检索结果-南通市图书馆

云南农业大学学报（自然科学版） 2012年第4期27卷 483-489页

作者：卢丽丽白建明陈恩发包丽仙潘哲超杨琼芬云南省农业科学院经济作物研究所云南昆明650205 内蒙古马铃薯工程技术研究中心内蒙古呼和浩特010020

为研究病毒和类病毒在马铃薯试管苗不同部位的积累规律,利用实时荧光定量PCR和DAS-ELISA两种方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,pstvd)、马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PL-RV)和马铃薯S病毒(Potato vir... 详细信息

为研究病毒和类病毒在马铃薯试管苗不同部位的积累规律,利用实时荧光定量PCR和DAS-ELISA两种方法检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,pstvd)、马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PL-RV)和马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)在马铃薯试管苗基部和顶端继代培养5代(继5代)后的含量。结果表明:pstvd,PLRV和PVS在马铃薯试管苗常规组织培养过程中是逐代传递的,其在马铃薯试管苗顶端和基部的积累规律存在显著的品种差异,分别供试的7个品系中,存在pstvd顶端积累和基部积累效应的各3个品系,存在PLRV顶端积累和基部积累效应的分别为4个和2个品系,存在PVS顶端积累和基部积累效应的分别为3个和2个品系,其中pstvd的顶端积累效应最强为基部的4倍;同一马铃薯品系的顶端和基部对不同病毒和类病毒的积累趋势相对一致。实时荧光定量PCR是一种灵敏度很高的定量检测马铃薯病毒和类病毒的方法。

关键词： pstvd PLRV PVS 马铃薯试管苗继代培养实时荧光定量PCR

Detection of pstvd with a New Nonradioactive Method──Digoxigenin Labeled cDNA Probe

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

内蒙古大学学报(自然科学版) 1997年第2期 114-117页

作者：张彤张鹤龄内蒙古大学生物学系

使用非放射性标记ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ进行核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰＳＴＶｄ）．结果表明，ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记具有灵敏度高，操作简单快捷，无放... 详细信息

使用非放射性标记ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ进行核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰＳＴＶｄ）．结果表明，ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记具有灵敏度高，操作简单快捷，无放射性污染等优点．可检出含有ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最大稀释度及含有ＰＳＴＶｄ全序列的质粒ＤＮＡ的最小量分别为１３００和１０ｐｇ．同时该探针也用于检测了不同马铃薯品种及ＴＰＳ亲本中的ＰＳＴＶｄ感染情况，结果显示，其中一些品种及ＴＰＳ亲本已不同程度的被ＰＳＴＶｄ感染．

关键词： Digoxigenin-cDNA探针非放射性检测 pstvd

amiRNA介导的兼抗PVX、PVY、pstvd马铃薯植株获得及抗性鉴定

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

华北农学报 2021年第3期36卷 195-202页

作者：姜丽丽牟芮刘尚武张桂芝金光辉黑龙江八一农垦大学农学院黑龙江大庆163319 黑龙江省农业科学院马铃薯研究所黑龙江哈尔滨150086

为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和pstvd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物... 详细信息

为获得兼抗多种病毒(类病毒)的马铃薯植株,分别克隆了靶向PVX、PVY和pstvd蛋白的P25、HC-Pro和Virp1基因,以拟南芥pre-miR159a为骨架设计了针对P25、HC-Pro和Virp1基因的amiRNA序列,通过Overlapping PCR将3个amiRNA片段连接,并导入植物双元表达载体pCAMBIA1300-221,构建植物表达载体p1300-221-pre-amiR-P25-HCPro-Virp1,经PCR及酶切验证,表达载体构建正确。农杆菌介导法将含目的基因质粒菌液侵染马铃薯品种费乌瑞它脱毒微型薯片,经再生、压力筛选,抗性植株分化及植株壮苗共获得转化株系15株,PCR检测结果表明,其中10株检测到与目的基因大小一致的片段(729 bp)。qRT-PCR结果显示,外源amiR-P25-HCPro-Virp1基因在10个转化植株中均有表达,相对表达量在7.68~21.37。对T0阳性转化植株的攻毒试验,将PVX、PVY和pstvd病毒等量混合液摩擦接种至6~8叶期的植株叶片,20 d后观察发现,对照植株感病严重,出现植株矮小、叶片斑驳等症状,而转化植株未表现出感病症状,生长正常。RT-PCR进行病毒特异性检测,结果显示,转化植株中也未检测到病毒序列,这表明转amiR-P25-HCPro-Virp在转化植株中能稳定表达,转化植株能够兼抗PVX、PVY和PVSTd 3种病毒(类病毒)。得到了同时兼抗PVX、PVY和PVSTd转化植株,且抗性显著,为马铃薯抗病毒育种提供了新的遗传资源。

