力。4.西黄丸调节生物钟基因 per1 研究:选取生物钟基因 per1表达量最高及最低的两株HCC细胞,分别使用5 0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL 西黄丸萃取液进行干预。提取实验组细胞mRNA及蛋白后,RT-PCR及Western Blot检测生物钟基因per1的表达量。结果:1.RT-PCR及Western Blot实验结果表明,HCC细胞株JHH-7的per1表达量最高,HLF的per1表达量最低（P＜0.0001）;选取JHH-7体外构建per 1沉默稳转株并验证其转染效率。与NC组相比,shper1#3 能显著降低 per1 的 mRNA 及蛋白水平（P＜0.0001）。利用构建成功的per1沉默稳转株进行后续实验,结果显示,沉默per1后,AMPK的mRNA表达水平下调,SREBP-1、ACC1、SCD1的mRNA表达水平上调;油红O染色结果显示,per1沉默后HCC细胞中脂滴含量增多（P＜0.001）;CCK-8实验结果显示,per1沉默后,HCC细胞的增殖能力提高（P＜0.05）;进一步检测蛋白层面的表达情况,结果显示,沉默per 1后,AMPK蛋白水平无明显变化,p-AMPK蛋白下调,SREBP-1及其下游脂代谢关键蛋白ACC1、SCD1的表达上调。加入Compound C抑制AMPK磷酸化后,p-AMPK、SREBP-1、ACC1、SCD1的蛋白表达被逆转。2.CCK-8 实验结果表明,100μg/mL、20 0μg/mL、400μg/mL 西黄丸萃取液均能直接抑制 HCC细胞的增殖,且抑制效率随着西黄丸萃取液浓度的升高而逐步增强,呈时间和浓度依赖性（P＜0.01）;集落实验表明,100μg/mL西黄丸萃取液即能抑制HCC细胞集落生成率（P＜0.05）;划痕实验表明,1 00μg/mL西黄丸萃取液即能显著抑制 HCC 细胞迁移能力（P＜0.01）;Transwell 实验结果表明,50μg/mL西黄丸萃取液即能抑制肝癌细胞迁移及侵袭转移能力（P＜0.01）;Annexin V-FITC/PI凋亡检测结果表明,与对照组相比,100μg/mL西黄丸萃取液即能诱导HCC细胞早期及晚期凋亡（P＜0.05）。3.沉默生物钟基因per 1后,西黄丸抑制HCC细胞增殖、集落生成、迁移及侵袭转移的能力均下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）。4.RT-PCR实验结果表明,在生物钟基因per1高表达的JHH-7细胞及低表达的HLF细胞中,200 μg/mL及4 0 0μg/mL西黄丸萃取液均能够上调per 1 mRNA的表达。Western Blot实验结果表明,在 HLF 细胞中,per1 蛋白的表达水平与 mRNA 趋势

关键词： per1 脂质代谢西黄丸肝癌

核酶阻断per1表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos转录及表达的影响

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航天医学与医学工程 2005年第2期18卷 151-153页

作者：刘英辉彭涛陈立国肖静王正荣刘延友四川大学基础与法医学院生物化学与分子生物学教研室四川成都610041 四川大学基础与法医学院生物医学工程研究室四川成都610041 天津市儿童医院检验科天津300074

目的研究用特异性核酶阻断生物节律基因per1的表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos基因转录及表达的影响。方法制备吗啡成瘾小鼠模型,向小鼠脑室内注射脂质体包裹的重组质粒pcDNA3.1—per1RZDNA,在脑内产生特异性核酶-per1RZ,阻断小鼠脑内生物... 详细信息

目的研究用特异性核酶阻断生物节律基因per1的表达对吗啡成瘾小鼠海马c-fos基因转录及表达的影响。方法制备吗啡成瘾小鼠模型,向小鼠脑室内注射脂质体包裹的重组质粒pcDNA3.1—per1RZDNA,在脑内产生特异性核酶-per1RZ,阻断小鼠脑内生物节律基因per1的表达。作脑组织冰冻切片,用原位杂交和免疫组化法测定小鼠海马c-fos基因转录及表达的变化。结果per1RZ能使吗啡成瘾小鼠海马的c-fos基因转录及表达明显减弱。结论重组质粒表达的per1RZ可以干扰生物节律基因per1的表达,抑制海马c-fos基因的转录和表达,从而控制吗啡成瘾的发生。

