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Using of the surface plasmon resonance cytosensor for real-time and non-invasive monitoring of cellular effects in living C6 cells induced by pma

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Chinese Science Bulletin 2006年第8期51卷 927-933页

作者： WANG Chunyan LI Yinghui XIONG Jianghui,TAN Yingjun YU Jianru Laboratory of Space Cell and Molecular Biology Astronaut Researchand Training Center of China Beijing 100094 China

Developing novel instruments and technologies for spatio-temporal and dynamic meas-urements of the intricate cellular effects involving molecular translocation, signal transduction, and molecular interactions inside living cells is essential for the cell and molecular biology science. For the purpose of monitoring and investigating molecular events in living cells at real-time, the surface plasmon resonance based cytosensor (SBCS) for cell cultur-ing and signal monitoring was established, and on the basis of it, the corresponding technology was also established by monitoring and analyzing SPR re-sponses induced in rat C6 glioma cells by phorbol 12-myristate 13-acetate (pma). The SPR signals induced by pma in living C6 cells were significantly different from those groups without cells. These re-sponses were strongly dependent on and saturable to the concentrations of pma, and could be sup-pressed by the specific and potent PKC inhibitors, which indicated that the measured signal could be the reflection of the redistribution of intracellular components near the cell membrane triggered by the activation of PKC. This research provides a quantita-tive and non-invasive technique to study the spa-tio-temporal characteristics of the cellular effects in living cells at real-time. Furthermore, this technology could also be widely used in the basic research as well as applied realms, such as space effects evaluation, environmental safety assessment, bio-logical weapon detection, cellular and molecular re-search, and drug screening.

关键词：细胞质基因组传感器侵入性诊断细胞效应 pma

牛奶中大肠杆菌检测方法的评价及pma-ddPCR检测大肠杆菌O157:H7方法的建立

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牛奶中大肠杆菌检测方法的评价及PMA-ddPCR检测大肠杆菌O157:H7方...

作者：李逸群南京农业大学

学位级别：硕士

大肠杆菌是一种常见的肠道细菌,主要分布于人和动物的肠道中,然而,有些具有致病力的大肠杆菌会引起腹泻和败血症等,如果食品被致病性大肠杆菌污染,则会严重危害人和动物的健康。大肠杆菌O157:H7是一种重要的肠出血性大肠杆菌,感染数量... 详细信息

大肠杆菌是一种常见的肠道细菌,主要分布于人和动物的肠道中,然而,有些具有致病力的大肠杆菌会引起腹泻和败血症等,如果食品被致病性大肠杆菌污染,则会严重危害人和动物的健康。大肠杆菌O157:H7是一种重要的肠出血性大肠杆菌,感染数量极低的大肠杆菌O157:H7就可发疾病。国家及行业标准中有很多检测食品中大肠杆菌的方法,如传统培养法、酶联免疫吸附法、实时荧光定量PCR法等,虽然特异性较好,灵敏度较高,但是还存在着操作繁琐、检测时间较长等问题。本试验对几种食品中检测大肠杆菌的国家标准和行业标准进行了比较,检测它们在灵敏度、检测限和检测时间上的差异,为临床检测方法的选择提供参考。结果表明,检测方法的检测限都为10～0CFU/m L,酶联免疫法和LAMP法结果不够准确。对检测方法进行时长上的优化后,检测所需要的时间平均缩短了1～2d,并且准确性和灵敏度没有发生变化。在致病菌的检测中,区分活菌和死菌至关重要。现有的检测方法,如PCR、实时荧光定量PCR等,都不能鉴别活死菌。叠氮溴化丙锭(pma,propidium monoazide)是一种可以和DNA共价交联的光敏材料。在光照条件下,pma具有的光敏集团可以转变成氮宾自由基,穿透死菌的细胞膜,与其DNA发生交联,使其不能发生DNA扩增。这种反应是不可逆的。将pma应用到食源性致病菌的检测中,可以排除死菌的干扰,使检测结果更加准确。微滴数字PCR技术是近几年发展起来的一种新型检测技术,即第三代PCR技术,它可以对核酸分子进行绝对定量检测。将叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,pma)和第三代核酸检测技术微滴数字PCR结合,用pma对样品进行预处理,可以阻止死菌核酸分子的扩增,从而消除死菌在检测中的影响,可以更加灵敏、准确地检测大肠杆菌O157:H7的活菌。本试验探索了最佳处理条件:pma的预处理浓度为20μg/m L,在500 W的卤素灯下,光照时间为15 min。用pma-q PCR、pma-ddPCR对不同浓度的大肠杆菌O157:H7活菌进行检测,结果表明pma-ddPCR灵敏度最高,纯菌液中检测限为10～1CFU/m L,并且线性关系为0.9988。用平板计数法、pma-q PCR和pma-ddPCR对不同比例的活死菌混合液进行检测,pma-ddPCR与平板计数法的结果较为接近。将不同浓度的大肠杆菌O157:H7加入到无菌牛奶中,制造人工污染的牛奶样本,pma-ddPCR检测出的活菌数也和理论添加相差不大,说明pma-ddPCR可以用于大肠杆菌O157:H7活菌的检测,此方法快速、准确、灵敏度高,为其他食源性致病菌活菌的检测提供了新思路。

