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葶苈大枣泻肺汤对急性肺损伤小鼠pten/pi3k/akt通路的影响

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中医学报 2024年第4期39卷 813-819页

作者：张成浠李小茜高丹汪顺朱华贺谭波杨爱东上海中医药大学上海201203 上海市重大传染病和生物安全研究院中医药疫病研究中心上海200032 复旦大学附属华山医院上海200040 上海中医药大学附属曙光医院上海201203

目的:探讨葶苈大枣泻肺汤对急性肺损伤小鼠磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tension homology,pten)/磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,pi3k)/蛋白激酶B(protein kinase B,akt)信号通路的影响。方法:将50只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、葶苈大枣泻肺汤低剂量组(5.85 g·kg^(-1))、葶苈大枣泻肺汤高剂量组(11.7 g·kg^(-1))、地塞米松组(5 mg·kg^(-1)),每组10只。各药物组按照相应剂量灌胃给药,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续7 d。末次灌胃后,除正常组外,其余小鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)溶液建立急性肺损伤模型。采用HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,RT-qPCR检测肺组织IL-6、TNF-α、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子3(suppressors of cytokine signaling 3,SOCS3)基因表达水平;Western Blot检测肺组织pi3k、p-akt/akt、akt、pten表达水平。结果:正常组小鼠肺组织未见明显病理性改变;模型组小鼠可见间质性肺炎和出血;与模型组比较,葶苈大枣泻肺汤低剂量组、高剂量组小鼠的间质性肺炎、出血情况减轻;地塞米松组小鼠肺组织未见明显病理性改变。与正常组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α含量升高(Ppi3k、p-akt/akt蛋白表达水平升高(Ppi3k、p-akt/akt蛋白表达水平降低(Ppten蛋白表达水平降低(Ppten蛋白表达水平升高(Ppten/pi3k/akt信号通路,抑制炎症反应有关。

关键词：葶苈大枣泻肺汤 pten/pi3k/akt通路急性肺损伤炎症小鼠《金匮要略》张仲景

加味沙参麦冬汤调控pten/pi3k/akt通路对CAG大鼠的治疗作用

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吉林中医药 2024年第1期44卷 73-78页

作者：刘远婷赵磊丁甜甜李慧李国英新疆医科大学第七附属医院中医科乌鲁木齐832000 新疆医科大学校医院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第七附属医院药学部乌鲁木齐832000

目的观察加味沙参麦冬汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜细胞凋亡及对pten/pi3k/akt通路的作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、加味沙参麦冬汤低剂量、中剂量、高剂量组共6组,每组各10只。除空白组外,其... 详细信息

目的观察加味沙参麦冬汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜细胞凋亡及对pten/pi3k/akt通路的作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、加味沙参麦冬汤低剂量、中剂量、高剂量组共6组,每组各10只。除空白组外,其余大鼠饮用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液以复制CAG模型。阳性对照组以维酶素作为阳性对照,于造模完成后给予0.3 g/kg维酶素混悬液灌胃,加味沙参麦冬汤低剂量、中剂量、高剂量组分别给予加味沙参麦冬汤不同剂量灌胃,每日给药1次,持续12周。采用中性红清除法观察胃黏膜血流量,ELISA实验检测血清中Fas、Fas L的含量,TUNEL染色检测胃黏膜细胞凋亡情况,免疫组织化学法及Western-blot法检测胃黏膜组织中pten/pi3k/akt信号通路相关蛋白的表达。结果加味沙参麦冬汤不同剂量灌胃治疗后,胃黏膜血流量明显升高,血清中Fas、Fas L的水平显著降低,胃黏膜TUNEL凋亡阳性细胞明显减少,胃黏膜组织中akt的阳性细胞数和蛋白表达显著减少(Ppten的阳性细胞数和蛋白表达显著上调,pi3k的阳性细胞数和蛋白表达显著下调(Ppten的表达有效抑制pi3k/akt信号通路的异常激活,发挥对CAG的防治作用。

