检索结果-南通市图书馆

postn调节胎盘干细胞自我更新能力及其对创面愈合的作用

维普期刊数据库博看期刊

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

POSTN调节胎盘干细胞自我更新能力及其对创面愈合的作用

作者：王逸彬中南大学

学位级别：硕士

糖尿病导致的难愈性伤口仍然是一个未解决的难题,给患者带来巨大的精神和经济负担。间充质干细胞具有多向分化潜能,可促进糖尿病创面愈合,但干细胞的自我复制衰老会影响干细胞的治疗效果。本课题组前期研究发现年轻胎盘干细胞(pla MSCs... 详细信息

糖尿病导致的难愈性伤口仍然是一个未解决的难题,给患者带来巨大的精神和经济负担。间充质干细胞具有多向分化潜能,可促进糖尿病创面愈合,但干细胞的自我复制衰老会影响干细胞的治疗效果。本课题组前期研究发现年轻胎盘干细胞(pla MSCs)与衰老pla MSCs的差异表达基因中,postn在衰老pla MSCs中表达显著下调,推测postn可能与pla MSCs的自我更新能力有关。目的:研究postn基因对于pla MSCs自我更新能力的影响,以及过表达postn的pla MSCs对于创面愈合的作用。方法:首先检测了衰老以及未衰老的pla MSCs中postn的表达,然后敲低或者过表达pla MSCs的postn基因,通过衰老相关β-半乳糖苷酶染色、western blot检测p16和p21的表达,探明postn是否调控pla MSCs的衰老,通过MTT法检测第1、3、5、7、9天的细胞活性了解细胞增殖能力,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过三系分化实验以及RT-qPCR检测干性标记物NANOG、OCT4的表达,研究postn是否影响pla MSCs的分化和干性。动物实验中,建立糖尿病大鼠创面模型,创面局部注射过表达postn的pla MSCs(postnMSCs)或转染阴性质粒的pla MSCs(veh MSCs)或未做处理的pla MSCs组(pla MSCs)干细胞,以注射PBS组为空白对照组。观察创面愈合情况,HE染色检测创面组织中上皮细胞迁移程度,Masson三色染色检测胶原沉积、Real-time PCR检测Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维比值,在活体水平确定postnMSCs对创面愈合的影响。结果:我们发现在衰老的pla MSC中,postn表达下调,利用慢病毒感染敲低postn导致pla MSCs加速衰老,表现为β-半乳糖苷酶活性增加,p16和p21表达增加,以及敲低组pla MSCs在第5、7、9天的细胞活性明显弱于其对照组,敲低postn的pla MSCs还表现出S期细胞比例减少、G2/M期细胞比例增多,Akt表达减低,同时伴随着成骨、成软骨分化能力及干性受损。而过表达postn能缓解pla MSCs的衰老,在增殖实验的第7天细胞活性明显强于对照组,细胞周期实验中S期细胞比例升高、G2/M期细胞比例降低,Akt表达升高,以及提高pla MSCs成骨、成软骨分化能力和干性。在动物实验中,postnMSCs表现出比pla MSCs和veh MSCs更强的促创面愈合能力,这主要是通过促进创面收缩实现的。但postnMSCs并没有表现出更强的促再上皮化和胶原沉积的作用,并且Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维比值与另外2个治疗组没有统计学差异。结论:postn通过AKT通路调控pla MSCs的自我更新能力,且postn的表达与pla MSCs的自我更新能力呈正相关。同时,过表达postn通过提高pla MSCs促创面收缩从而提高pla MSCs对于糖尿病慢性创面的促进愈合作用。本研究为干细胞应用于糖尿病导致的慢性难愈性创面的治疗提供了一个新的方案。图32幅,表1个,参考文献60篇

关键词： postn 人胎盘干细胞自我更新衰老糖尿病创面创面修复

postn通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌增殖和侵袭迁移

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

POSTN通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌增殖和侵袭迁移

作者：张旺中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

背景胃癌发病率位居肿瘤第五位,死亡率排名第三,我国胃癌发病人数逐渐上升,预计我国2020年将新增胃癌患者约34.6万,社会及家庭负担很大。目前手术为治疗胃癌唯一有效方法,放化疗、生物治疗及中草药治疗等其他辅助治疗效果有限,缺乏特异... 详细信息

