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Understanding the physiological functions of the host xenobiotic-sensing nuclear receptors pxr and CAR on the gut microbiome using genetically modified mice

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2022年第2期12卷 801-820页

作者： Mallory Little Moumita Dutta Hao Li Adam Matson Xiaojian Shi Gabby Mascarinas Bruk Molla Kris Weigel Haiwei Gu Sridhar Mani Julia Yue Cui Department of Environmental and Occupational Health Sciences University of WashingtonSeattleWA 98105USA Department of Medicine Molecular Pharmacology and GeneticsAlbert Einstein College of MedicineBronxNY 10461USA University of Connecticut HartfordCT 06106USA Arizona Metabolomics Laboratory College of Health SolutionsArizona State UniversityPhoenixAZ 85004USA

Pharmacological activation of the xenobiotic-sensing nuclear receptors pregnane X receptor(pxr) and constitutive androstane receptor(CAR) is well-known to increase drug metabolism and reduce inflammation. Little is known regarding their physiological functions on the gut microbiome. In this study, we discovered bivalent hormetic functions of pxr/CAR modulating the richness of the gut microbiome using genetically engineered mice. The absence of pxr or CAR increased microbial richness, and absence of both receptors synergistically increased microbial richness. pxr and CAR deficiency increased the pro-inflammatory bacteria Helicobacteraceae and Helicobacter. Deficiency in both pxr and CAR increased the relative abundance of Lactobacillus, which has bile salt hydrolase activity, corresponding to decreased primary taurine-conjugated bile acids(BAs) in feces, which may lead to higher internal burden of taurine and unconjugated BAs, both of which are linked to inflammation, oxidative stress, and cytotoxicity. The basal effect of pxr/CAR on the gut microbiome was distinct from pharmacological and toxicological activation of these receptors. Common pxr/CAR-targeted bacteria were identified, the majority of which were suppressed by these receptors. h pxr-TG mice had a distinct microbial profile as compared to wild-type mice. This study is the first to unveil the basal functions of pxr and CAR on the gut microbiome.

关键词： pxr CAR Gut microbiome Bile acids Inflammation Mice Nuclear receptor Feces

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pxr:a center of transcriptional regulation in cancer

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Acta Pharmaceutica Sinica B 2020年第2期10卷 197-206页

作者： Yaqi Xing Jiong Yan Yongdong Niu Department of Pharmacology Shantou University Medical CollegeShantou 515041China Center for Pharmacogenetics University of PittsburghPA 15261USA

Pregnane X receptor(pxr,NR 112)is a prototypical member of the nuclear receptor *** can be activated by both endobiotics and *** a key xenobiotic receptor,the cellular function of pxr is mostly exerted by its binding to the regulatory gene sequences in a liganddependent *** downstream target genes of pxr participate in xenobiotic responses,such as detoxification,metabolism and *** evidence also implicates pxr signaling in the processes of apoptosis,cell cycle arrest,proliferation,angiogenesis and oxidative stress,which are closely related to ***,we discussed,in addition to the characterization of pxr per se,the biological function and regulatory mechanism of pxr signaling in cancer,and its potential for the targeted prevention and therapeutics.

关键词： pxr NR1I2 PAR Signaling Nuclear receptor Transcriptional regulation Cancer

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沙棘经pxr/NF-κB通路减缓免疫性肝损伤小鼠肝脏CYP2C下调

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2320-2324页

作者：郝佩佩曹盈莹邹慧琼丁瑞峰白雪峰薛永志内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014060 内蒙古科技大学包头医学院基础医学与法医学院内蒙古包头014060 内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院内蒙古包头014060 包头市肿瘤医院内蒙古包头014060

目的探讨沙棘(sea-buckthorn)是否通过pxr/NF-κB通路,减缓卡介苗(BCG)诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏细胞色素P4502C(CYP2C)下调。方法采用单次尾静脉注射BCG 125 mg·kg-1复制免疫性肝损伤小鼠模型用于乙型肝炎相关研究,将小鼠随机分为co... 详细信息