关键词：慢性萎缩性胃炎加味沙参麦冬汤细胞凋亡 pten/pi3k/akt通路

RSRC1通过靶向调控pten/pi3k/akt通路抑制食管鳞状细胞癌的增殖和转移

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新医学 2023年第10期54卷 749-753页

作者：周家田尚观胜张聪蒋德熊袁冬冬汤登尧周江成都市第七人民医院(成都医学院附属肿瘤医院)胸外科成都610123

目的探索富含精氨酸和丝氨酸的卷曲螺旋1(RSRC1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)增殖和转移中的作用。方法通过生信分析检测磷酸酶及张力蛋白同源物(pten)在ESCC中的表达。利用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测ESCC细胞中RSRC1的表达。通过CCk-8... 详细信息

目的探索富含精氨酸和丝氨酸的卷曲螺旋1(RSRC1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)增殖和转移中的作用。方法通过生信分析检测磷酸酶及张力蛋白同源物(pten)在ESCC中的表达。利用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测ESCC细胞中RSRC1的表达。通过CCk-8、细胞迁移和侵袭实验阐明RSRC1对ESCC细胞增殖和转移的作用。通过蛋白免疫印迹法分析pten/pi3k/akt信号通路相关因子的表达。结果生信分析结果显示pten在ESCC组织中低表达。分子实验显示RSRC1在ESCC细胞中低表达。细胞实验发现敲低RSRC1可促进ESCC增殖和转移,并且可以调节pten/pi3k/akt信号通路。结论 RSRC1通过靶向调控pten/pi3k/akt通路抑制ESCC的增殖和转移,RSRC1可能是一种新的ESCC诊断标志物和治疗靶点。

关键词： RSRC1 pten/pi3k/akt通路食管鳞状细胞癌增殖转移

miR-21靶向调控pten/pi3k/akt通路对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

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现代检验医学杂志 2022年第4期37卷 18-22页

作者：姜富祥阿尔宾高飞王兴内蒙古自治区巴彦淖尔市医院脊柱外科内蒙古巴彦淖尔015000

目的检测微小核糖核酸(micro RNA,miR)-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达,并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达。选择MG-63细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染空白对照(control)、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组(miR-21-inhibitor),再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达。CCk-8法检测MG-63细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中pten,pi3k,akt及p-akt蛋白表达的影响。结果人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-63中miR-21相对表达水平分别为1.29±0.14,1.75±0.21和2.12±0.25,较人正常骨细胞hFOB 1.19中miR-21表达水平(0.75±0.12)显著升高,差异具有统计学意义(F=38.037,P=0.002)。转染抑制剂培养48h后,与Control组miR-21表达水平(2.07±0.28)和miR-21-NC组miR-21表达水平(2.02±0.33)相比,miR-21-inhibitor组miR-21表达水平(1.07±0.15)显著下降,差异具有统计学意义(F=33.357,P=0.005)。CCk-8结果表明,与Control组和miR-21-NC组相比,miR-21-inhibitor组各个时间点A值均显著下降,差异具有统计学意义(F=71.409~378.281,均P34,Ppten表达上调,pi3k和p-akt表达下调,差异均有统计学意义(F=86.309~138.615,均Pakt蛋白表达无明显影响,差异无统计学意义(F=14.527,P=0.152)。结论miR-21在人骨肉瘤细胞系中呈高表达,抑制miR-21表达可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭,促进其凋亡,作用机制可能与pten/pi3k/akt通路有关。

关键词：骨瘤细胞微小核糖核酸-21 pten/pi3k/akt通路增殖和侵袭凋亡

姜黄素作用pten/pi3k/akt通路诱导食管癌EC109细胞凋亡

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中国应用生理学杂志 2015年第2期31卷 174-177页

作者：李秀娟李玉珍金春亭范婕李海军河北北方学院病理教研室河北张家口075000

目的：研究姜黄素作用食管癌的分子机制。方法：体外培养人食管癌细胞（EC109）,15~120μmol/L姜黄素处理后,采用CCk-8法检测姜黄素对细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/pi双染激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡... 详细信息

