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甜樱桃茎尖培养及pnrsv的RT-PCR检测

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园艺学报 2003年第1期30卷 87-89页

作者：代红艳张志宏吴禄平侯义龙吕德国沈阳农业大学园艺学院沈阳110161

研究了茎尖大小、接种方式、培养基成分、试材基因型对甜樱桃品种茎尖培养的影响。 1年生成熟枝条上茎尖成苗率为 8.3%～ 2 3.7% ,嫩梢上的茎尖成苗率为 2 7.3%～ 37.5 %。利用RT PCR技术对部分甜樱桃试管苗进行了早期病毒鉴定 ,筛选出... 详细信息

研究了茎尖大小、接种方式、培养基成分、试材基因型对甜樱桃品种茎尖培养的影响。 1年生成熟枝条上茎尖成苗率为 8.3%～ 2 3.7% ,嫩梢上的茎尖成苗率为 2 7.3%～ 37.5 %。利用RT PCR技术对部分甜樱桃试管苗进行了早期病毒鉴定 ,筛选出一些不带李坏死环斑病毒 (pnrsv)的甜樱桃试管苗 ,并证明甜樱桃试管苗微茎尖培养不能有效脱除pnrsv。

关键词： pnrsv RT-PCR检测甜樱桃茎培养李坏死环斑病毒组织培养试管苗

采用RT-PCR技术检测甜樱桃“红灯”上的pnrsv

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大连大学学报 2006年第4期27卷 59-60页

作者：侯义龙张立娟于亚军于大永大连大学生物工程学院辽宁大连116622

[目的]调查大连市特色水果品种甜樱桃“红灯”的田间植株携带pnrsv的情况．[方法]利用作者已建立的pnrsv RT-PCR检测体系．[结果]被检植株pnrsv的感染率达100％,但程度不同．[结论]对于其中感染pnrsv较轻的植株可以作为今后培育无pnrsv... 详细信息

[目的]调查大连市特色水果品种甜樱桃“红灯”的田间植株携带pnrsv的情况．[方法]利用作者已建立的pnrsv RT-PCR检测体系．[结果]被检植株pnrsv的感染率达100％,但程度不同．[结论]对于其中感染pnrsv较轻的植株可以作为今后培育无pnrsv苗木的原材料．

关键词：逆转录-聚合酶链式反应 pnrsv 检测

李属坏死环斑病毒(pnrsv)新疆巴旦木分离株运动蛋白基因(MP)克隆与序列分析

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李属坏死环斑病毒(PNRSV)新疆巴旦木分离株运动蛋白基因(MP)克隆...

桃树李坏死环斑病毒的RT-PCR检测方法研究

中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会

作者：韩剑罗明殷智婷周国辉张祥林新疆农业大学农学院新疆自治区高校农林有害生物监测与安全防控重点实验室华南农业大学资源与环境学院新疆出入境检疫检验局

李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,pnrsv)属雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus),是我国二类进境检疫性有害生物。该病毒主要为害李属和蔷薇属植物,主要是一些核果类果树和花卉,为果树和花卉生... 详细信息

李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,pnrsv)属雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus),是我国二类进境检疫性有害生物。该病毒主要为害李属和蔷薇属植物,主要是一些核果类果树和花卉,为果树和花卉生产中的毁灭性病害。目前,pnrsv已相继在我国陕西、辽宁、四川、北京、浙江等地相继发现并报道。2012年笔者对新疆阿克苏、喀什地区的巴旦木种植地调查、采样,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)、PT-PCR检测,确定了pnrsv为侵染新疆巴旦木果树的病原病毒。对pnrsv新疆巴旦木分离株运动蛋白基因(MP)进行RT-PCR扩增、克隆、测序,获得新疆巴旦木pnrsv分离株MP基因片段分别为259bp、258bp、254bp、260bp,序列号分别为.JQ247433、JQ24734、JQ247435、.JQ247436。核苷酸序列同源性的分析表明,该分离株与已报道的分离物的同源性为79.2%～91.7%,其中,与美国分离物DA9相似性最高;其氨基酸序列同源性为75.6%～92.9%。pnrsv新疆巴旦木各分离株之间MP基因核苷酸序列同源性很高,在90.9%～94.6%,氨基酸同源性在82%左右。本研究首次报道了新疆巴旦木pnrsv分离株运动蛋白基因(MP)序列,为进一步揭示其分子特征、遗传变异和功能基因研究提供了基础。

