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Porcine Antimicrobial Peptide pr-39 Is Modulated by Lactoferrin in Marrow Cells

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Journal of Animal Science and Biotechnology 2010年第2期1卷 108-117页

作者： FeifeiHan YifanLiu YonggangXie ZhonghuaAn AipingWang YizhenWang InstituteofFeedScience KeyLaboratoryofMolecularAnimalNutritionMinistryofEducationKeyLaboratoryofAnimalFeedandNutritionofZhejiangProvinceZhejiangUniversityHangzhouZhejiang310029China

pr-39 is a porcine antimicrobial pep- tide that plays an important role in the innate defense mechanism. We produced monoclonal antibodies （MAbs） against pr-39 by fusing mouse myeloma ceils with lymph node cells from BALB/c mice immu- nized with the reactive site sequence pr-11 of pr-39. Furthermore, we investigated the effect of lactoferrin on pr-39 gene levels and peptide concentrations in cultural supernatants of bone marrow granulocytes by RT-PCR and the competitive inhibition ELISA meth- od established in this study. Two hybridomas 3H5 and 5H7 were selected for developing ascites and con- tained MAbs against pr-11, which were used for screening the specificity to pr-39 by competitive inhi- bition ELISA. We found that MAbs were successfully produced against pr-11 and the MAbs had a strong reaction with pr-39 excreted by porcine marrow gran-ulocytes. The ascites had a relatively high titer and the purified MAbs were determined as IgG1. Incubation with 10 or 100 ixg/mL lactoferrin significantly in- creased （ P 〈 0.05 ） pr-39 mRNA levels in bone mar- row granulocytes after 3 h and 6 h, but 1000 pog/mL lactoferrin reduced （ P 〈 0.05） pr-39 mRNA expres- sion after 3 h and 6 h compared with control （ no lact- oferrin added）. The relative concentrations of pr-39 in supernatant secreted by marrow granulocytes were significantly increased by 1000 p,g/mL lactoferrin af- ter both 3 h and 6 h. These findings suggest a regula- tory role of lactoferrin for the antimicrobial peptide pr-39 in marrow cells in vitro. It is possible that the regulation of antimicrobial peptide pr-39 expression may be one of the protective mechanisms of lacto- ferrin in pigs.

关键词： antimicrobial peptide lactoferrin monoclonal antibody pr-39 RT-PCR

不同锌源对断奶仔猪抗菌肽pr-39 mRNA表达的影响

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中国兽医学报 2005年第5期25卷 523-526页

作者：汪以真王静华林文学许梓荣韩菲菲浙江大学饲料科学研究所动物分子营养学教育部重点实验室浙江杭州310029

96头36日龄杜长嘉(杜洛克×♀长嘉)断奶仔猪,按体质量相近原则随机分成4个处理组,每个组设3个重复,每个重复8头猪(公母各半)。对照组(处理1)饲喂不添加任何锌源的基础饲料(DE 13.25 M J/kg,CP 18.5%),处理2、处理3、处理4分别饲喂添加... 详细信息

96头36日龄杜长嘉(杜洛克×♀长嘉)断奶仔猪,按体质量相近原则随机分成4个处理组,每个组设3个重复,每个重复8头猪(公母各半)。对照组(处理1)饲喂不添加任何锌源的基础饲料(DE 13.25 M J/kg,CP 18.5%),处理2、处理3、处理4分别饲喂添加硫酸锌(Zn 100 m g/kg)、氧化锌(Zn 3 000 m g/kg)和纳米氧化锌(Zn 100 m g/kg)饲粮。根据已报道的猪抗菌肽pr-39和看家基因β-肌动蛋白(-βactin)基因序列,分别设计pr-39和-βactin的引物,探讨了PCR体系中适宜的M gC l2浓度、循环次数,以及2对引物间竞争情况。以此构建一优化的半定量RT-PCR法。以β-actin为内标,研究了不同锌源对仔猪抗菌肽pr-39基因表达的影响。结果显示,与对照组相比,高氧化锌组(Zn 3 000m g/kg)显著提高了抗菌肽pr-39基因的表达量,提高量为378.26%(Ppr-39基因的表达提高了38.4%和23.91%,但统计结果差异不显著。

关键词： RT-PCR 锌猪抗菌肽 pr-39

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猪肠道抗菌肽pr-39基因克隆及序列分析

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2002年第6期28卷 685-688页

作者：汪以真俞颂东林文学浙江大学饲料科学研究所浙江杭州310029

从杜长大猪的骨髓中提取基因组RNA,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得一条349bp的片段,克隆于pGEM-TVector后进行序列分析结果表明,该片段为pr-39基因cDNA的部分序列,编码113个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分.本... 详细信息

从杜长大猪的骨髓中提取基因组RNA,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得一条349bp的片段,克隆于pGEM-TVector后进行序列分析结果表明,该片段为pr-39基因cDNA的部分序列,编码113个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分.本研究得到的基因片段与报道的猪pr-39cDNA部分序列完全一致.