目的探讨沙棘(sea-buckthorn)是否通过pxr/NF-κB通路,减缓卡介苗(BCG)诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏细胞色素P4502C(CYP2C)下调。方法采用单次尾静脉注射BCG 125 mg·kg-1复制免疫性肝损伤小鼠模型用于乙型肝炎相关研究,将小鼠随机分为control组、BCG组、BCG+沙棘颗粒(sea-buckthorn granule,SG)(分别灌胃50、100、200 mg·kg-1,每日2次)组和BCG+PCN(腹腔注射100 mg·kg-1,每日1次)组。ELISA法检测血清转氨酶和肝组织中TNF-α、IL-1β的表达,Western blot检测肝脏NF-κB p65核蛋白和孕烷X受体(pregnane X receptor,pxr)、CYP2C总蛋白表达,HE染色观察小鼠肝脏的病理变化。结果沙棘抑制TNF-α、IL-1β、NF-κB p65的过表达,且缓解CYP2C、pxr蛋白表达下调,肝脏病理和血清转氨酶均有所改善,且呈剂量依赖性;用pxr的小鼠特异性激动剂PCN干预后与SG高剂量组相似。结论沙棘可以经pxr/NF-κB通路,减缓免疫性肝损伤小鼠CYP2C的下调。

关键词：卡介苗沙棘 NF-κB pxr CYP2C 乙型肝炎

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HepG2和Huh7细胞CYP3A4、CYP3A5和pxr基因非编码单核苷酸多态性分析

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郑州大学学报（医学版） 2023年第5期58卷 613-617页

作者：窦瑶杰郑庆蒙徐晨张莉蓉杨卫红郑州大学基础医学院法医学系郑州450001 郑州大学基础医学院药理学系郑州450001

目的:对HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5和pxr基因的重要非编码单核苷酸多态性(SNP)进行分析。方法:提取HepG2和Huh7细胞基因组DNA,PCR后进行测序分析。结果:在HepG2细胞中CYP3A4 rs2242480、rs3735451、rs2246709、rs4646440、rs12333983都为突变杂合子;而在Huh7细胞中上述前4个SNP为野生纯合子,最后1个为突变纯合子。在这两种细胞中,CYP3A4 rs35599367、rs4646437、rs35564277都为野生纯合子,rs2740574为突变纯合子。在HepG2和Huh7细胞中CYP3A5 rs776746分别为突变杂合子和突变纯合子。在两种细胞中,pxr rs3814055、rs2276706、rs6785049为突变杂合子,rs13059232为突变纯合子。上述14个SNP中,HepG2细胞突变杂合子较多,而Huh7细胞野生纯合子及突变纯合子较多。结论:HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5 SNP基因型不完全相同,而pxr SNP基因型相同。

关键词： CYP3A4 CYP3A5 pxr 单核苷酸多态性 HepG2细胞 Huh7细胞

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pxr拮抗剂SPA70逆转紫杉醇耐药的非小细胞肺癌机制研究

PXR拮抗剂SPA70逆转紫杉醇耐药的非小细胞肺癌机制研究

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作者：牛霞霞兰州大学

学位级别：硕士

目的:研究pxr拮抗剂SPA70逆转紫杉醇耐药非小细胞肺癌的机制。方法:体外实验方法:采用浓度梯度法建立紫杉醇耐药的A549细胞和H460细胞,标记为:A549/TR细胞和H460/TR细胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)测得紫杉醇的半数有效浓度(IC),计... 详细信息