背景胃癌发病率位居肿瘤第五位,死亡率排名第三,我国胃癌发病人数逐渐上升,预计我国2020年将新增胃癌患者约34.6万,社会及家庭负担很大。目前手术为治疗胃癌唯一有效方法,放化疗、生物治疗及中草药治疗等其他辅助治疗效果有限,缺乏特异性。针对胃癌深层次机制探讨,寻求针对性的个体化诊断和治疗具有现实意义。我们团队之前在研究应激对胃癌细胞干性维持作用时,发现胃癌细胞中postn也能被应激刺激而升高,推测postn可能在胃癌进展中发挥作用,可能是胃癌诊治潜在靶点。目的检测postn在胃癌中的表达、分布及定位,探讨postn与胃癌临床病理之间关联,研究postn蛋白对胃癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学功能影响,并探寻postn影响胃癌进展的分子机制。方法1、组织免疫荧光初步分析3对胃癌及配对癌旁胃组织中postn的分布及定位,胃癌组织芯片免疫组化进一步验证postn在胃癌中表达情况,同时结合TCGA和GEPIA公共数据库,分析postn表达与胃癌患者临床病理特征及生存情况关系。2、运用si RNA瞬时干扰、慢病毒包装稳定敲低或过表达技术,改变胃癌HGC-27细胞中postn表达,利用平板克隆、细胞划痕、Transwell和CCK-8细胞增殖实验,检测postn对HGC-27细胞增殖和侵袭迁移能力等表型影响,同时利用Western blot和细胞免疫荧光检测HGC-27细胞内EMT相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路关键性蛋白伴随postn变化的情况,并通过引入Wnt通路抑制剂PNU-74654,进一步验证postn对Wnt信号通路的调控作用。3、利用HGC-27细胞构建裸鼠皮下成瘤模型和转移模型,在体内验证postn对HGC-27细胞增殖和侵袭的能力影响。结果1、组织免疫荧光显示postn主要分布于胃组织间质,尤其在胃腺周围呈线性分布,在部分癌细胞中也有表达;组织芯片免疫组化(Ppostn总表达水平显著高于正常胃组织,并且胃癌组织上皮细胞中postn阳性比例也明显高于正常胃组织(P=0.028)。胃癌组织中postn表达和胃癌TNM分期未见统计学差异(P=0.929),GEPIA数据库也得出类似结论(P=0.1)。COX多个回归方程分析显示胃癌postn高表达组死亡风险是低表达组1.36倍(95%CI:0.78-2.40,p=0.2789),胃癌上皮细胞postn阳性组死亡风险是阴性组的2.48倍(95%CI:1.44-4.28,p=0.0011)。生存曲线分析显示在低分化胃癌中,胃癌上皮细胞内postn阳性组的预后明显差于阴性组(P=0.003)。2、postn被敲低后,HGC-27细胞克隆形成、增殖能力和侵袭迁移能力均下降,而过表达postn后出现促进表型。HGC-27被敲低postn后,细胞出现上皮性细胞形态改变,上皮性标志物E-cadherin增多,间充质细胞标志物Vimentin减少,EMT下游转录因子snail也减少,同时出现β-catenin入核减少,并且Wnt/β-catenin信号通路关键性蛋白p-GSK-3β也减少。当过表达postn后,以上蛋白在HGC-27细胞中均出现相反趋势,并且加入PNU-74654后,这种趋势能被部分逆转。3、动物实验显示,敲低postn后,HGC-27细胞裸鼠皮下成瘤体积明显小于未敲低组(ppostn未敲低组部分裸鼠出现了远处转移。结论1、postn在胃癌中表达高于癌旁组织;上皮细胞来源postn可显著增加胃癌患者的死亡风险,尤其与低分化胃癌患者预后显著负相关。2、postn可以激活胃癌细胞Wnt/β-catenin信号通路,引起上皮间充质转化,促进胃癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。

关键词： postn 胃癌侵袭迁移 Wnt

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

postn在胃癌中表达及相关临床意义研究

POSTN在胃癌中表达及相关临床意义研究

作者：陆枫苏州大学

学位级别：硕士

目的:通过比较骨膜蛋白periostin(postn)在正常的胃黏膜细胞中与胃癌细胞、胃癌组织以及癌旁组织中的差异表达情况,并且结合TCGA或GEO数据库中postn的表达水平与胃癌患者临床病理特征及预后生存的相关性来探研究postn在胃癌中的作用及... 详细信息