关键词：基因控制基因表达核酶节律基因 c—fos per1 吗啡成瘾

丙烯醛对肺上皮细胞增殖活力及生物钟基因per1蛋白表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2021年第2期52卷 216-221页

作者：李聪敏刘扬许莉敏吴卫东姜碧杰新乡医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生教研室新乡453003 新乡医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室新乡453003

目的研究丙烯醛对肺上皮细胞增殖活力的影响及其可能机制。方法选用A549和MLE15两种肺上皮细胞株作为模型,分别用PBS(对照组)和80μmol/L丙烯醛处理30 min。采用CCK-8试剂盒检测丙烯醛处理结束恢复培养12 h、24 h、36 h和48 h时细胞的... 详细信息

目的研究丙烯醛对肺上皮细胞增殖活力的影响及其可能机制。方法选用A549和MLE15两种肺上皮细胞株作为模型,分别用PBS(对照组)和80μmol/L丙烯醛处理30 min。采用CCK-8试剂盒检测丙烯醛处理结束恢复培养12 h、24 h、36 h和48 h时细胞的增殖活力,Western blot检测丙烯醛处理结束恢复培养24 h时生物钟基因per1的蛋白表达水平。检测在恢复培养阶段加入10 mg/L转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)处理对丙烯醛处理后的肺上皮细胞增殖活力及per1蛋白表达的影响。结果80μmol/L丙烯醛刺激30 min可导致A549细胞及MLE15细胞增殖活力明显降低以及细胞per1蛋白表达下降(P10 mg/L TGF-β未明显改变丙烯醛诱导的细胞增殖活力的降低,但是肺上皮细胞中per1蛋白的表达水平高于未添加TGF-β的丙烯醛处理组(Pper1表达量降低,TGF-β虽然不能逆转丙烯醛导致的细胞增殖活力的下降,但可以使per1的表达得到一定程度的恢复。

关键词：丙烯醛肺上皮细胞 per1 转化生长因子-β

慢性自发性荨麻疹的流行病学特征及其与生物钟基因的关联研究

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慢性自发性荨麻疹的流行病学特征及其与生物钟基因的关联研究

作者：雷小雨遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在了解慢性自发性荨麻疹（chronic spontaneous urticaria,CSU）的流行病学特征以及CSU与生物钟基因的关系。方法:1.CSU流行病学调查研究:选取240例CSU患者填写流行病学调查问卷,内容包括性别、年龄、发病年龄、病程、好... 详细信息