目的:研究pxr拮抗剂SPA70逆转紫杉醇耐药非小细胞肺癌的机制。方法:体外实验方法:采用浓度梯度法建立紫杉醇耐药的A549细胞和H460细胞,标记为:A549/TR细胞和H460/TR细胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK8)测得紫杉醇的半数有效浓度(IC),计算耐药抗性。分别用溶剂、紫杉醇、SPA70、紫杉醇+SPA70处理A549细胞和A549/TR,H460和H460/TR两组细胞,进行集落形成实验,划痕实验,侵袭实验,细胞免疫荧光,Ed U检测,活性氧检测等实验。体内实验方法:在裸鼠皮下注射A549/TR细胞,建立荷瘤模型,肿瘤体积大于等于100 mm后,按体重随机分为对照组、紫杉醇组(5 mg/kg·bw)、SPA70组(30 mg/kg·bw)、联合干预组(5 mg/kg·bw紫杉醇+30 mg/kg·bw SPA70),按分组腹腔注射相应的药物,待肿瘤达1000 mm处死各组裸鼠,观察裸鼠内部脏器是否异常,取下肿瘤,进行苏木素-伊红染色(HE)和免疫组化染色(IHC)检测相关蛋白。指标检测:(1)集落形成实验检测紫杉醇和SPA70对细胞增殖的作用。(2)划痕实验检测紫杉醇和SPA70对细胞迁移的影响。(3)流式细胞术检测紫杉醇和SPA70对细胞周期和凋亡的作用。(4)实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测pxr、Tat-interactive protein 60 k Da(Tip60)、Tumor necrosis factor(TNF-α)、nuclear factor kappa-B(NF-κB)、P-glycoprotein(P-gp)等m RNA水平的变化。(5)免疫荧光检测α-tubulin,hoechst33342、Propidium Iodide(PI)、4′,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)等指标的定位以及蛋白含量变化。(6)Western blot和Co-IP检测pxr、P-gp、Tip60、P-gp等相关蛋白的联系和蛋白水平的变化。(7)采用苏木精-伊红(HE)染色组织切片观察小鼠肿瘤组织病理改变以及免疫组化染色(IHC)检测相应指标。结果:体外实验结果:(1)集落形成实验结果显示:紫杉醇(1 n M)和SPA70(5μM)联合使用时抑制A549、A549/TR、H460、H460/TR细胞增殖的能力均大于紫杉醇(1 n M)和SPA70(5μM)单独使用时抑制细胞增殖的能力(Ppxr、P-gp、蛋白激酶B(Akt)、Tip60、RIP1、MLKL等蛋白表达降低,Cleaved-Parp、P-Akt、RIP3、P-MLKL、α-tubulin等蛋白表达均升高。(5)Co-IP和GST-pull down实验结果显示:pxr与Tip60结合并导致Tip60降解,最终导致α-tubulin乙酰化水平降低。(6)细胞免疫荧光实验显示:用SPA70或联合方案处理后细胞出现了多极核,α-微管蛋白之间呈桥连结构。(7)罗丹明123蓄积实验证明在SPA70和紫杉醇联合组中罗丹明123的积累也明显减弱。(8)染色质免疫沉淀实验(Ch IP)结果显示紫杉醇和SPA70联用使pxr与MDR1的启动子区分离,导致MDR1的m RNA表达显著降低。(9)Ed U检测结果显示:与对照组、紫杉醇组、SPA70相比,联合给药组中荧光强度明显减弱,结合前面的实验结果证明Ed U在S期的掺入也明显减少。体内实验结果:HE染色显示:与对照组相比,紫杉醇和SPA70联合组的肿瘤细胞失去完整形状,细胞核萎缩,甚至部分细胞膜丢失。IHC结果显示联合处理组的Ki67、P-gp、pxr和Tip60表达减弱,Cleaved-caspase-3表达增多。结论:pxr拮抗剂SPA70可以抑制紫杉醇耐药的非小肺癌细胞增殖,迁移和侵袭,并且克服非小细胞肺癌对紫杉醇的耐药现象。其具体机制为:SPA70和紫杉醇联合使用不仅降低P-gp的表达,还可以诱导pxr介导的Tip60发生降解导致α-微管蛋白的乙酰化水平降低,细胞有丝分裂障碍,最终导致细胞死亡。

关键词： pxr 紫杉醇耐药 Tip60 SPA70 α-微管蛋白乙酰化

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Histone methylation and acethylation contribute to rifampin-mediated induction of CYP3A4 through the interactions between pxr and NCOA6/p300

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第10期30卷 1048-1049页

作者： YAN Liang ZHANG Li-rong Department of Pharmacology School of Basic Medical SciencesZhengzhou University