关键词： pnrsv 巴旦木运动蛋白基因克隆

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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西北农业学报 2006年第5期15卷 163-165页

作者：戴志新牛建新潘立忠吴玉鹏韩晓燕石河子大学农学院园艺系新疆石河子832003

以桃树叶片为材料提取总RNA,根据pnrsv外壳蛋白基因设计引物,进行RT和PCR扩增,获得良好结果,对目的片段经过克隆测序,与NCBI中报道的pnrsv外壳蛋白基因序列同源性最高达98%。在建立的RT-PCR技术基础上,对RT-PCR体系中的主要影响因子进... 详细信息

以桃树叶片为材料提取总RNA,根据pnrsv外壳蛋白基因设计引物,进行RT和PCR扩增,获得良好结果,对目的片段经过克隆测序,与NCBI中报道的pnrsv外壳蛋白基因序列同源性最高达98%。在建立的RT-PCR技术基础上,对RT-PCR体系中的主要影响因子进行了优化研究。

关键词：桃树 pnrsv RT—PCR检测优化

应用RT-PCR检测歇马杏李属坏死环斑病毒

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江苏农业科学 2006年第5期34卷 93-93页

作者：侯义龙赵洋于亚军张立娟彭宗辉大连大学生物工程学院辽宁大连116622

利用作者已建立的pnrsv RT-PCR检测体系对辽宁省大连市地方特产歇马杏田间植株携带pnrsv的情况进行了调查,结果表明被检植株pnrsv的感染率达83.33%,但带毒程度不同。

关键词： RT-PCR pnrsv 检测马杏李

侵染月季的李坏死环斑病毒的检测及CP基因序列分析

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植物病理学报 2007年第1期37卷 99-101页

作者：王继华王丽花杨秀梅苏艳张颢唐开学云南省农业科学院农业部花卉产品质检中心昆明650205 云南省农业科学院花卉研究所昆明650205

Rose leaves with virus symptoms(mosaic,ring spot and line pattern) were detected by DAS-ELISA and *** results showed Prunus necrotic ring spot virus(pnrsv) infection in the *** gene of pnrsv isolated from Yunnan province was cloned and *** of sequence showed that CP gene of pnrsv-yunnan contained 683 nucleotides encoding 165 aminoacids(EMBL accession number: AY684271).Nucleotide similarity of CP gene was more than 98% between pnrsv-yunnan and group I isolates,and less than 95% between pnrsv-yunnan and group II and III *** to the results,pnrsv-yunnan was identified as a member of group I.

关键词：李坏死环斑病毒基因序列分析切花月季监督检测 CP 侵染 virus pnrsv

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北京怀柔地区樱桃上发现李属坏死环斑病毒

植物病理学报 2005年第6期35卷 552-554页

作者：李明福张永江黄冲相宁张秀琴李桂芬魏梅生陈燕芳中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029 中国农业大学植物病理学系北京100094 北京市怀柔区种植业服务中心北京101400

李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,pnrsv)属雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus),是我国二类检疫性有害生物.pnrsv主要危害李属和蔷薇属植物.如,樱桃、桃、李、月季等.春季感染pnrsv的樱桃早期... 详细信息

李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,pnrsv)属雀麦花叶病毒科(Bromoviridae)等轴不稳环斑病毒属(Ilarvirus),是我国二类检疫性有害生物.pnrsv主要危害李属和蔷薇属植物.如,樱桃、桃、李、月季等.春季感染pnrsv的樱桃早期幼叶会出现深棕色坏死斑和线纹,叶片展开期坏死斑脱落造成穿孔症状.受pnrsv危害后,果树树势减弱,产量降低,甚至死树.我国学者调查陕西、辽宁和山东等省的果树病害时发现并报道了该病毒[1～3].