目的:本研究旨在了解慢性自发性荨麻疹（chronic spontaneous urticaria,CSU）的流行病学特征以及CSU与生物钟基因的关系。方法:1.CSU流行病学调查研究:选取240例CSU患者填写流行病学调查问卷,内容包括性别、年龄、发病年龄、病程、好发时间、就诊近一周的睡眠节律、饮食节律、晚上睡觉开灯情况、临床类型、瘙痒程度以及每周荨麻疹活动度评分（urticaria activity score,UAS7）等。数据汇总分析采用Excel及SPSS 26.0。2.CSU生物钟基因的表达检测:分别收集30例CSU患者及30例健康志愿者6:00-8:00、20:00-22:00两时段的新鲜外周静脉血,提取外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,用实时定量逆转录聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reactions,RT-PCR）检测PBMCs中4个生物钟基因（Bmal1、Clock、per1、Cry1）的表达。结果:1.流行病学特征:总有效问卷240份,男女性别比例为1:2.1;未婚85例（35.4%）,已婚155例（64.6%）;年龄中位数36.0（25.0±52.8）岁。初次发病年龄中位数31.5（21.0±48.0）岁。病程中位数为24.0月（10.0±60.00）月。48例饮酒患者中,12例饮酒后可诱发或加重荨麻疹症状;29例吸烟患者吸烟后均不诱发或加重荨麻疹。2.流行病学特征与UAS7评分差异性分析:CSU患者性别、学历、年龄、发病年龄、平时睡眠质量、皮疹平均持续时间、自觉症状、既往治疗效果与UAS7瘙痒及风团评分差异均有统计学意义（P＜0.05）。3.生物节律与UAS7瘙痒及风团评分的差异性分析:92例患者（38.3%）近期睡眠节律紊乱,148例（61.7%）睡眠时间规律;23例患者（9.6%）夜间开灯睡觉,217例（90.4%）夜间睡觉关灯;34例患者（14.2%）饮食长期不规律,206例患者（85.8%）三餐规律。通过比较发现,睡眠节律、夜间睡觉光暴露与UAS7瘙痒及风团评分差异有统计学意义（P＜0.05）;饮食规律性与UAS7风团评分差异有统计学意义（P＜0.05）,而与UAS7瘙痒评分差异无统计学意义。4.CSU患者UAS7评分影响因素的多因素分析:睡眠质量、自觉症状、睡眠规律性与夜间睡觉开灯情况对UAS7评分的影响具有统计学意义。相较与于睡眠充裕的患者,有失眠症的患者UAS7评分显著高出4.118分（P=0.024）。相较于自觉皮肤轻度瘙痒的患者,自觉皮肤中度瘙痒的患者UAS7评分显著高出2.582分（P=0.007）,自觉皮肤重度瘙痒的患者UAS7评分显著高出3.931分（P=0.006）。睡眠不规律的患者UAS7评分较睡眠规律者高5.196分（P＜0.001）。夜间睡觉开灯的患者较不开灯者UAS7评分高3.521分（P=0.011）。5.生物钟基因在CSU中的表达情况及相关性分析:CSU组per1、Clock m RNA的表达水平在早、晚差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组Clock m RNA的表达水平在早、晚差异有统计学意义（P＜0.01）。CSU组与对照组相比,Δper1、ΔClock m RNA差异有统计学意义（P＜0.05）,ΔBmal1、ΔCry1差异无统计意义（P＞0.05）。Δper1、ΔClock m RNA表达水平与UAS7总分无明显相关性（P＞0.05）。结论:1.睡眠质量差、自觉症状严重、睡眠不规律以及夜间睡觉开灯的CSU患者UAS7评分更高。2.生物钟基因per1、Clock可能参与CSU的发病。

关键词：临床流行病学生物钟基因慢性自发性荨麻疹 per1 Clock

生物钟基因per1对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响及机理

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华西口腔医学杂志 2016年第3期34卷 255-261页

作者：付小娟杨凯李晗雪赵钦陈丹重庆医科大学附属第一医院口腔颌面外科重庆400016

目的探讨生物钟基因per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞状细胞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法构建3组针对per1 RNA的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用蛋白质印迹法(Western bl... 详细信息

目的探讨生物钟基因per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞状细胞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法构建3组针对per1 RNA的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测筛选RNA干扰作用最强组为实验组,对照组(Control-sh RNA)为对任何基因均无干扰效应的sh RNA序列的质粒,空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用q RT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因per1、p53、Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A2、Cyclin B1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表达;用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布;将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果成功构建了3组per1-sh RNA慢病毒质粒,通过q RT-PCR和Western blot证明per1-sh RNA-Ⅰ组沉默效果最佳,作为实验组。per1-sh RNA-Ⅰ组中Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin B1、CDK1和Wee1 mRNA的表达水平高于Control-sh RNA组和SCC15组(P16、p21和cdc25 mRNA的表达水平降低(P15组中各基因mRNA的表达水平无差异(P>0.05)。CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表达水平在3组中均无统计学差异(P>0.05)。per1-sh RNA-Ⅰ组中细胞增殖指数高于Control-sh RNA组和SCC15组(P15组细胞的增殖指数和凋亡指数无统计学差异(P>0.05)。per1-sh RNA-Ⅰ组细胞体内成瘤能力显著增强(Pperl是重要的抑癌基因,perl能调控下游众多的细胞周期基因,其表达变化影响细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力,对per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。

关键词：生物钟 per1 细胞周期基因口腔癌

生物钟基因per1对人口腔鳞癌细胞生物学行为的影响和调控机制

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中国医学科学院学报 2016年第2期38卷 155-163页