OBJECTIVE CYP3A4 is one of the majordrug-metabolizing enzymes in humans and is responsible for the metabolism of over 50%of the clinically used *** drugs have been proved to induce the expression of CYP3A4,which usually causes drug-drug interactions and adverse *** induction by numerous inducers shows significant interindividual differ ence but genetic factors can not totally explain or esti mate the ***,Epigenetic factors have been pointed out to contribute to that *** histone methylation and acethylation are important parts of epigenetics,this study aimed to explore the role o active histone marks(H3K4me3,H3 acethylation)and inactive histone mark(H3K27me3)in rifampin-induced expression of CYP3A4 in LS174T *** Chromatin immunoprecipitation(ChI P)assay was utilized to determine the levels of histone modifications in CYP3A4 *** interference and Co-immunopre cipitation(Co-IP)assays were performed to determine the role of pxr and interactions between pxr and his tone methyltransferase/*** We found that the induction of CYP3A4 m RNA by rifampin treat ment(10μmol·L-1)in LS174T cells was accompanied by increased levels of H3K4me3 and H3 acethylation and decreased level H3K27me3 in CYP3A4 promoter Besides,enhanced recruitment of NCOA6,a coactivato of multiple nuclear receptors and transcription factors that is associated with H3K4 methyltransferase,and p300,a histone acetylase,were observed in *** reveal the relationship between pxr activa tion and histone methylation/acethylation,gene silence was performed by sh RNA *** o pxr expression not only removed the induction o CYP3A4,but also eliminated the recruitment of NCOA6and p300 and the decreased levels of H3K4me3 and H3acethylation in CYP3A4 ***,co-immuno cipitation(Co-IP)assay showed that interactions between pxr and NCOA6/p300 were occurred upon rifampin *** Histone methylation

关键词： CYP3A4 induction histone modification pxr

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Panax Notoginseng Saponins Increases the Blood Concentration of Nifedipine by Inhibiting CYP3A4 Enzyme through pxr-and CAR-Mediated Pathway

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World Journal of Traditional Chinese Medicine 2021年第3期7卷 332-338页

作者： Qiu-Hong Li Jiao Zhao Ai-Xia Ju Yong Hu Qing-Song Qie Hong-Bin Xiao Guang Xu Xi-Jun Wang Clinical Pharmacy Laboratory Department of PharmaceuticsSchool of PharmacyHeilongjiang University of Chinese MedicineHarbinChina 9601 Medical Center Drive RockvilleMDUSA

Objective:To explore the mechanism underlying the effect of Panax notoginseng saponins(PNS)on the pharmacokinetics of nifedipine(NF)in *** and Methods:Twenty-four rats were randomly divided into blank(BL)group,PNS group,NF group,and PNS+NF group,with six rats in each *** analysis and t-test were carried out to determine the difference between the pharmacokinetic parameters of NF in different ***3 A4 enzyme activity was calculated using the probe drug *** mRNA and protein contents of CYP3 A4,nuclear receptor CAR,and pxr in rat liver were quantitatively analyzed by qRT-PCR and Western ***:After the rats were treated with the combination of PNS and NF,the plasma concentration,half-life,peak time,and area under the concentration-time curve of NF increased,whereas the clearance rate *** inhibitory effect on CYP3 A4 enzyme activity was in the following order:PNS+NF group(strongest)>PNS group>NF group,and BL group(weakest).Similar changes were observed for the inhibitory effect on CYP3 A4,CAR,and pxr mRNA and protein content,and the order was as follows:PNS+NF group(weakest)pxr and the activity of CYP3 A4 enzyme,slowing down the pharmacokinetics of NF in rats,increasing its blood concentration,and enhancing the therapeutic effect of NF.

关键词： CAR CYP3A4 nifedipine Panax notoginseng saponins pharmacokinetics pxr

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pxr在马兜铃酸诱导的急性肾损伤中的作用和机制研究

PXR在马兜铃酸诱导的急性肾损伤中的作用和机制研究

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作者：刘倩芳中南大学

学位级别：硕士

研究背景:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是一种以肾功能迅速下降、广泛肾小管损伤为特征的临床综合征,最终可导致多器官损伤,死亡率高。AKI的病因包括:肾毒素、脓毒症和肾缺血再灌注等。近端管状上皮细胞(Proximal tubule epithe... 详细信息