目的：研究姜黄素作用食管癌的分子机制。方法：体外培养人食管癌细胞（EC109）,15~120μmol/L姜黄素处理后,采用CCk-8法检测姜黄素对细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/pi双染激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡,流式细胞术分析15~120μmol/L姜黄素作用EC109细胞后pten/pi3k/akt通路相关蛋白pten、akt、GSk3β和Caspase 3的表达水平。结果：CCk-8检测结果姜黄素能显著抑制EC109细胞的增殖,呈剂量和时间效应关系;透射电镜和激光共聚集显微镜观察发现姜黄素能使EC109细胞发生凋亡;流式细胞仪蛋白水平分析显示姜黄素可增强细胞中pten、GSk3β和Caspase 3的表达,抑制akt的表达。结论：姜黄素抑制EC109细胞的增殖并促进其凋亡的生物学效应与增强pten的表达抑制pi3k/akt信号通路有关。

关键词：姜黄素 pten/pi3k/akt通路食管癌

蝙蝠葛碱通过调控pten/pi3k/akt通路抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖与诱导凋亡

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中药材 2018年第10期41卷 2431-2434页

作者：张术波李海滨北华大学附属医院乳腺外科吉林吉林132000

目的:探讨蝙蝠葛碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响及潜在机制。方法:培养MCF-7细胞至对数生长期,经终浓度为0、2.5、5、10μg/mL的蝙蝠葛碱处理,其中0μg/mL蝙蝠葛碱为对照组;分别采用MTT法、流式细胞术、Hoechst染色、实时定量PC... 详细信息

目的:探讨蝙蝠葛碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响及潜在机制。方法:培养MCF-7细胞至对数生长期,经终浓度为0、2.5、5、10μg/mL的蝙蝠葛碱处理,其中0μg/mL蝙蝠葛碱为对照组;分别采用MTT法、流式细胞术、Hoechst染色、实时定量PCR法、Western blot检测蝙蝠葛碱对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡指数、凋亡相关基因及pten/pi3k/akt通路相关蛋白表达的影响。结果:与对照组比较,蝙蝠葛碱各浓度组细胞增殖抑制率、凋亡率及凋亡指数均显著升高(Ppten蛋白表达显著升高,p-pi3k、p-akt蛋白表达显著降低(Ppten/pi3k/akt通路有关。

关键词：蝙蝠葛碱乳腺癌凋亡增殖 pten/pi3k/akt通路

丹酚酸A调控pten/pi3k/akt通路介导心肌梗死模型大鼠心肌病理改变及血管新生

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丹酚酸A调控PTEN/PI3K/Akt通路介导心肌梗死模型大鼠心肌病理改变...

作者：郜景阁新乡医学院

学位级别：硕士

目的中药在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)治疗中的应用越来越受到重视。丹参作为一种著名的中药植物,被广泛应用于各种心血管疾病治疗中。丹酚酸A(SAA)是中药丹参的主要有效活性成分。为进一步研究SAA对AMI作用的分子... 详细信息