关键词：马铃薯 amiRNA PVX PVY pstvd

利用人工microRNA技术培育PVX、PVY及pstvd抗性马铃薯的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

利用人工microRNA技术培育PVX、PVY及PSTVd抗性马铃薯的研究

作者：牟芮黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

马铃薯病毒及类病毒病害严重影响了中国马铃薯的生产。如今,人工microRNA策略的发展为培育抗病毒及类病毒的马铃薯新材料提供了新方法也获得了很大的成功,amiRNA(artificial microRNA,amiRNA)是通过对靶标基因序列的剪切来调控基因的表... 详细信息

马铃薯病毒及类病毒病害严重影响了中国马铃薯的生产。如今,人工microRNA策略的发展为培育抗病毒及类病毒的马铃薯新材料提供了新方法也获得了很大的成功,amiRNA(artificial microRNA,amiRNA)是通过对靶标基因序列的剪切来调控基因的表达,进而达到沉默基因的目的,由于其高效性,适用于抗病毒转基因植株的培育。本研究采用amiRNA策略,以马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)编码沉默抑制子P25蛋白和Hc-pro蛋白的基因为靶标,构建分别靶向P25和Hc-pro基因的amiRNA双元表达载体,并选取前期构建完成的,靶向马铃薯中的植物转录因子类病毒结合蛋白Virp1(Viroid RNA-binding protein 1,Virp1)的表达载体1300221-amiR-Virp1-301,运用农杆菌介导法转化马铃薯品种克新13,检测阳性植株中amiRNA的表达量,并对再生植株进行抗病性鉴定。主要实验结果如下:1)成功构建了2个靶向马铃薯X病毒编码沉默抑制子P25基因的amiRNA双元表达载体1300221-amiR-P25-1和1300221-amiR-P25-2。以及1个靶向马铃薯Y病毒编码沉默抑制子Hc-pro基因的amiRNA双元表达载体1300221-amiR-Hc-pro。2)获得成功转化各amiRNA载体的马铃薯再生植株,荧光定量PCR结果表明,各转基因植株都可以表达目标的amiRNA。3)病毒接种实验结果表明,在进行一次接种30d后可以对PVX、PVY和pstvd表现抗性,基本可以证明表达的amiRNA可以靶向沉默抑制子P25、沉默抑制子Hc-pro以及Virp1进行剪切,增强了沉默效应,阻碍了病毒和类病毒对植株的侵染。

关键词：马铃薯 amiRNA 沉默抑制子 PVX PVY pstvd 抗性

应用NASH方法检测马铃薯类病毒(pstvd)

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国马铃薯 2001年第2期15卷 87-88页

作者：李学湛吕典秋白艳菊何云霞张儒喜朱财王毅 L.Salazar 黑龙江省农科院生物技术中心哈尔滨150086 国际马铃薯中心北京100081

1 前言马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato Spindle Tuber Viroid,简称pstvd)是引起马铃薯纺锤块茎病的原因,该病害发现于1922年,但直到1967年及以后的研究中才发现该病由一种叫类病毒的病原引起的.分布十分广泛,是危害我国北方马铃薯生产的... 详细信息

1 前言马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato Spindle Tuber Viroid,简称pstvd)是引起马铃薯纺锤块茎病的原因,该病害发现于1922年,但直到1967年及以后的研究中才发现该病由一种叫类病毒的病原引起的.分布十分广泛,是危害我国北方马铃薯生产的重要病害之一,严重影响马铃薯的质量和产量,一般弱系可造成减产20%～35%,强系可达60%.对其检测有指标植物方法( 利用指示植物鲁格斯番茄Rutgers,新莨蓿等),在我国,目前较常用的检测方法为聚丙烯酰胺凝胶电泳法,而随着分子生物学的发展,杂交技术已广泛应用于核酸分析中,核酸斑点杂交法(NASH)作为目前国际上较先进的一种检测方法.它已被一些国家列为检测pstvd的标准检测方法,它的应用已扩大到病毒检测,本文就利用荧光标记探针,通过斑点杂交非放射性检测pstvd方法做一些详细的介绍.