研究背景:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是一种以肾功能迅速下降、广泛肾小管损伤为特征的临床综合征,最终可导致多器官损伤,死亡率高。AKI的病因包括:肾毒素、脓毒症和肾缺血再灌注等。近端管状上皮细胞(Proximal tubule epithelial cells,PTECs)是AKI的主要靶点,代谢途径、细胞信号转导和细胞周期发生显著变化。孕烷X受体(Pregnancy X receptor,pxr)是药物代谢的关键调节因子,参与调节细胞凋亡、细胞增殖、细胞迁移、炎症反应和糖脂代谢等,与多种疾病发展相关。研究发现pxr在肾脏疾病中具有重要作用,但在AKI中具体作用及机制仍不完全清楚。本研究将通过体内与体外实验探究pxr在马兜铃酸诱导的急性肾损伤中的作用和机制。目的:探讨pxr在马兜铃酸诱导的急性肾损伤中的作用及可能的机制,为急性肾损伤的治疗提供新靶点。方法:1.构建AKI模型:C57BL/6雄性小鼠通过单次腹腔注射马兜铃酸(Aristolochic acid,AA)(10mg/kg)构建AKI模型,4天后处死小鼠收集肾脏,检测pxr的表达。用AA(20ug/ml)干预近端肾小管上皮细胞(The Boston University mouse proximal tubular cell line,BUMPT cells)诱导急性肾小管上皮细胞损伤,24小时后收集细胞检测pxr的表达。2.检测pxr在细胞模型中的作用:构建过表达pxr的细胞株,AA干预24小时后收集细胞,检测凋亡相关指标的表达。3.采用pxr的激动剂和抑制剂明确pxr在动物模型中的作用:1)孕烯醇酮腈(Pregnenolone carbonitrile,PCN)(小鼠pxr特异性激动剂)的作用。将小鼠随机分为以下3组:a.对照组;***组;***+PCN组。通过灌胃将PCN(50mg/kg)作用于小鼠,每天一次,连续4天,第4天腹腔注射单剂量AA(10 mg/kg),然后用PCN处理3天。在AA干预后第4天处死小鼠,收集小鼠肾脏、血清,检测凋亡指标、组织病理损伤、血肌酐。2)酮康唑(ketoconazole,KTZ)(小鼠pxr抑制剂)的作用。将小鼠随机分为以下3组:a.对照组;***组;***+KTZ组。通过灌胃将KTZ(200mg/kg)作用于小鼠,每天一次,连续2天,第2天腹腔注射单剂量AA(10 mg/kg),然后用KTZ处理2天。在AA干预后第3天处死小鼠,收集小鼠肾脏、血清,检测凋亡指标、组织病理损伤、血肌酐。4.探索pxr的作用机制:在BUMPT细胞中通过免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation,CO-IP)检测pxr与凋亡相关蛋白p53的结合情况;在AA诱导的AKI中,检测pxr对p53表达的影响。实验结果:1.在AA干预的肾脏组织和BUMPT细胞中,pxr表达明显下调。2.肾小管上皮细胞过表达pxr可减轻AA诱导的细胞凋亡。***激动剂减轻AA诱导的AKI,而pxr抑制剂加剧AA诱导的AKI。4.在BUMPT细胞中,pxr可以与p53结合;BUMPT细胞过表达pxr抑制了AA诱导的p53上调;在体内,pxr激动剂抑制AA诱导的急性肾损伤后p53的上调。结论:pxr可能通过抑制p53在马兜铃酸诱导的急性肾损伤中发挥保护作用。图5幅,表5个,参考文献共134篇

关键词：急性肾损伤 pxr 马兜铃酸肾小管上皮细胞凋亡 p53

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银杏双黄酮通过调控pxr增强紫杉醇对LS174T的抗肿瘤药效

银杏双黄酮通过调控PXR增强紫杉醇对LS174T的抗肿瘤药效

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作者：赖亦静广州中医药大学

学位级别：硕士

目的紫杉醇作为广谱抗肿瘤药物在结直肠癌上治疗受限,其分子机制可能与其诱导的pxr依赖性自噬相关,本论文拟通过紫杉醇与银杏双黄酮进行联合用药,对pxr调控的自噬—凋亡稳态进行干预,增强pxr高表达的结直肠癌细胞LS174T对紫杉醇的敏感性... 详细信息