关键词：猪肠道抗菌肽 pr-39 基因克隆序列分析

pBD-1和pr-39基因在藏猪与约克夏猪免疫组织中的表达水平的比较研究

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2014年第3期35卷 1-6页

作者：程驰孙文魁陈义辉王晔李江凌刘锐高荣生物资源与生态环境教育部重点实验室、四川大学生命科学学院成都610064 四川理工学院生物工程学院自贡643000 四川省畜牧科学研究院成都610066

β-防御素1和抗菌肽pr-39在动物固有免疫中起重要作用。本实验采用实时荧光定量PCR对6周、12周和24周龄的藏猪和约克夏猪的胸腺、血液、脾脏、扁桃体、肺门淋巴结和肠系膜淋巴结中的p BD-1和pr-39 mRNA表达规律及水平进行比较。结果表明... 详细信息

β-防御素1和抗菌肽pr-39在动物固有免疫中起重要作用。本实验采用实时荧光定量PCR对6周、12周和24周龄的藏猪和约克夏猪的胸腺、血液、脾脏、扁桃体、肺门淋巴结和肠系膜淋巴结中的p BD-1和pr-39 mRNA表达规律及水平进行比较。结果表明:在两种猪的所有组织中均能检测出p BD-1与pr-39 mRNA,且p BD-1与pr-39mRNA水平呈先升高后略降的时序表达模式;在不同组织中,p BD-1mRNA在两种猪的扁桃体中高表达,而pr-39mRNA在肠系膜淋巴结中高表达,二者在脾脏中低表达;与约克夏猪相比,藏猪血液、扁桃体和肠系膜淋巴结中的p BD-1和pr-39 mRNA表达量高(P0.05)。说明p BD-1和pr-39mRNA在猪的免疫组织器官中均能表达并且其表达量具有组织偏好性、时序性和品种差异;与约克夏猪相比,藏猪多个免疫组织中p BD-1和pr-39mRNA高表达(P<0.05)可能与藏猪较强的抗病力和耐逆性有关。

关键词：猪 β-防御素1 pr-39 荧光定量PCR 转录

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猪pr-39抗菌肽基因在毕赤酵母中的表达

生物技术 2016年第1期26卷 29-33,47页

作者：江学斌陈嘉蔚杨军柯德森肖安吉卢志鹏楚品品黄朝远蔡海明马苗鹏张玲华广州大学生物工程研究所广东广州510006 华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室广东广州510642

[目的]在毕赤酵母中表达抗菌肽pr-39基因,获得有抗菌活性的pr-39。[方法]根据酵母和猪密码子偏好性,对其密码子进行优化改造。将经SOE-PCR获得的pr-39基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组载体pPIC9K-pr-39。经SacⅠ线性化电击转... 详细信息

[目的]在毕赤酵母中表达抗菌肽pr-39基因,获得有抗菌活性的pr-39。[方法]根据酵母和猪密码子偏好性,对其密码子进行优化改造。将经SOE-PCR获得的pr-39基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建重组载体pPIC9K-pr-39。经SacⅠ线性化电击转化毕赤酵母GS115,取阳性克隆进行髙拷贝转化子筛选和诱导表达。[结果]pPIC9K-pr-39重组质粒构建成功,pPIC9K-pr-39菌株发酵产物检测结果对DH5α大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌效果。[结论]获得了pr-39基因的重组酵母,并用毕赤酵母系统成功地分泌表达了具有明显抗菌活性的抗菌肽pr-39。

关键词：抗菌肽 pr-39 毕赤酵母表达抑菌活性

谷氨酰胺对断奶仔猪抗菌肽pr-39 mRNA的表达调控

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动物营养学报 2009年第4期21卷 567-572页

作者：赵玉蓉王红权贺建华范志勇湖南农业大学动物科技学院长沙410128

本文旨在探讨谷氨酰胺(Gln)对断奶仔猪抗菌肽pr-39 mRNA表达的影响。选取64头胎次相同、28日龄断奶、体重(7.50±0.67)kg的三元杂交仔猪(杜×长×大),随机分为2个组,即基础日粮对照组和1.0%Gln添加组,每组设4个重复,每个重复8头猪(公母... 详细信息