目的:通过比较骨膜蛋白periostin(postn)在正常的胃黏膜细胞中与胃癌细胞、胃癌组织以及癌旁组织中的差异表达情况,并且结合TCGA或GEO数据库中postn的表达水平与胃癌患者临床病理特征及预后生存的相关性来探研究postn在胃癌中的作用及相关临床意义,为早期胃癌的诊断、临床病理分型以及评估患者预后提供有价值的实验依据。方法:首先采用Western-Blot检测胃黏膜细胞以及胃癌细胞中postn的表达水平并进行结果统计分析,其次收集50例胃癌患者的肿瘤标本和其对应的癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)及免疫组化法对上述组织中的postn的表达水平进行检测,然后得到postn在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况,并分析其在胃黏膜癌变过程中表达的意义。最后使用生物信息学软件通过基因表达综合数据库(The Caner Genome Atlas TCGA和Gene Expression Omnibus)来分析postn的表达水平与胃癌患者的临床病理特征及其预后生存的相关性,并探求postn在胃癌中的作用通路及相关的功能机制。结果:*** Blot法结果表明:postn在3种胃癌细胞株中的蛋白表达量都高于正常胃黏膜细胞,在MGC-803胃癌细胞系中表达量最高,差异具有统计学意义(Ppostn mRNA在胃癌组织中的表达水平高于邻近的癌旁组织,上述结果具有统计学意义(Ppostn蛋白的阳性表达率(62%)高于癌旁组织(32%),结果具有统计学意义(Ppostn蛋白的表达与病理TNM分期、临床分期存在相关性(P值均小于0.05),与患者的性别、年龄无明显相关性(P值均大于0.05),postn的表达与患者预后密切相关。结论:postn mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织。胃癌患者肿瘤组织中的postn蛋白的表达情况与病理TNM分期密切相关。肿瘤组织中postn蛋白阳性表达的胃癌患者比阴性表达的患者预后更差。

关键词：胃癌 postn western blot 免疫组织化学染色生物信息学

postn调控MSC治疗aGvHD的实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

POSTN调控MSC治疗aGvHD的实验研究

作者：于丰实军事科学院

学位级别：硕士

目的:探讨postn调控人脐带来源间充质干细胞免疫调节作用及治疗aGvHD的疗效与机制。内容:1.构建sh-postn慢病毒载体转染hUC-MSC;2.体外实验探讨postn调控hUC-MSC一般生物学特性和免疫调节作用;3.利用小鼠aGvHD模型探究postn调控hUC-MSC... 详细信息

目的:探讨postn调控人脐带来源间充质干细胞免疫调节作用及治疗aGvHD的疗效与机制。内容:1.构建sh-postn慢病毒载体转染hUC-MSC;2.体外实验探讨postn调控hUC-MSC一般生物学特性和免疫调节作用;3.利用小鼠aGvHD模型探究postn调控hUC-MSC治疗aGvHD的疗效与机制。方法:1.体外培养hUC-MSC,同时构建sh-postn慢病毒载体和sh-NC对照慢病毒载体感染293T细胞。倒置荧光显微镜、流式细胞术检测慢病毒感染效率;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测感染病毒细胞的postn表达水平。筛选稳定敲低postn(sh-postn)慢病毒载体和对照病毒载体(sh-NC),感染hUC-MSC并扩增培养,采用吉姆萨染色、流式细胞术检测比较hUC-MSC、sh-NC-MSC和sh-postn-MSC的形态与细胞表型。2.