作者：李晗雪杨凯付小娟赵钦重庆医科大学附属第一医院口腔颌面外科重庆400016

目的探讨生物钟基因per1对人口腔鳞癌细胞SCC15增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及调控机制。方法采用RNA干扰技术沉默SCC15细胞内per1基因,应用流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变,实... 详细信息

目的探讨生物钟基因per1对人口腔鳞癌细胞SCC15增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及调控机制。方法采用RNA干扰技术沉默SCC15细胞内per1基因,应用流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变,实时荧光定量PCR检测Ki-67、鼠双微基因2(MDM2)、c-Myc、p53、Bax、Bcl-2、金属蛋白酶(MMP)2、MMP9和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达情况。结果沉默SCC15癌细胞内per1基因后促进了细胞的增殖,抑制了细胞凋亡,增强了细胞的迁移和侵袭能力(P均per1基因的低表达显著提高了Ki-67、MDM2、Bcl-2、MMP2和MMP9 mRNA的表达(P均0.05)。结论生物钟基因perl能调控下游重要的肿瘤相关基因Ki-67、MDM2、c-Myc、p53、Bax、Bcl-2、MMP2和MMP9,其表达变化影响癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,对per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制,为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。

关键词：生物钟基因 per1 口腔癌鳞状细胞

per1基因对口腔鳞癌细胞增殖侵袭和迁移的影响

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河北医学 2022年第2期28卷 220-224页

作者：许刚宋其义於丽乔盘锦辽油宝石花医院口腔科辽宁盘锦124010 大连医科大学口腔医学院附属口腔医院口腔科辽宁大连116023

目的:探讨per1基因通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:培养人口腔鳞癌细胞SCC-15,将si-per1和si-NC转染至SCC-15细胞,作为si-per1组和si-NC组。RT-qPCR检测细胞per1基因表达水平,MTT检测... 详细信息

目的:探讨per1基因通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法:培养人口腔鳞癌细胞SCC-15,将si-per1和si-NC转染至SCC-15细胞,作为si-per1组和si-NC组。RT-qPCR检测细胞per1基因表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测Ki-67、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白表达。结果:与HOK组比较,Cal-27、SCC-4、SCC-15中per1基因表达水平显著降低(Pper1基因表达水平显著降低(Pper1组OD值显著升高(P1蛋白表达显著升高(Pper1组侵袭、迁移细胞数显著升高(Pper1组β-catenin蛋白表达显著降低(Pper1基因高表达,并通过Wnt/β-catenin信号通路可抑制口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移。

关键词： per1 Wnt/β-catenin信号通路口腔鳞癌增殖侵袭迁移

乌龙丹对慢性脑缺血大鼠松果体钟基因表达的影响

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南方医科大学学报 2012年第4期32卷 560-564页

作者：富祯祯夏旸彭康南方医科大学中医药学院南方医科大学南方医院呼吸科广东广州510515

目的初步探讨慢性脑缺血对大鼠睡眠钟基因表达的影响及乌龙丹对其的调控作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、乌龙丹给药组。采用改良式双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后,灌胃给药3周,并持续... 详细信息

目的初步探讨慢性脑缺血对大鼠睡眠钟基因表达的影响及乌龙丹对其的调控作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、乌龙丹给药组。采用改良式双侧颈总动脉永久性结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,造模3周后,灌胃给药3周,并持续监测各组大鼠体重,应用实时荧光定量PCR检测大鼠松果体钟基因Clock、Bmal1、per1表达的变化。结果模型组较假手术组Clock mRNA、per1mRNA表达显著降低(P1,P1基因表达无显著差异(P>0.05);乌龙丹给药组的Clock基因水平高于模型组(P1),Bmal1基因表达较假手术组降低(Pper1无显著变化(P>0.05)。结论慢性脑缺血可能成为睡眠障碍的潜在病因,乌龙丹对慢性脑缺血引起的睡眠障碍有一定的治疗作用。

关键词：慢性脑缺血钟基因 Clock Bmal1 per1 乌龙丹睡眠障碍