本文旨在探讨谷氨酰胺(Gln)对断奶仔猪抗菌肽pr-39 mRNA表达的影响。选取64头胎次相同、28日龄断奶、体重(7.50±0.67)kg的三元杂交仔猪(杜×长×大),随机分为2个组,即基础日粮对照组和1.0%Gln添加组,每组设4个重复,每个重复8头猪(公母各1/2)。于试验第28天,进行细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的分析。于第30天,采用半定量RT-PCR研究日粮中添加Gln对pr-39 mRNA的影响。试验结果表明:Gln添加显著提高仔猪血清中IL-1β含量(P0.05);显著促使骨髓、空肠黏膜中pr-39 mRNA的表达(Ppr-39 mRNA分别提高50.5%(Ppr-39 mRNA表达上调。

关键词：谷氨酰胺断奶仔猪抗菌肽 pr-39 mRNA 基因表达

黄芪杂多糖对仔猪IL-6和pr-39表达的影响

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中国畜牧兽医 2013年第2期40卷 1-5页

作者：范阔海李娟娟张蓓李宏全山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

通过运用细胞的分离培养技术、MTT法、ELISA检测和实时荧光定量PCR技术,比较不同剂量黄芪杂多糖(AHPS)注射组与空白对照组的仔猪血液内的T淋巴细胞和单核细胞的增殖活性、IL-6含量;骨髓中抗菌肽pr-39基因的表达水平,研究AHPS对仔猪内源... 详细信息

通过运用细胞的分离培养技术、MTT法、ELISA检测和实时荧光定量PCR技术,比较不同剂量黄芪杂多糖(AHPS)注射组与空白对照组的仔猪血液内的T淋巴细胞和单核细胞的增殖活性、IL-6含量;骨髓中抗菌肽pr-39基因的表达水平,研究AHPS对仔猪内源性抗菌肽pr-39的表达调控作用。试验结果表明,AHPS对仔猪血液中的单核细胞和T淋巴细胞有促进作用;IL-6含量在同一时间内呈剂量依赖性增加,随着注射时间的延长逐渐增多;AHPS对pr-39的表达呈显著地上调作用且呈剂量依赖性。根据相关文献和本试验结果推测,黄芪杂多糖可能通过调控IL-6和pr-39的表达提高仔猪的免疫力。

关键词：黄芪杂多糖 T淋巴细胞单核细胞白介素-6 pr-39

日龄对仔猪股骨骨髓组织抗菌肽pr-39 mRNA表达的影响

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2007年第3期33卷 305-308页

作者：赵玉蓉周灿范志勇贺建华湖南农业大学动物科学技术学院湖南长沙410128

为探明日龄对仔猪非特异性免疫形成的影响,分别于仔猪出生当天,3,14,23,28 d,随机屠宰杜长大仔公猪4头,采集股骨骨髓组织.用一优化的RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,半定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽pr-39 mRNA表达的差异.结果表明:... 详细信息

为探明日龄对仔猪非特异性免疫形成的影响,分别于仔猪出生当天,3,14,23,28 d,随机屠宰杜长大仔公猪4头,采集股骨骨髓组织.用一优化的RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,半定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽pr-39 mRNA表达的差异.结果表明:不同日龄间仔猪骨髓组织pr-39 mRNA相对表达量存在明显的差异.出生时最低,吮吸初乳2 d后显著增加,14日龄时较3日龄显著下降,随后随日龄的增加,其表达量呈上升趋势.

关键词：仔猪半定量RT-PCR 抗菌肽 pr-39 基因表达日龄

抗菌肽pr-39真核表达载体的构建及表达检测

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重庆医科大学学报 2009年第12期34卷 1643-1645页

作者：朱勇军翁玄张健文阳安重庆医科大学附属第一医院骨科重庆400016 重庆医科大学医学检验生物化学教研室、临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的:构建富含脯氨酸精氨酸的39位氨基酸抗菌肽(proline-arginine rich 39-amino acid peptide,pr-39)的真核表达载体,并检测它在293T细胞中的表达情况。方法:以含有pr-39核心编码区(Core coding regions,CDS)序列的质粒pBluescriptⅡSK-pr-39为模板,PCR扩增pr-39CDS序列并测序。扩增片段插入真核表达质粒pGC-FU中,构建包含pr-39基因的重组表达质粒pGC-FU-pr-39。阳性克隆用限制性内切酶酶切及测序鉴定后用脂质体2000转染293T细胞,荧光显像观察其转染效率,Western blot检测目的蛋白表达情况。结果:成功扩增出pr-39基因,通过酶切测序鉴定证明成功构建了包含pr-39的真核表达载体pGC-FU-pr-39,转化293T细胞24h后观察到荧光,Western blot检测到目的蛋白。结论:本实验成功构建pr-39真核表达载体,并能在293T细胞中表达pr-39-GFP融合蛋白,这为进一步研究pr-39的作用奠定了基础。

关键词：抗菌肽 pr-39 真核表达载体