体外培养的sh-postn-MSC和sh-NC-MSC进行成脂、成骨诱导分化,油红O染色、碱性磷酸酶染色法检测脂滴数和碱性磷酸酶的表达,q-PCR检测成脂和成骨分化过程中关键转录因子PPARγ、ADI、ALP、OPN的表达水平;流式细胞术检测两组细胞的细胞周期,CCK-8法检测细胞的增殖能力。3.体外将小鼠T淋巴细胞与hUC-MSC、sh-NC-MSC、sh-postn-MSC共培养,CFSE染色法检测T淋巴细胞的增殖能力,q-PCR检测共培养后T淋巴细胞中TNF-α、IFN-γ、Foxp3、IL-2、IL-17等炎症因子和PARP-1、CASP3(Caspase-3)、AIFM1等凋亡相关基因的表达;Anniex V/PI染色法检测共培养后T淋巴细胞发生凋亡情况;CMTMR染色法比较各组细胞对T淋巴细胞的粘附能力;进一步采用q-PCR法检测各组细胞的免疫相关基因CCL2、CCL5、CXCL6、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、IDO的表达。4.利用Coγ照射建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGvHD)模型,并于建模48 h后,通过尾静脉分别输注hUC-MSC、sh-NC-MSC、sh-postn-MSC和PBS进行治疗。通过观察记录治疗后小鼠的体重、生存率和临床表现评分评估一般生存状态;HE染色比较各组小鼠的肝、肺、小肠及肛周皮肤病理变化和炎性细胞侵润;q-PCR法检测各组小鼠脾脏TGF-β、IFN-γ、IL-6、Foxp3等炎症因子表达情况。结果:1.成功构建sh-postn和对照sh-NC慢病毒载体,转染293T细胞后,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光细胞,流式细胞术检测绿色阳性率>90%;进一步将sh-postn或sh-NC的慢病毒转染hUC-MSC,荧光显微镜结合流式细胞术分析转染效率>90%。q-PCR检测postn敲低效率,结果显示,转染细胞postn的表达较对照细胞显著降低,Western Blot检测结果证实postn的蛋白表达亦显著降低,以上结果说明我们成功获得postn敲低的hUC-MSC(sh-postn-MSC),同时获得对照组细胞sh-NC-MSC。2.为探究postn是否影响hUC-MSC的一般生物学特性,我们体外培养sh-postn-MSC和sh-NC-MSC,从形态、细胞表型和诱导分化三个方面进行鉴定,结果表明,培养的细胞呈纤维样、长梭形、旋涡状生长;流式细胞术检测细胞表型,结果显示,细胞高表达间质细胞表面标志CD73、CD90、CD105,低表达或不表达单核细胞表面标志CD14和造血细胞表面标志CD34、CD45。体外成脂肪和成骨诱导分化结果显示,油红O染色可见细胞出现大量的红色脂滴,碱性磷酸酶染色可见细胞呈蓝紫色;q-PCR检测成脂关键转录因子PPARγ、ADI以及成骨分化关键转录因子OPN和ALP的表达均显著上调,证实培养的各组MSC均具有成脂和成骨分化的能力,但sh-postn-MSC的成骨分化能力显著下调,提示postn影响MSC的成骨分化。进一步,流式细胞术检测培养细胞的细胞周期,结果表明,sh-postn-MSC的G/G期比例相对下调;CCK-8检测细胞的增殖能力亦较对照组显著减弱(Ppostn-MSC和sh-NC-MSC具有MSC的一般生物学特性,但postn影响hUC-MSC的成骨分化和细胞增殖能力。3.为探究postn是否影响MSC的免疫调节作用,我们将sh-postn-MSC和sh-NC-MSC与小鼠的T细胞共培养,流式细胞术检测T细胞的增殖能力,结果显示,sh-postn-MSC组T细胞增殖能力(65.1±7.36%)较sh-NC-MSC组(49.6±4.12%)和hUC-MSC组(46.7±6.14%)显著升高(Ppostn-MSC抑制T细胞增殖的能力

