检索结果-南通市图书馆

分析化学 2014年第11期42卷 1604-1610页

作者：牟慧高美须李淑荣王志东潘家荣赵杰支玉香李树锦赵鑫农业部农产品加工重点实验室/中国农业科学院农产品加工研究所北京农业职业学院中国计量学院生命科学院北京协和医院变态反应科

建立了一种利用表位抗体筛选虾过敏原pen a1抗原表位中关键氨基酸的方法。利用生物信息学软件MEGA5计算pen a1中表位的氨基酸组成和出现频率,并采用DNAMAN软件对SDAP数据库中致敏食物原肌球蛋白的氨基酸保守性分析,综合两种方法筛选出... 详细信息

建立了一种利用表位抗体筛选虾过敏原pen a1抗原表位中关键氨基酸的方法。利用生物信息学软件MEGA5计算pen a1中表位的氨基酸组成和出现频率,并采用DNAMAN软件对SDAP数据库中致敏食物原肌球蛋白的氨基酸保守性分析,综合两种方法筛选出各表位可能的关键氨基酸,Epitope 1:K,E,N;Epitope2:K,L,E;Epitope 3:E,R,D,L,Q;Epitope 5:K,L,Q。用丙氨酸取代并合成突变多肽。利用表位抗体,通过竞争性免疫斑点法及间接ELISA方法检测突变多肽的抗体结合能力,筛选出各表位的关键氨基酸。分别为:Epitope1:谷氨酰胺;Epitope2:亮氨酸和谷氨酸;Epitope3:亮氨酸和天冬氨酸;Epitope5:亮氨酸。实验结果证明了此种筛选关键氨基酸的方法的可行性,为pen a1致敏机理的研究及利用基因修饰脱敏提供了一定的理论依据。

关键词： pen a1 抗原表位突变多肽关键氨基酸

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

pen a1抗原表位187—202关键氨基酸的筛选和鉴定

引用

中国农业科学 2014年第9期47卷 1793-1801页

作者：牟慧高美须潘家荣支玉香赵杰刘超超李树锦赵鑫农业部农产品加工重点实验室/中国农业科学院农产品加工研究所中国计量学院生命科学院北京协和医院变态反应科

【目的】pen a1是虾中主要的过敏原蛋白,其抗原表位与致敏作用有关。对pen a1的一个抗原表位187—202中氨基酸的出现频率及保守性进行分析后合成突变肽,并检测该突变肽与表位抗体的结合能力,筛选关键氨基酸,为研究虾致敏机理及脱敏方法... 详细信息

【目的】pen a1是虾中主要的过敏原蛋白,其抗原表位与致敏作用有关。对pen a1的一个抗原表位187—202中氨基酸的出现频率及保守性进行分析后合成突变肽,并检测该突变肽与表位抗体的结合能力,筛选关键氨基酸,为研究虾致敏机理及脱敏方法提供理论依据。【方法】利用MEGA5软件对pen a1蛋白5个表位及其氨基酸的组成与出现频率进行分析,选出这些表位中出现频率大的氨基酸;对过敏原数据库中所有致敏食物原肌球蛋白的氨基酸序列的保守性进行分析,筛选出保守性高的氨基酸。两种方法筛选出的共有氨基酸为潜在的关键氨基酸。用丙氨酸分别替代这些潜在的氨基酸形成突变肽。利用固相合成法分别合成原表位肽及突变肽。并将原表位肽作为免疫原免疫新西兰大白兔,获得表位多克隆抗体。利用间接ELISA方法及竞争性Dot-blot方法检测突变的表位肽与表位抗体IgE结合能力,筛选出结合能力明显下降的突变肽,其中替换的氨基酸即为该表位的关键氨基酸。【结果】谷氨酸(E)、亮氨酸(L)、精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、缬氨酸(V)、丝氨酸(S)、天冬氨酸(D)在表位中出现频率较大,并高于在pen a1整体蛋白中出现的概率,为活性氨基酸。将序列在187—202的表位中氨基酸组成及出现频率进行统计,推测E、V、L可能为该表位的关键氨基酸。将SDAP数据库中致敏食物原肌球蛋白序列与pen a1氨基酸序列用DNAMAN软件进行多序列比对,K、L、E、V、G在所有比对的序列中都存在,表明这5个氨基酸为保守氨基酸。选择共有的E、V、L为可能的关键氨基酸,用丙氨酸替代表位中E、V、L分别合成1、2和3号突变肽。用竞争性Dot-blot检测突变肽结合抗体能力,以提取纯化的虾致敏蛋白为包被原,用突变肽抑制虾蛋白结合抗体,发现原表位肽抑制作用明显,1号突变肽的抑制作用与原表位肽相似,2、3号肽的抑制作用明显低于原表位肽。谷氨酸突变的1号突变肽对表位活性并没有较大影响,说明谷氨酸不是该表位的关键氨基酸;而2、3号突变肽与抗体的结合能力明显降低,即亮氨酸和缬氨酸是该表位的关键氨基酸。同时,利用间接ELISA方法,将原表位肽和突变肽与兔血清反应,比较OD450值。结果显示,1号突变肽致敏性降低,OD450值约为对照的1/2.1,2号突变肽OD450值降低为对照的1/2.6,3号突变肽OD450值降低为对照的1/3.2。说明突变表位与表位抗体结合能力均有不同程度的降低。结合竞争Dot-blot试验结果,亮氨酸和缬氨酸为该抗原表位的关键氨基酸。【结论】建立了一种关键氨基酸的筛选和鉴定的方法。亮氨酸和缬氨酸被丙氨酸取代后,其与表位对应抗体的结合能力发生明显下降,是pen a1中表位187—202的关键氨基酸。这种筛选关键氨基酸的方法可以用于其它抗原表位的关键氨基酸的确定及氨基酸对表位致敏性的影响,深入研究过敏原脱敏机理;同时也可用于基因工程或氨基酸修饰中降低过敏原致敏性。