关键词： NASH 马铃薯类病毒 pstvd 检测方法

往复双向电泳法(R-PAGE)检测马铃薯纺锤块茎类病毒(pstvd)核酸制备的改进

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江农业科学 2003年第4期 28-30页

作者：黄元璜黑龙江省农科院绥化农科所绥化152052

双向往返电泳(R-PAGE)法是检测马铃薯纺锤块茎类病毒(pstvd)的有效手段,本试验通过对该方法中马铃薯纺锤块茎类病毒核酸提取步骤的改进,提高了核酸纯度,使检测结果更为准确、清晰,且灵敏度高。

关键词：往复双向电泳法 R-PAGE 检测马铃薯纺锤块茎类病毒 pstvd 核酸制备

Detection of Potato Spindle Tuber Viroid, and Its Impact on Growth, Production of Tomatoes in Greenhouse

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Journal of Agricultural Science and Technology(B) 2012年第8期2卷 940-949页

作者： Haniyeh Mohamed Algamodi Jaber Abdullah Khalil Taher Ahmed Abouhliqh Khaled Ojdj College of Education Gasar bin Ghashir University of Tripoli Tripoli Libya College of Agriculture University of Tripoli Tripoli Libya College of Agriculture Ajafarh University of Tripoli Tripoli Libya College of Agriculture Ain Shams University Cairo Egypt

The viability of most tomato varieties cultivated in Libya have been tested to infect with potato spindle tuber viroid/potatoes (pstvd) and its impact on growth and production of some of these varieties, which were mechanically inoculated with Libyan isolate of viroid pstvd as follows: Vlkato, Sankarh, Lebda, Jasmine, Kenza and Hana. The percent of incidence were 95.95%, 90%, 90.80%, 80% and 20%, respectively. The following varieties have been contagious mechanically with viroid of pstvd: Vlkato, zahra, Toria, Lebda, Hoda, Farwa, Alkaraz, Naziha, Rim Star and Kartika. The percent of incidence were 95.95%, 85%, 85.80%, 80%, 70.40%, 0.0%, 0.0%, respectively. The varied symptoms of wrinkle, twist, warp, swell the veins of the leaves, dark brown spots formation and a large yellow spots turned into white patches. Also the effect of the Egyptian isolate viroid pstvd in the growth and production of varieties Jasmine, Lebda, Soberhalim, and treasure No.185 had been studied, as the average rates of decline in the production of the fruits tomatoes/tomato 43.4% and 17% length of plants, and in the fresh weight and dry root of the sum of 35% and 37% respictively.

关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒温室番茄生长发育生产 pstvd 番茄品种检测机械接种

高抗马铃薯纺锤形块茎类病毒的转基因马铃薯细胞内核酶转录产物的分布

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

科学通报 1998年第17期43卷 1851-1855页

作者：刘灿辉杨希才王小凤田波中国科学院微生物研究所北京100080

以对马铃薯纺锤形块茎类病毒 (pstvd)有高度抗性的表达核酶的转基因马铃薯为材料 ,研究了核酶转录产物在植株根细胞中的亚细胞分布 .首先通过往返式凝胶电泳和North ern杂交选择出表达核酶并对pstvd高抗的 ,即检测不出pstvd存在的马铃薯... 详细信息

以对马铃薯纺锤形块茎类病毒 (pstvd)有高度抗性的表达核酶的转基因马铃薯为材料 ,研究了核酶转录产物在植株根细胞中的亚细胞分布 .首先通过往返式凝胶电泳和North ern杂交选择出表达核酶并对pstvd高抗的 ,即检测不出pstvd存在的马铃薯系 .用其根细胞进行原位杂交 ,结果表明核酶转录产物主要分布在转基因马铃薯细胞的细胞核中 .这一结果支持我们提出的核酶对在核内复制的类病毒更为有效的假说 .

关键词：转基因马铃薯 pstvd 原位杂交核酶亚细胞分布

马铃薯纺锤块茎类病毒RT-PCR检测及全序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华北农学报 2003年第F9期18卷 63-65页

作者：吴志明贾晓梅谢晓亮温春秀田伟张庆良河北省农林科学院经济作物研究所河北石家庄050051 河北农业大学园艺学院河北保定071001 河北科润农业技术有限公司河北石家庄050051

根据马铃薯纺锤块茎类病毒(pstvd)基因序列设计合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,经RT PCR法扩增出全长的cDNA片段,结果从感病组织中扩增出与预期的360bp大小的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将其克隆到质粒pGEM T载体上,... 详细信息

根据马铃薯纺锤块茎类病毒(pstvd)基因序列设计合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,经RT PCR法扩增出全长的cDNA片段,结果从感病组织中扩增出与预期的360bp大小的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将其克隆到质粒pGEM T载体上,进行全序列分析。结果表明,与国内外的报道相比较,核苷酸同源率高达98%以上。PCR产物克隆作为RT PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,为进一步进行抗pstvd基因工程研究打下了良好基础。

关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒 pstvd 基因序列全序列分析 RT-PCR检测抗病品种脱毒种苗