关键词：人脐带间充质干细胞 postn 移植物抗宿主病免疫抑制

postn、OPC及亚低温治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

POSTN、OPC及亚低温治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

作者：马思敏复旦大学

学位级别：硕士

[目的]研究postn对新生大鼠缺氧缺血（hypoxic-ischemic, HI）后神经干细胞增殖分化的影响,为临床新生儿脑损伤的治疗提供新的思路。 [方法]通过7日龄新生大鼠左侧颈总动脉结扎离断后8%氧气缺氧2h制备动物模型,随机分为HI组和假手术... 详细信息

[目的]研究postn对新生大鼠缺氧缺血（hypoxic-ischemic, HI）后神经干细胞增殖分化的影响,为临床新生儿脑损伤的治疗提供新的思路。 [方法]通过7日龄新生大鼠左侧颈总动脉结扎离断后8%氧气缺氧2h制备动物模型,随机分为HI组和假手术组。干预组进行侧脑室注射postn蛋白干预治疗,非干预组注射PBS。采用BrdU标记结合免疫荧光化学方法观察各组大鼠不同时间点脑室下区（subventricular zone, SVZ）和海马齿状回（dentate gyrus,DG）神经干细胞的增殖及其向神经元、星形胶质细胞分化情况。采用Morris水迷宫实验方法观察各组大鼠学习记忆功能变化。 [结果]postn干预治疗能够显著增加SVZ和海马DG新生细胞（BrdU+）数量,其中新生神经干细胞（BrdU+/Nestin+）在术后7d达高峰,而新生神经元（BrdU+/Map-2+）和星形胶质细胞（BrdU+/GFAP+）在14d达高峰,差异有统计学意义。Morris水迷宫实验结果显示,postn干预治疗能够降低大鼠的逃避潜伏期和游泳距离,增加站台穿越次数和目标象限停留时间比例,差异有统计学意义。 [结论]postn干预可促进新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的神经干细胞增殖和分化,改善其学习记忆功能,有助于脑损伤后的神经修复。 [目的]通过体外培养获得的Olig2+-GFP+-OPC移植入新生大鼠缺氧缺血性（hypoxia-ischemia, HI）脑损伤模型,观察Olig2+-GFP+-OPC定向分化成熟为少突胶质细胞的能力和植入细胞的存活情况,探讨外源性植入神经前体细胞OPC治疗早产儿脑室周白质软化（periventricular leukomalacia, PVL）的可行性。 [方法]Olig2+-GFP+-mES细胞通过拟胚体（embryonic body, EB）介导的神经诱导法,即综合全反式维甲酸（retinoic acid, RA）诱导法和五步法使Olig2+-GFP+-mES定向分化为OPC。采用免疫细胞化学染色,利用倒置相差显微镜和荧光显微镜来观察OPC的分化成熟能力。3日龄新生大鼠左侧颈总动脉结扎离断后37℃条件下6%氧气缺氧2.5h制备动物模型,通过HE（haematoxylin-eosin）染色方法评估模型情况。通过免疫荧光染色方法观察侧脑室注射植入的Olig2+-GFP+-OPC存活情况。 [结果]Olig2+-GFP+-mES在胚胎干细胞培养基中形成EB,在含有RA（0.5μM）和SHH（100ng/ml）神经分化培养基中,逐渐发育为神经前体细胞球。在EB4d开始出现Olig2+-GFP+-阳性细胞,在EB12d时表达出现高峰。Olig2+-GFP+-阳性细胞具有体外条件下分化为OPC,再定向分化为成熟少突胶质细胞并具备成髓鞘的能力。HI组脑室下区神经细胞出现变性、坏死,细胞层次紊乱、排列松散,部分细胞出现核固缩、核溶解,胞浆深染,结构不清。对照组则无明显病理变化。在侧脑室周边及附近脑区有GFP的表达,证实植入OPC成功,并向周围迁移。 [结论]体外EB介导的神经诱导法能够高效诱导产生Olig2+-GFP+-OPC,并具有分化为成熟少突胶质细胞且有成髓鞘能力。在HI脑损伤模型中侧脑室植入Olig2+-GFP+-OPC细胞能够存活。 [目的]研究缺氧缺血后亚低温对新生大鼠海马部位细胞的存活及星形胶质细胞活化增殖的影响,探讨亚低温对缺氧缺血脑损伤保护作用的机制。 [方法]3日龄新生大鼠海马脑片,培养至第4天进行氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation, OGD）制备模型,分为亚低温组（33℃,24h）和常温组（37℃）;对照组不进行OGD处理,37℃培养7d。采用碘化丙啶（propidium iodide, PI）和免疫荧光染色观察海马脑片的细胞存活和星形胶质细胞的活化增殖。动物实验：7日龄新生大鼠采用左侧颈总动脉结扎离断并在8%02+92%N2中缺氧2h,制备缺氧缺血模型,分为手术常温组（肛温36-37℃,24h）和手术亚低温组（肛温32-33℃,24h）。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,也不缺氧,分为假手术常温组和假手术亚低温组。各组于术后3d和7d处死取材,采用DAPI （4’-6-diamidino-2-phenylindole）和免疫组织化学方法检测海马组织细胞存活和星形胶质细胞的活化增殖。 [结果]体外和体内实验结果都表明缺氧缺血后3d新生大鼠海马组织中存活的细胞常温组较亚低温组少。海马脑片培养GFAP （glial fibrillary acidic protein, GFAP）染色显示,亚低温组GFAP阳性细胞数较

关键词： postn 神经干细胞增殖分化脑室下区海马 OPC 缺氧缺血移植脑亚低温星形胶质细胞活化

软骨细胞沉默postn基因通过TGF-β/SMAD3信号通路改善软骨退变

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

软骨细胞沉默Postn基因通过TGF-β/SMAD3信号通路改善软骨退变

作者：欧阳家耀南方医科大学

学位级别：硕士

一、前言骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种老年中最常见的慢性关节疾病,主要累及手、髋、膝、足、脊柱等重要关节部位,主要表现为关节僵硬、活动受限、疼痛等。引起OA的病因非常复杂,主要包括遗传、性别、创伤、年龄、肥胖、饮食习惯... 详细信息

