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血小板对ECV304细胞pta1表达和PDGF释放的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第5期21卷 628-630页

作者：李常玲许瑞环张洪德尹学念上海市浦南医院检验科上海200125 深圳市龙岗中心医院中心实验室广东深圳518116

目的:探讨血小板对妊高征患者血清刺激下的ECV304细胞(ECV304)表达人血小板/T细胞活化抗原1(pta1)和释放血小板衍生生长因子(PDGF)的影响。方法①用间接免疫荧光染色结合流式细胞仪分析观察血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育... 详细信息

目的:探讨血小板对妊高征患者血清刺激下的ECV304细胞(ECV304)表达人血小板/T细胞活化抗原1(pta1)和释放血小板衍生生长因子(PDGF)的影响。方法①用间接免疫荧光染色结合流式细胞仪分析观察血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后pta1的表达②用ELISA方法检测血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后PDGF的量。结果:①血小板与妊高征患者血清刺激(24h、48h)的ECV304细胞孵育后pta1表达的百分率(6.32%、4.13%)明显低于对照组(15.51%、5.64%)(P1593、2625、2175ng/L)明显高于正常孕妇组(235、405、133.5ng/L)差异显著(P1)。③血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育后,24h、48h细胞培养上清液中PDGF-B的量又进一步增加(3266、2360ng/L),与对照组比差异显著(Ppta1分子发挥作用的,同时导致了PDGF的进一步释放。

关键词： pta1 ECV304细胞妊高征血小板流式细胞仪

人CD226(pta1)分子胞膜外区的原核表达、复性及免疫反应性的鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 587-590页

作者：张新海欧阳为明贾卫杨琨宁双飞陈丽华李琦金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　构建人CD2 2 6 (pta1)分子胞膜外区的原核表达载体 ,并进行原核表达和复性 ,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源。方法　将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因克隆入原核表达载体pBV2 2 0 ,测序证实后 ,转化宿主菌MC1... 详细信息

目的　构建人CD2 2 6 (pta1)分子胞膜外区的原核表达载体 ,并进行原核表达和复性 ,为该分子的X线结晶衍射及功能学研究提供充足的蛋白来源。方法　将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因克隆入原核表达载体pBV2 2 0 ,测序证实后 ,转化宿主菌MC10 6 1 P3并进行温度诱导表达。产物采用稀释加透析法复性 ,亲和层析柱纯化 ,并通过Westernblot和ELISA对其复性效果进行鉴定。结果　温度诱导 7h ,目的蛋白的表达量达宿主菌总蛋白量的 2 3.8% ,其相对分子质量为 30× 10 3,Westernblot及ELISA证实其重折叠和复性是成功的。结论　成功地获得了人CD2 2 6 (pta1)分子胞膜外区的原核表达产物。

关键词： CD226 pta1 胞膜外区原核表达免疫反应性鉴定重折叠复性

人CD226(pta1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第1期23卷 9-13页

作者：贾卫刘雪松张新海朱勇张贇李琦杨琨欧阳为明宁双飞金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的　确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法　应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 ... 详细信息

目的　确定一套CD2 2 6单克隆抗体 (McAb)识别CD2 2 6分子胞膜外区结构域的部位。方法　应用计算机软件分析CD2 2 6分子蛋白质序列疏水性 ,确定其亲水性区域。采用PCR方法扩增CD2 2 6分子基因序列 ,分别缺失相应亲水性区域 ,构建CD2 2 6截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3 pta1T1和pcDNA3 pta1T2。测序正确后 ,转染COS7细胞 ,抗CD2 2 6分子多克隆抗体间接免疫荧光染色 ,流式细胞术检测CD2 2 6分子截短体的表达。表达成功后 ,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,用一套CD2 2 6McAb检测与截短突变体的免疫反应性 ,从而确定CD2 2 6McAb识别CD2 2 6分子结构域的部位。结果　PCR扩增出CD2 2 6分子相应目的片段序列 ,定向克隆入pcDNA3真核表达载体 ,DNA序列测定正确。转染COS7细胞后 ,流式细胞术检测CD2 2 6截短体分子有较高水平的表达。CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1和FMU1～ 7均可识别CD2 2 6全长分子 ;LeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体pta1T1和pta1T2均无反应性 ;FMU3可结合pta1T1分子 ,不结合pta1T2分子 ;FMU6和FMU7均可结合pta1T1及pta1T2分子。结论　CD2 2 6McAbLeoA1、NewE1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD2 2 6分子胞膜外区D1结构域 ,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间 ;FMU6?