关键词：环斑病毒坏死樱桃李属怀柔地区 pnrsv 检疫性有害生物北京果树病害 virus

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微茎尖培养脱除樱桃2种病毒试验

中国果树 2005年第1期 40-40,42页

作者：袁小环李青张开春北京林业大学园林学院 100083 北京市农林科学院林业果树研究所

樱桃树受到病毒侵害,造成树势衰弱,果实畸形,观赏和经济价值大大降低,其中危害严重的病毒有苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和李属坏死环斑病毒(pnrsv)2种.本文采用微茎尖组织培养法脱除苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒,并用RT-PCR技术检... 详细信息

樱桃树受到病毒侵害,造成树势衰弱,果实畸形,观赏和经济价值大大降低,其中危害严重的病毒有苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和李属坏死环斑病毒(pnrsv)2种.本文采用微茎尖组织培养法脱除苹果褪绿叶斑病毒和李属坏死环斑病毒,并用RT-PCR技术检测脱毒效果.

关键词：环斑病毒茎尖培养苹果樱桃叶斑病 pnrsv 果实畸形坏死 RT—PCR技术降低

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沿河空心李离体培养技术研究

沿河空心李离体培养技术研究

作者：李蕊蕊贵州大学

学位级别：硕士

沙子空心李属蔷薇科（Rosaceae）李属（Prunus）,是贵州省沿河县特有地方优良水果品种,距今己有300多年的栽培历史。近些年,沙子空心李面临良种混杂流失、原有种质需改进部分不良性状、新苗存活率低等迫切需要解决的产业问题。本文以贵... 详细信息

沙子空心李属蔷薇科（Rosaceae）李属（Prunus）,是贵州省沿河县特有地方优良水果品种,距今己有300多年的栽培历史。近些年,沙子空心李面临良种混杂流失、原有种质需改进部分不良性状、新苗存活率低等迫切需要解决的产业问题。本文以贵州省沿河县沙子空心李为材料,在离体快繁、增殖苗遗传稳定性检测及病毒病检测等方面开展相关研究工作,旨在建立沿河沙子空心李快繁体系,并获得稳定遗传且无毒组培苗,为空心李提纯复壮奠定基础,同时为生产者规模化繁育优良组培苗提供技术支撑,为空心李病毒病研究等具有重要参考价值,主要取得以下成果:1.沙子空心李离体快繁体系的建立选用经检测无毒的沙子空心李冬季带休眠芽茎段为外植体,75%酒精浸泡消毒30 s后用0.1%Hg Cl及两滴Tween-80消毒10 min,剥去鳞片后接种于MS+6-BA 0.5 mg/L培养基上;4 d后将萌发的新芽切下转移至MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA0.5 mg/L增殖培养,增殖系数为5.15,且增殖芽健壮;转移至生根培养基1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L中,50 d生根率达到65%,平均生根6.38根,平均根长9.35 cm,主根粗壮、须根发达,组培苗长势良好。2.离体组培苗的遗传变异检测第1代至第5代增殖苗中,选取长势基本相同组培苗,每代随机选取30株,提取叶片DNA,分别用ISSR及SSR分子标记检测其遗传稳定性。利用22条ISSR引物共扩增出105条清晰的谱带、22对SSR引物共扩增出57条单态带,结果表明在引物检测范围内沙子空心李离体培养至第5代仍然保持其遗传稳定性。3.离体组培苗的病毒检测分别从沿河县南庄及十二盘村空心李种植基地采集园内疑似感染病毒的空心李叶片各50份,用十二盘村采集的材料离体培养的第5代增殖组培苗中随机选取50株,以空心李种子萌发实生苗为阴性对照,设计李属坏死环斑病毒（pnrsv）引物,检测组培苗带病毒情况。结果表明:南庄田间50份材料,pnrsv检出率为64%;十二盘村田间材料及其离体增殖的第5代50株组培苗并未检测出pnrsv,本研究离体培养体系最终获得无毒的空心李苗。

关键词：沙子空心李离体培养分子标记遗传变异 pnrsv