一、前言骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种老年中最常见的慢性关节疾病,主要累及手、髋、膝、足、脊柱等重要关节部位,主要表现为关节僵硬、活动受限、疼痛等。引起OA的病因非常复杂,主要包括遗传、性别、创伤、年龄、肥胖、饮食习惯等。OA是累及软骨、软骨下骨及滑膜甚至整个关节的疾病,其病理改变表现为关节软骨退变、软骨下骨骨重塑和血管形成、骨赘形成、滑膜炎症等。目前认为关节软骨层可能是最先发生病理改变的地方,其可能受滑膜和软骨下骨产生的炎症因子刺激后功能发生紊乱。目前尚缺乏治愈OA的手段,现在的治疗方案主要为减轻疼痛、改善关节活动度和减少关节功能受损。在OA终末期病人需要负担昂贵的费用进行手术治疗,加上中国人口老龄化的压力,因而OA已经为社会带来沉重的负担。随着分子生物学、细胞生物学、临床医学等学科的发展和交叉渗透,基因靶向治疗OA已成为研究的热点。基因治疗主要是通过基因测序或基因芯片等方法发现某基因在OA的发病进程中异常表达,然后将外源正常基因导入靶细胞,改善靶细胞的基因缺陷或过表达状况,或使靶细胞获得新的生物功能从而实现更加精准的治疗OA的目标。本课题组在早前研究中发现postn基因在大鼠软骨下骨中表达上调。后来,Sittisak Honsawek发现,postn蛋白在OA病人的血清及关节滑液中同样是高表达的。近期研究表明,postn被认为是促进肝硬变的重要因素,并通过促进SMAD2/3通路的磷酸化;而在缺氧情况下,postn能抑制SMAD2/3通路的磷酸化。这提示postn蛋白可能在参与调控SMAD2/3通路中起着重要的作用。而TGF-β/SMAD信号通路在调控软骨细胞的增殖、分化、凋亡等代谢活动中起着重要作用。SMAD是TGF-β下游的靶蛋白,在软骨发育中,SMAD1/5/8通路促进软骨的成熟,SMAD2/3通路则维持软骨的稳态。但在OA发生时,SMAD1/5/8通路促进软骨退变,而异常的SMAD2/3通路同时能促进软骨退变。同时有研究表明TGF-β能上调OA软骨细胞中Mmp13的表达;TGF-β/SMAD3下调miR-140从而促进Mmp13和Adamts5的表达;并且高表达的SMAD3可促进Mmp13的表达。同时,有学者在上皮鳞癌细胞、乳腺癌细胞、牙周韧带和成骨细胞等其他组织亦发现SMAD3促进Mmp13分泌。因此,TGF-β/SMAD信号通路的活动对维持软骨细胞的正常代谢、结构稳定起着非常重要的作用。二、目的本实验通过检测postn在OA患者与DMM小鼠关节软骨中的表达情况,并在ATDC5软骨前体细胞中检测postn在软骨退变过程中的作用;随后构建沉默postn基因的慢病毒,并通过对DMM小鼠进行关节腔内注射慢病毒,检测软骨细胞上沉默postn对OA形态结构学及生物功能学的变化情况;最后,通过体外实验检测postn是否通过介导TGF-β/SMAD3信号通路引起软骨退变进而加重OA。本研究旨在通过研究postn对TGF-β/SMAD3信号通路和软骨退变的作用,为治疗OA提供一个新的视角和理论基础。三、材料和方法1、收集临床上OA患者和因车祸需进行截肢的患者的膝关节软骨各3例,通过RT-qPCR检测postn在OA与对照组关节软骨面中转录水平的表达情况;利用C57/BL6小鼠构建DMM骨关节炎模型,通过western blot观察postn在OA发生后1、2、4、8周不同时间点的表达情况,并通过免疫组化观察postn在关节软骨面的定位及表达情况;2、利用ATDC5软骨前体细胞株进行体外实验,通过IL-1β刺激细胞株发生OA样改变,再利用siRNA沉默postn基因,观察沉默postn后对OA相关因子的表达情况;3、通过对DMM小鼠进行关节腔内注射慢病毒介导软骨细胞上postn基因的沉默,检测其对OA形态结构学及生物功能学的变化情况;4、观察不同细胞因子对软骨细胞postn基因的表达情况;并通过TGF-β 1细胞因子刺激ATDC5细胞,观察postn在软骨细胞中是否受其调控并呈时间和浓度依赖性,并观察沉默postn基因对TGF-β 1诱导的Co110a1和Mmp13在转录水平的表达情况;5、通过postn蛋白刺激及siRNA沉默postn基因两种方法,观察SMAD3信号通路的表达水平以及软骨细胞基质酶MMP13的变化情况。6、通过SIS3通路抑制剂抑制SMAD3的磷酸化,观察postn蛋白是否通过SMAD3引起MMP13的表达。7、通过postn蛋白刺激软骨细胞观察SMAD3信号通路表面受体的活化程度。四、结果1、postn在人及小鼠骨关节炎关节软骨中表达明显升高;2、体外实验通过沉默postn基因后,Mmp13、Co110a、Runx2、Vegf的表达均不同程度的下降,而Co12表达明显升高,这提示沉默Pos