目的紫杉醇作为广谱抗肿瘤药物在结直肠癌上治疗受限,其分子机制可能与其诱导的pxr依赖性自噬相关,本论文拟通过紫杉醇与银杏双黄酮进行联合用药,对pxr调控的自噬—凋亡稳态进行干预,增强pxr高表达的结直肠癌细胞LS174T对紫杉醇的敏感性,探讨其抗结直肠癌的药效及分子机制。方法1.验证银杏双黄酮在体外增强紫杉醇的细胞毒性作用及逆转紫杉醇引起的自噬:CCK8法检测联合用药下对LS174T细胞存活率的影响,并进行联合效应指数计算;通过流式细胞法测定联合用药的促凋亡作用;透射电镜观察联合给药后LS174T细胞中的自噬凋亡等细胞器形态学变化;通过构建Lenti-mCherry-EGFP-LC3B慢病毒稳转及Western blot检测联合用药对自噬的影响。2.验证银杏双黄酮在体内增强紫杉醇对裸鼠LS174T移植瘤的抑制作用及起效机制:对裸鼠皮下注射LS174T结直肠癌细胞,进行异位移植瘤造模,成瘤后分组给药,通过肿瘤体积变化、肿瘤重量、增殖率及裸鼠体重等指标进行药效评价;并通过免疫组化、蛋白检测以及透射电镜观察等方法检测移植瘤的肿瘤增殖标记物Ki67,与自噬、凋亡相关蛋白,以及自噬形态学等指标的组间变化。3.验证银杏双黄酮通过调控pxr逆转紫杉醇所致的自噬诱导:建立shpxr LS174T细胞,并通过Lenti-mCherry-EGFP-LC3B慢病毒稳转细胞及Western blot检测联合用药以及pxr表达量降低对自噬的影响水平。结果1.在紫杉醇与银杏双黄酮的体外药效实验中,CCK8结果显示当紫杉醇与银杏双黄酮干预浓度分别不高于12.5nM和1600nM时,均对细胞存活率没有影响(P>0.05),两者联合用药后对肿瘤细胞生长具有明显抑制作用(Ppxr上调的药理作用(Ppxr表达量(Ppxr表达量降低可以削弱紫杉醇对自噬的诱导作用,Western blot检测蛋白表达量结果也显示,紫杉醇用药诱导pxr表达下关键自噬蛋白Beclin1、ATG5、LC3、ULK1的表达量上调(Ppxr表达量能抑制关键自噬蛋白Beclin1、ATG5、LC3、ULK1的表达量(Ppxr高表达的结直肠癌细胞LS174T的体内外药效,且起效机制为抑制自噬,增强凋亡,同时pxr是紫杉醇激活LS174T细胞自噬的调控点。银杏双黄酮与紫杉醇的联合用药能够通过下调pxr逆转自噬诱导,促进细胞凋亡,从而增强结直肠癌对紫杉醇敏感性。联合用药的协同增效作用,为紫杉醇在CRC的再应用与pxr精准靶点治疗提供分子生物学基础和思路拓展。

关键词：紫杉醇结直肠癌 pxr 自噬银杏双黄酮

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齐墩果酸基于PKC/pxr信号通路对靶基因UGT1A1的调控机制研究

齐墩果酸基于PKC/PXR信号通路对靶基因UGT1A1的调控机制研究

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作者：朱素琴南昌大学

学位级别：硕士

背景:尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1（UGT1A1）是许多外源性药物及机体内源性胆红素的重要代谢酶,UGT1A1的表达或者功能异常会导致机体葡萄糖醛酸反应减弱或者终止,胆红素无法转化为水溶性大、极性高的可排泄代谢物进而蓄积在体内引发高... 详细信息