关键词： CD226 pta1 截短体基因表达亲水性区域

Im m unohistochem istry study of pta1 ligand expression on Colo205 cell sur-face

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空军军医大学学报 1999年第10期20卷 926-927页

作者： SUN Kai 1, JIN Bo Quan 2, FENG Qi 3, ZHU Yong 2, YANG Kun 2, LIU Xue Song 2, ZHANG Jian Ping 2 1Department of Hepatobiliary Surgery, Xijing Hospital, 2Department of Immunology, Faculty of Preclinical Medicine, 3Department of H 第四军医大学附属西京医院陕西

INTRODUCTION T lineage specific activation antigen 1 (TLiSA1), first reported by Burns in 1985[1], was renamed pta1 in 1989 because of its expression on platelets as well[2]. Since 1985, a lot of investigations have been done on pta1 expression, its functions and its relationship with diseases. pta1, mainly expressed on activated T cells, platelets and megakaryocytes lineage, was involved in signal transduction of T cell activation and differentiation as well as platelet activation and aggregation. pta1 mAb (Leo-A1) was found to stimulate activation and aggregation of platelets and inhibit differentiation of CTL.

关键词： pta1 ligand immunohistochemistry

小鼠CD226(pta1)的基因克隆及其异型

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中国免疫学杂志 2002年第6期18卷 371-375页

作者：张新海李德敏欧阳为明贾卫谢鑫陈丽华宁双飞张赟金伯泉第四军医大学免疫学教研室西安710032

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (pta1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结... 详细信息

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (pta1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (pta1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。

关键词： CD226 血小板 T细胞活化抗原1 基因克隆异型 pta1

pta1在人巨核母细胞系HEL细胞和血小板的表达及分布

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细胞与分子免疫学杂志 1998年第3期14卷 195-197,207页

作者：孙忱金伯泉孙凯李家增武怀珠刘雪松杨琨董邦权第四军医大学免疫学教研室中国医学科学院血液学研究所

应用抗人血小板和Ｔ细胞活化抗原１（ＰＴＡ１）单克隆抗体（ｍＡｂ）间接免疫荧光染色和流式细胞仪（ＦＣＭ）分析，以及胶体金免疫电镜技术，检测了人巨核母细胞系ＨＥＬ细胞和血小板膜表面ＰＴＡ１分子的表达水平，并对静止与活化血... 详细信息

应用抗人血小板和Ｔ细胞活化抗原１（ＰＴＡ１）单克隆抗体（ｍＡｂ）间接免疫荧光染色和流式细胞仪（ＦＣＭ）分析，以及胶体金免疫电镜技术，检测了人巨核母细胞系ＨＥＬ细胞和血小板膜表面ＰＴＡ１分子的表达水平，并对静止与活化血小板膜表面ＰＴＡ１分子的表达和分布进行了比较。结果表明，ＨＥＬ细胞与人血小板膜表面均表达高水平ＰＴＡ１分子，活化血小板膜表面ＰＴＡ１分子表达水平有所降低，但胞膜内陷所形成的胞浆空泡膜内侧可见密度较高的ＰＴＡ１分子。

关键词： pta1 巨核细胞 HEL细胞血小板单克隆抗体

AP1对人CD226/pta1启动子的调控作用

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第四军医大学学报 2005年第9期26卷 777-779页

作者：菅金龙陈立杰曹云新欧阳为明金伯泉第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:确定血小板/T细胞活化抗原1(pta1)基因的转录起始点,及激活蛋白1(AP1)对pta1启动子的调控作用.方法:采用5′RACE方法确定pta1基因的转录起始点;将含AP1的真核表达载体和含有pta1启动子的荧光素酶的报告基因载体共转染人肝癌细胞系H... 详细信息