关键词： postn 骨关节炎关节软骨慢病毒 TGF-β SMAD

S100A2、postn、CEA联合检测在恶性胸腔积液中的诊断价值

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

S100A2、POSTN、CEA联合检测在恶性胸腔积液中的诊断价值

作者：于红燕河北北方学院

学位级别：硕士

目的:通过检测患者胸腔积液中S100A2、骨膜蛋白(Periostin,postn)和癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)的浓度,探讨S100A2、postn和CEA联合检测对恶性胸腔积液(Malignant pleural effusions,MPE)的诊断价值。方法:选取在河北北方学院附属第一医院呼吸与危重症医学科2021年12月1日至2022年12月31日期间收治的100例患者为研究对象,其中恶性胸腔积液患者55例,包括腺癌30例,鳞癌15例,小细胞肺癌10例,良性胸腔积液患者45例,包括炎性胸腔积液10例,结核性胸腔积液35例,均行胸腔穿刺置管术引流积液。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定胸腔积液中S100A2、postn和CEA的水平,用统计软件SPSS26.0和Graph Pad Prism 8.0进行数据分析,Ppostn和CEA的表达水平显著高于良性胸腔积液,差异具有统计学意义(Ppostn的曲线下面积为0.674(95%CI0.569-0.779),最佳临界值39.94ng/m1时,postn诊断的敏感性为72.7%,特异性为55.6%;ROC曲线显示CEA的曲线下面积为0.776(95%CI0.685-0.867),最佳临界值11.68ng/m1时,CEA诊断的敏感性为56.4%,特异性为97.8%;3.S100A2、postn联合检测的敏感性为55.6%,特异性为76.4%,ROC曲线下面积为0.673(95%CI,0.568-0.778);S100A2、CEA联合检测的敏感性为73.3%,特异性为96.4%,ROC曲线下面积为0.866(95%CI,0.793-0.940);postn、CEA联合检测的敏感性为60.0%,特异性为96.4%,ROC曲线下面积为0.837(95%CI,0.760-0.914);S100A2、postn和CEA联合检测的敏感性为73.3%,特异性为94.6%,ROC曲线下面积为0.863(95%CI,0.790-0.937)。结论:S100A2、postn和CEA在MPE患者中的表达含量明显高于在BPE患者中的表达含量;S100A2、postn检测对MPE的诊断具有一定价值;S100A2和CEA联合检测具有较高的敏感性及特异性。

关键词： S100A2 postn CEA 胸腔积液诊断

婴幼儿喘息发作外周血postn等炎症相关介质水平的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

婴幼儿喘息发作外周血POSTN等炎症相关介质水平的研究

作者：张帆南昌大学

学位级别：硕士

目的:通过分析婴幼儿喘息患儿急性发作期外周血炎症相关介质水平的变化,进一步探讨婴幼儿喘息急性发作的可能发病机制,探寻早期预测哮喘发生的血清标志物,为婴幼儿喘息的防治提供更广阔的思路和前景。方法:选取2021年10月～2022年10月... 详细信息