关键词： pen a1 抗原表位关键氨基酸竞争性Dot-blot 间接ELISA

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

模拟消化对pen a1及其抗原表位免疫原性的影响

模拟消化对Pen a1及其抗原表位免疫原性的影响

引用

作者：赵鑫中国农业科学院

学位级别：硕士

随着食品加工业的发展,食品过敏问题也越来越严重,虾是八大过敏原海鲜中的一大类,每年都有很多人因食用虾及其制品而导致严重过敏反应。研究发现加热、辐照、高压、酶解等都可降低虾过敏原的致敏性。近年来的研究已明确虾主要过敏原的... 详细信息

随着食品加工业的发展,食品过敏问题也越来越严重,虾是八大过敏原海鲜中的一大类,每年都有很多人因食用虾及其制品而导致严重过敏反应。研究发现加热、辐照、高压、酶解等都可降低虾过敏原的致敏性。近年来的研究已明确虾主要过敏原的结构、表位、关键氨基酸等信息,我们已知食物过敏一般是发生在人体食入过敏原之后,而人体消化系统对过敏原的结构、表位等都会产生影响,从而引起过敏原及其抗原表位的致敏性的变化,探讨人体消化系统对过敏原及其抗原表位的影响对分析过敏机制和制备脱敏食物都具有重要的意义。本文通过提取纯化虾过敏原pen a1,合成pen a1抗原表位的5个多肽片段No.1-No.5(分别为表位No.1:pen a143-57;表位No.2:pen a185-105;表位No.3:pen a1133-148;表位No.4:pen a1187-202;表位No.5:pen a1247-284),制备免疫原并免疫兔子获得全抗体和特异性表位抗体。体外模拟人体胃液、肠液和胃肠液消化pen a1及表位多肽,用全抗体和表位特异性抗体检测其免疫原性的变化,并结合表位多肽自身的消化稳定性,分析pen a1经消化后免疫原性的变化规律。主要研究内容及结果如下:(1)通过KCl抽提、硫酸铵分级沉淀、等电点沉淀等方法提取纯化虾过敏pen a1,采用Fomc化学法合成pen a1的5个表位多肽,用pen a1和表位多肽制备免疫原免疫纯种新西兰大白兔,获得全抗体和表位特异性抗体,抗体效价高、灵敏度强。(2)对pen a1及其表位多肽进行240 min的模拟胃液消化试验,结果表明,pen a1经消化后免疫原性降低,各抗原表位消化稳定性排序为No.4>No.2>No.1>No.3>No.5,表位多肽自身的消化稳定性为No.1>No.2>No.3>No.4>No.5。结合免疫印迹结果可知No.4抗原表位消化稳定性最高;No.1、2、3次之,三个表位间无显著性差异;No.5消化稳定性最差。(3))对pen a1及其表位多肽进行240 min的模拟肠液消化试验,结果表明,pen a1的免疫原性在消化60 min内下降显著,在90 min后下降缓慢,生成的新片段仍具有免疫原性,但会逐步完全分解至SDS-PAGE无法检测出;Ci-ELISA检测可知经过肠液消化后pen a1各表位消化稳定性为No.2>No.1>No.3>No.4>No.5;5个表位多肽的消化稳定性为No.3>No.1>No.4>No.2>No.5,与各表位上的酶切位点的个数呈负相关。综合可以得出pen a1中No.2表位具有最高的消化稳定性,No.1、3、4次之,No.5表位消化稳定性最差。(4)对pen a1及其表位多肽进行120 min的模拟胃液消化和240 min的模拟肠液消化试验,结果表明,利用SDS-PAGE和免疫印迹(Western-blot)观察消化后pen a1逐渐被分解,生成的片段仍具有免疫原性,这些片段与全抗体结合的最多,No.3、4抗体次之,No.5较少,No.1、2基本无结合作用;竞争抑制酶联免疫吸附试验(Ci-ELISA)定量检测表明pen a1和表位多肽消化后与各抗体的结合能力,综合分析得出经GI消化后,pen a1的5个抗原表位的消化稳定性为No.2>No.4>No.3>No.1>No.5,5个表位多肽的消化稳定性为No.3>No.1>No.2>No.4>No.5,可知经过胃肠液消化后No.2表位具有最高的消化稳定性,No.5消化稳定性最差。分析以上三种消化条件,No.4在胃液中消化稳定性最高,而在肠液中稳定性差,因而经过胃肠液综合消化后,其稳定性较低;No.2表位的消化稳定性在胃液中较高,仅次于No.4,在肠液中稳定性最高,使得经过胃肠液消化后具有最高的稳定性,这可能是因为pen a1空间结构对其起着一定的保护作用。No.5表位由于其位于蛋白末端、抗原表位长、酶切位点多等原因,在三种条件下消化稳定性均最差。综上所述,No.4在胃液消化中稳定性最高,No.2在肠液消化和胃肠液综合消化中稳定性均最高,No.5在三种消化条件下稳定性均最差。本研究可用于未来治疗虾过敏患者和虾过敏机理的研究。

关键词：虾过敏 pen a1 消化抗原表位免疫原性

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：