目的:确定血小板/T细胞活化抗原1(pta1)基因的转录起始点,及激活蛋白1(AP1)对pta1启动子的调控作用.方法:采用5′RACE方法确定pta1基因的转录起始点;将含AP1的真核表达载体和含有pta1启动子的荧光素酶的报告基因载体共转染人肝癌细胞系HHCC,培养48h后检测其荧光素酶活性.结果:人pta1基因的转录起始点定位于ATG上游229bp处,AP1可以显著地增强pta1启动子P1和P2的活性,转录因子ets1对AP1上调P1和P2活性有不同的调控作用.结论:pta1的转录起始点位于ATG上游229bp处,AP1可能参与调控pta1的表达.

关键词： pta1 启动子 RACE AP1

小鼠pta1(CD226)胞膜外两个结构域同时与小鼠Tage4(CD155)的相互作用

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第四军医大学学报 2006年第15期27卷 1353-1356页

作者：徐向升张新海庄然金伯泉第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:确定mpta1分子与mTage4参与相互作用的结构域,以深入研究这两种分子的功能.方法:扩增编码mTage4全长分子和mpta1,hICAM-1分子不同结构域的DNA序列,构建含mTage4,mpta1不同结构域编码序列的截短体、mpta1/hICAM-1荧光蛋白嵌合体分... 详细信息

目的:确定mpta1分子与mTage4参与相互作用的结构域,以深入研究这两种分子的功能.方法:扩增编码mTage4全长分子和mpta1,hICAM-1分子不同结构域的DNA序列,构建含mTage4,mpta1不同结构域编码序列的截短体、mpta1/hICAM-1荧光蛋白嵌合体分子基因的真核表达载体,并转染COS-7真核细胞,通过激光共聚焦扫描显微镜研究这两种分子间的相互作用.结果:DNA序列测定证实成功构建了含mTage4全长分子和mpta1截短体、mpta1/hICAM-1嵌合体分子基因的真核表达载体,激光共聚焦扫描显微镜观察结果表明mpta1截短体分子和mpta1/hICAM-1嵌合体分子不能与mTage4有效结合,而mpta1全长分子能与mTage4相互作用.结论:mpta1分子胞膜外区两个结构域同时参与了与mTage4的相互作用.

关键词： pta1 CD226 Tage4 CD155 截短体嵌合体结构域

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一种新的恒河猴T淋巴细胞活化抗原pta1

中国实验动物学报 1997年第1期5卷 20-22页

作者：刘雪松金伯泉田方赵宁王增禄曹云新第四军医大学免疫学教研室第四军医大学生物技术中心第四军医大学中心实验室

本文应用抗人Ｔ细胞活化抗原ＣＤ２５和ＰＴＡ１ＭｃＡｂ对恒河猴ＰＢＭＣ进行间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析，结果发现，恒河猴静止ＰＢＭＣＣＤ２５和ＰＴＡ１均为阴性，而ＰＨＡ活化后或经连续２个月注射ｒＨｕＴＮＦ－α恒河猴... 详细信息

本文应用抗人Ｔ细胞活化抗原ＣＤ２５和ＰＴＡ１ＭｃＡｂ对恒河猴ＰＢＭＣ进行间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析，结果发现，恒河猴静止ＰＢＭＣＣＤ２５和ＰＴＡ１均为阴性，而ＰＨＡ活化后或经连续２个月注射ｒＨｕＴＮＦ－α恒河猴ＰＢＭＣ均表达高比率的ＣＤ２５和ＰＴＡ１阳性细胞。此结果表明，ＰＴＡ１抗原可作为恒河猴活化Ｔ淋巴细胞的一种有用标志，为ＰＴＡ１分子结构和功能研究以及采用恒河猴作为灵长类动物模型，观察细胞免疫功能状态提供了有用的资料。

关键词：恒河猴 PBMC CD25 抗原 T淋巴细胞活化 pta1 细胞免疫功能状态灵长类动物功能研究 PHA