目的:通过分析婴幼儿喘息患儿急性发作期外周血炎症相关介质水平的变化,进一步探讨婴幼儿喘息急性发作的可能发病机制,探寻早期预测哮喘发生的血清标志物,为婴幼儿喘息的防治提供更广阔的思路和前景。方法:选取2021年10月～2022年10月在南昌大学第一附属医院住院的喘息急性发作期婴幼儿66例为喘息组(男47例,女19例,平均年龄22.3±9.6个月),32例无喘息的下呼吸道感染急性期婴幼儿为非喘息组(男21例,女11例,平均年龄21.8±10.4个月),另选取于本院门诊体检的健康婴幼儿32例作为健康对照组(男22例,女10例,平均年龄21.9±9.3个月)。喘息组患儿根据6岁以下儿童哮喘诊断标准模型评分总分≥4分的儿童为哮喘组35例,3天)30例;根据本次喘息发作严重程度分为重症组20例和轻症组46例;根据病原学检测结果有1种或多种阳性者纳入病原学阳性组29例,均为阴性者纳入病原学阴性组37例;根据本次病程中腋温是否超过37℃分为发热组43例和非发热组23例。检测并比较各组外周血骨膜蛋白(postn)、白介素(IL)-4、IL-13、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(INF)-γ水平,同时收集本次住院期的嗜酸性粒细胞(EOS)计数及48例血清总免疫球蛋白E(TIgE)测定值进行相关性分析。结果:1.喘息组、非喘息组和健康对照组儿童外周血各炎症因子水平的比较postn、IL-4、IL-13水平喘息组均高于非喘息组及健康对照组,差异有显著统计学意义(P0.05);喘息组TNF-α水平高于健康对照组,非喘息组TNF-α水平也高于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。2.不同分组的婴幼儿喘息发作外周血各炎症因子水平比较外周血postn、IL-4、IL-13、TNF-α水平在哮喘组与非哮喘组、本次喘息发病早期组与晚期组、病原学阳性组与阴性组、发热组与非发热组比较差异均无统计学意义(P>0.05);但INF-γ水平早期组低于晚期组,差异有统计学意义(Ppostn、IL-13水平重症组高于轻症组,差异有统计学意义(Ppostn水平与IL-4、IL-13水平呈显著正相关(Ppostn、IL-4及IL-13水平与INF-γ水平均呈显著负相关(Ppostn、IL-4、IL-13及INF-γ水平均无相关性(P>0.05)。喘息组外周血postn、IL-4、IL-13水平与EOS计数、TIgE水平呈显著正相关(P0.05)。结论:1.婴幼儿喘息发作存在多种细胞因子紊乱,表现为postn、TNF-α及Th2高表达;postn、IL-4、IL-13、INF-γ可能与EOS计数、TIgE通过错综复杂的机制及相互作用共同参与了婴幼儿喘息的发病过程。2.婴幼儿喘息发作存在气道炎症,与病情严重程度有一定的关系,但与是否诊断婴幼儿哮喘、病原学检测是否阳性、是否发热无关;INF-γ水平可能与同一次喘息发作持续时间有一定关系。***-α在儿童下呼吸道感染的发病过程中可能起了一定作用。

关键词：婴幼儿喘息炎性因子 postn 总IgE

重组postn蛋白调控TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝早闭的实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

重组POSTN蛋白调控TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝早闭的实验研究

作者：白珊珊上海交通大学

学位级别：硕士

Saethre-Chotzen综合征作为最常见的综合征型颅缝早闭之一,目前仍以手术治疗方法为主,但同时伴随着高风险,并发症多,容易复发等问题,非手术治疗亟待探索和解决,本研究前期发现postn蛋白在颅缝早闭患者的颅缝组织中表达减少,提示其可能... 详细信息

Saethre-Chotzen综合征作为最常见的综合征型颅缝早闭之一,目前仍以手术治疗方法为主,但同时伴随着高风险,并发症多,容易复发等问题,非手术治疗亟待探索和解决,本研究前期发现postn蛋白在颅缝早闭患者的颅缝组织中表达减少,提示其可能在颅缝早闭的发病机制和治疗中有重要作用。目的:本研究选取不同浓度重组postn蛋白处理TWIST1+/-小鼠(Saethre-Chotzen综合征的动物模型)冠状缝颅缝细胞,在体外观察其对细胞增殖、迁移以及成骨分化能力的影响,并在体内用重组postn蛋白对TWIST1+/-小鼠冠状缝早闭进行治疗,观察其对颅缝早闭的改善作用。方法:体外分离培养TWISTl+/-小鼠冠状缝颅缝细胞后,用Oμg/L,50μg/L,l00lμg/L,200μg/L的重组postn蛋白处理细胞,CCK-8检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验和Transwell小室观察细胞迁移能力,茜素红染色,RT-qPCR和Western Blot检测细胞成骨诱导后的成骨分化能力,同时,体外用重组postn蛋白治疗TWIST1+/-小鼠后,Micro-CT观察小鼠冠状缝闭合情况,并计算骨体积分数,HE染色观察颅缝两侧成骨前缘的融合情况。结果:CCK-8结果表明postn蛋白对细胞增殖能力的抑制呈现时间和浓度依赖性,并且在200μg/L时最明显。细胞划痕实验和Transwell小室检测发现postn可抑制TWISTl+/-小鼠冠状缝颅缝细胞的迁移能力,但50μg/L,l00μg/L,200μg/L组之间的抑制效果没有统计学差异。茜素红染色,RT-qPCR和Western Blot显示细胞的成骨分化能力也受到抑制,在浓度为200μg/L的时候最为明显。Micro-CT结果发现postn治疗后TWIST1+/-小鼠冠状缝未完全闭合,和未治疗小鼠相比,骨体积分数也下降,HE染色显示成骨前缘没有完全融合。结论:体外结果显示,重组postn蛋白可抑制细胞增殖、迁移和成骨分化能力,体内结果表明重组postn蛋白可改善TWIST 1+/-小鼠冠状缝的颅缝早闭。

关键词：颅缝早闭颅颌面成骨分化 postn TWIST1