目的中药在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)治疗中的应用越来越受到重视。丹参作为一种著名的中药植物,被广泛应用于各种心血管疾病治疗中。丹酚酸A(SAA)是中药丹参的主要有效活性成分。为进一步研究SAA对AMI作用的分子机制,本研究通过建立大鼠AMI模型,通过形态学、信号通路等方面进行研究,探讨SAA促进AMI模型大鼠心肌病理改变及血管新生的作用和机制。方法选用110只健康的SPF级别SD雄性大鼠,喂养7天后,将其左冠状动脉结扎,以制备AMI模型,共有84只大鼠造模成功,将其随机分为AMI组(n=21)、SAA组(n=21)、阳性组(n=21),其中SAA组、阳性组分别使用剂量为2mg/kg的SAA、地尔硫卓(Diltiazem)对大鼠进行腹腔注射治疗,另设假手术组(n=21),各组给药28天。超声心动图法测定各组大鼠心功能指标[左室舒张末期内径(LVEDd)、收缩末期左室内径(LVEsd)、左心室射血分数(LVEF)以及左室短轴缩短率(LVFS)],HE染色评价各组大鼠心肌梗死面积,凝集素免疫荧光法评估大鼠心梗边缘区微血管密度(MVD),酶联免疫法检测各组大鼠血清心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)以及肌酸激酶同工酶(Ck-MB)水平,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心梗边缘区血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管生成素1(Ang-1)以及人10号染色体丢失的磷酸酶(pten)、磷脂酰肌醇-3羟基激酶(pi3k)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(akt)mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心梗边缘区VEGF、bFGF、Ang-1以及pten、pi3k、akt蛋白表达。结果1.各组大鼠心肌梗死边缘区MVC和MVD比较与假手术组[(28.11±4.03)个、(120.24±15.61)个/mm]比较,AMI组[(65.27±6.95)个、(271.33±30.82)个/mm]大鼠MVC、MVD值明显升高(P0.05)。2.各组大鼠心功能指标比较与假手术组[(66.04±1.98)%、(37.41±2.63)%]比较,AMI组[(23.18±2.93)%、(11.95±1.88)%]大鼠LVEF和LVFS明显降低(P0.05)。3.各组大鼠血清cTnⅠ和Ck-MB水平比较与假手术组[(25.46±4.29)pg/ml、(162.65±23.36)U/L]比较,AMI组[(78.04±13.15)pg/ml、(336.29±47.18)U/L]大鼠cTnⅠ、Ck-MB水平明显升高(Pk-MB水平明显降低(Pk-MB水平无显著性差异(P>0.05)。4.大鼠心梗边缘区VEGF、bFGF、Ang-1以及pten、pi3k、akt mRNA和蛋白表达比较与假手术组比较,AMI组大鼠VEGF、bFGF、Ang-1以及pten mRNA和蛋白表达明显升高(Ppi3k、akt mRNA和蛋白表达明显降低(Ppten mRNA和蛋白表达明显升高(Ppi3k、akt mRNA和蛋白表达明显降低(Ppten/pi3k/akt通路,促进心肌冠脉血管新生,进而改善大鼠心功能。

关键词：丹酚酸A pten/pi3k/akt通路心肌梗死大鼠心肌病理改变

MiR-130b-3p通过pten/pi3k/akt通路调控MG感染的机制研究

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MiR-130b-3p通过PTEN/PI3K/AKT通路调控MG感染的机制研究

作者：袁博华中农业大学

学位级别：硕士

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)引起的鸡慢性呼吸道疾病(CRD)是降低养禽业经济效益的重大疾病之一。该病在世界各地的鸡群中广泛存在,至今仍没有理想的防控手段,其致病机制有待进一步阐明。研究表明mi RNAs在疾病的发生发展... 详细信息

鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)引起的鸡慢性呼吸道疾病(CRD)是降低养禽业经济效益的重大疾病之一。该病在世界各地的鸡群中广泛存在,至今仍没有理想的防控手段,其致病机制有待进一步阐明。研究表明mi RNAs在疾病的发生发展过程中扮演着重要的角色,本试验旨在探讨Illumina深度测序筛选获得的gga-mi R-130b-3p对MG感染的作用,为深入了解MG的致病机制提供理论基础。试验以gga-mi R-130b-3p为研究对象,首先应用生物信息学技术预测及分析gga-mi R-130b-3p潜在的靶基因,利用双荧光素酶报告基因载体方法对靶基因进行初步验证;进一步通过超表达及抑制gga-mi R-130b-3p确证其与靶基因的负调控关系;利用q PCR分析MG-HS感染与非感染的SPF鸡胚肺组织及DF-1细胞中gga-mi R-130b-3p及靶基因的表达情况,确证深度测序结果及其靶基因;通过在线软件Ami GO,筛选得到gga-mi R-130b-3p可能通过pten/pi3k/akt信号通路起作用;利用q PCR的方法检测超表达及抑制gga-mi R-130b-3p后pi3k、akt及下游NF-κB的表达量;运用CCk-8法及流式细胞仪分析了MG感染及未感染的DF-1细胞增殖及周期的变化,解释gga-mi R-130b-3p在MG感染中的作用机制。主要结果如下:1.利用mi RDB、Target Scan软件及Pathway相关性分析预测gga-mi R-130b-3p的靶基因可能为pten,进一步应用RNAhybrid软件对gga-mi R-130b-3p与pten 3’非编码区(UTR)靶序列的碱基配对情况、RNA双链的二级结构和自由能以及靶序列在不同物种间的保守性等进行分析,同时结合Ami GO软件分析其靶基因的功能,初步确定pten为gga-mi R-130b-3p的靶基因。2.利用双荧光素酶报告基因分析显示:在DF-1细胞中超表达gga-mi R-130b-3p能极显著抑制pten 3’UTR双荧光素酶报告基因的活性;而gga-mi R-130b-3p抑制后,pten 3’UTR双荧光素酶报告基因的活性显著提高。初步验证pten可能是gga-mi R-130b-3p的靶基因。***-mi R-130b-3p过表达和抑制实验显示:DF-1细胞中超表达gga-mi R-130b-3p能极显著下调pten的表达量(ppten的表达量(ppten的表达。进一步确证pten是gga-mi R-130b-3p的靶基因。4.动物和细胞实验表明:在MG-HS感染的细胞及鸡胚肺组织(孵化第14d、16d及18d)中,gga-mi R-130b-3p的表达量显著升高(ppten的表达量显著下调(ppten呈负调控关系,pten是gga-mi R-130b-3p的靶基因。***-mi R-130b-3p功能研究表明:gga-mi R-130b-3p超表达能够极显著上调pi3k、akt及NF-κB基因的表达量(ppi3k、akt及NF-κB基因的表达量均显著下调(ppten的表达,激活pi3k/akt/NF-κB信号通路,加快细胞周期进程,促进组织细胞的增殖来抵御机体的MG感染。

关键词：鸡毒支原体 gga-miR-130b-3p pten/pi3k/akt通路

葛根素通过pten/pi3k/akt通路调控人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的研究

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现代消化及介入诊疗 2020年第7期25卷 883-888页

作者：胡亚丽杨杰庞茜茜河北北方学院附属第一医院药剂科 075000

目的研究葛根素(Puerarin)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,设空白组(DMSO)、葛根素(50、100、200μg/m L)组和顺铂20μg/m L组,药物干预48 h后进行相关指标检测及比较。CCk-8法检测各... 详细信息

目的研究葛根素(Puerarin)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,设空白组(DMSO)、葛根素(50、100、200μg/m L)组和顺铂20μg/m L组,药物干预48 h后进行相关指标检测及比较。CCk-8法检测各组HepG2细胞增殖率,碘化丙啶(pi)染色法检测细胞周期分布,Annexin V-FITC/pi双染法检测细胞凋亡水平,Western blot电泳法检测第10号染色体缺失的磷酸酶(pten)、蛋白激酶B(akt)、磷酸化akt(p-akt)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P27、激活型半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与空白组比较,葛根素100、200μg/m L组和顺铂20μg/m L组HepG2细胞增殖率降低,处于G0/G1期细胞比例升高,凋亡率升高,pten、Cleaved Caspase-3、Bax、P27表达量升高,p-akt、cyclin D1、bcl-2表达量降低,akt磷酸化(p-akt/akt比值)降低且Bax/bcl-2表达比值升高,差异有统计学意义(Ppten、Bax、P27表达量升高,p-akt、cyclin D1表达量降低,akt磷酸化降低且Bax/bcl-2表达比值升高,差异有统计学意义(Ppten表达而抑制pi3k/akt通路有关。

关键词：葛根素肝癌 pten/pi3k/akt通路增殖凋亡