背景:尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1（UGT1A1）是许多外源性药物及机体内源性胆红素的重要代谢酶,UGT1A1的表达或者功能异常会导致机体葡萄糖醛酸反应减弱或者终止,胆红素无法转化为水溶性大、极性高的可排泄代谢物进而蓄积在体内引发高胆红素血症。齐墩果酸（Oleanolic Acid,OA）目前已广泛应用于临床急性黄疸型肝炎和病毒性肝炎等疾病的治疗,具有保肝、抗炎等作用。课题组前期研究已证实齐墩果酸可通过激活pxr从而诱导Hep G2细胞中UGT1A1的表达。蛋白激酶C（Protein Kinase C,PKC）是机体内重要的信号分子,活化的PKC可通过抑制核受体pxr（Pregnane X Receptor,pxr）的活性进而抑制其下游靶基因的表达。齐墩果酸如何通过PKC/pxr信号通路进而调控UGT1A1靶基因的表达尚不清楚,值得我们深入探索。目的:通过正常或过表达h PKCα及萘异硫氰酸酯（ANIT）致损伤的Hep G2细胞模型,研究齐墩果酸干预后PKCα、pxr与热休克蛋白（HSP90α）、类固醇受体激活蛋白1（SRC1）的结合影响及靶基因UGT1A1表达变化,探索齐墩果酸基于PKC/pxr信号通路对靶基因UGT1A1的分子调控机制,为胆红素代谢障碍性疾病的治疗提供理论依据。方法:1、在正常Hep G2细胞中,采用RT-q PCR、蛋白质免疫共沉淀、免疫荧光、Western-blot等技术,探讨齐墩果酸对pxr、SRC1、HSP90α及靶基因UGT1A1表达的影响,以及PKCα、pxr与HSP90α、SRC1结合的影响。2、在过表达h PKCα的Hep G2细胞中,通过RT-q PCR、Western-blot、质粒构建、瞬时共转染、蛋白质免疫共沉淀等技术,研究齐墩果酸对PKCα、pxr及靶基因UGT1A1表达的影响,以及PKCα、pxr与HSP90α、SRC1结合的影响。3、在ANIT致损伤Hep G2细胞模型中,采用ELISA、Western-blot等研究技术考察齐墩果酸对PKCα、pxr及靶基因UGT1A1表达的影响。结果:1、齐墩果酸对正常Hep G2细胞中pxr、SRC1、HSP90α及靶基因UGT1A1表达的影响,以及对PKCα、pxr与HSP90α、SRC1相互结合的影响。（1）在正常Hep G2细胞中,齐墩果酸明显上调了靶基因UGT1A1m RNA和蛋白的表达,m RNA增加了76.40%、蛋白增加了47.90%,对pxr总蛋白及核蛋白的表达也有上调作用,而对SRC1、HSP90α的表达无明显改变。（2）在正常Hep G2细胞中,齐墩果酸干预后pxr在胞浆中与HSP90α结合减少了42.87%,pxr与SRC1结合增加了43.84%,PMA干预后PKCα与HSP90α结合减少,齐墩果酸可以拮抗PMA的这种作用进而促进PKCα与HSP90α的结合。2、齐墩果酸对过表达h PKCα的Hep G2细胞中PKCα、pxr及靶基因UGT1A1表达的影响,以及对PKCα、pxr与HSP90α、SRC1结合的影响。（1）在过表达h PKCα的Hep G2细胞中,细胞质中PKCα的表达量升高,细胞膜上PKCα的表达无明显影响,提示过表达h PKCα并不会引起PKCα活化状态的改变。（2）在过表达h PKCα的Hep G2细胞中,PMA干预后HSP90α与PKCα结合减少42.00%,HSP90α与pxr结合增多了137.98%,pxr与SRC1结合减少了41.50%,UGT1A1表达下调,当与齐墩果酸共同干预时,上述作用均被拮抗甚至逆转。3、齐墩果酸对ANIT致损伤Hep G2细胞中PKCα、pxr及靶基因UGT1A1表达的影响。（1）与正常Hep G2细胞相比,ANIT致损伤Hep G2细胞中,IL-6、TNF-α等炎症因子明显升高,PKCα的膜蛋白表达明显上升,pxr的核蛋白表达明显下降,靶基因UGT1A1表达减少了41.25%。（2）ANIT致损伤Hep G2细胞中,齐墩果酸干预后,IL-6、TNF-α等炎症因子明显降低,PKCα膜蛋白表达显著下调,pxr核蛋白表达显著上调,同时靶基因UGT1A1表达增加了64.60%。结论:1、在正常及过表达h PKCα的Hep G2细胞中,pxr与PKCα可以竞争结合细胞质中的辅助抑制因子HSP90α,齐墩果酸可通过拮抗PMA诱导的PKCα活化作用,抑制PKCα向细胞膜转移,促进细胞质中PKCα与HSP90α的结合进而减少pxr与HSP90α的结合,有利于pxr活化入核增加,进而与SRC1结合增加,最终上调下游靶基因UGT1A1的表达。2、ANIT致损伤Hep G2细胞中,炎症状态下PKCα活化并向细胞膜转移,细胞质中PKCα减少,pxr核蛋白也相应减少。齐墩果酸可通过抑制P

关键词： OA UGT1A1 PKC pxr 调控通路

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