关键词：大肠杆菌O157:H7 检测方法 pma pma-ddPCR 牛奶

氨基酸衍生物PMV,PML和pma的电喷雾质谱研究

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有机化学 2003年第11期23卷 1277-1281页

作者：李夏梁燕郑向军梅毓华首都师范大学化学系北京100037 北京师范大学化学系北京100875 南京大学配位化学国家重点实验室南京210093

应用电喷雾 (ESI)质谱及其多级串联质谱 (MSn)技术研究了三个氨基酸衍生物N (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) 缬氨酸(PMV) ,N ,N 二 (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) 白氨酸 (PML)和N ,N 二 (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) β 丙氨酸 (pma)在电喷雾... 详细信息

应用电喷雾 (ESI)质谱及其多级串联质谱 (MSn)技术研究了三个氨基酸衍生物N (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) 缬氨酸(PMV) ,N ,N 二 (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) 白氨酸 (PML)和N ,N 二 (N 亚甲基 2 吡咯烷酮 ) β 丙氨酸 (pma)在电喷雾条件下的质谱行为 .在此条件下三个氨基酸衍生物PMV ,PML和pma可以质子化形式PMVH+ ,PMLH+ 和pmaH+ 存在 ,并且检测到它们的Na+ 和K+ 的加合物 .在电喷雾条件下PMV ,PML和pma优先采取C—N键的断裂 ,并且通过分子间的氢键作用形成了许多二聚和三聚物种 .

关键词：氨基酸衍生物 PMV PML pma 电喷雾质谱 N-(N-亚甲基-2-吡咯烷酮)-缬氨酸 N,N-二-(N-亚甲基-2-吡咯烷酮)-白氨酸 N,N-二-(N-亚甲基-2-吡咯烷酮)-β-丙氨酸

VmaH和pma在指状青霉中的表达及其作为潜在杀菌作用靶点的可能性

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食品科学 2021年第6期42卷 126-133页

作者：范明彭丽桃闫等范刚杨书珍李杰华中农业大学食品科技学院湖北武汉430070

目的:研发安全、高效、具有新型作用靶点的杀菌剂,在对指状青霉(Penicillium digitatum)VmaH和pma进行生物信息学和表达模式分析的基础上,进一步探讨两个基因作为潜在杀菌作用靶点的可能性。方法:以指状青霉为实验材料,使用Pfam、MEGA ... 详细信息

目的:研发安全、高效、具有新型作用靶点的杀菌剂,在对指状青霉(Penicillium digitatum)VmaH和pma进行生物信息学和表达模式分析的基础上,进一步探讨两个基因作为潜在杀菌作用靶点的可能性。方法:以指状青霉为实验材料,使用Pfam、MEGA 5.0等在线软件对VmaH和pma的编码蛋白进行生物信息学分析,进一步利用实时聚合酶链式反应技术分析VmaH和pma在指状青霉中的表达规律。结果:结构域预测发现,VmaH具有2个非常保守的结构域,分别为N端结构域和C端结构域;pma具有3个非常保守的结构域,分别为N端结构域、E1-E2 ATPase结构域和水解酶结构域。同源比对结果发现真菌物种中VmaH和pma的氨基酸相似度分别为79%、80%,表明不同真菌间VmaH和pma高度保守。进化树分析显示指状青霉VmaH和pma与青霉属和曲霉属的VmaH和pma具有较近的亲缘关系。相较于pma,VmaH在指状青霉的整个生长过程中一直保持较高的表达水平,而pma的基因表达水平在指状青霉生长后期显著下调。葡萄糖饥饿显著降低了VmaH和pma的基因表达水平,葡萄糖回补可以恢复两个基因的表达水平,尤其是VmaH的表达量会显著上调。极酸极碱条件下VmaH和pma的表达量均显著下调,弱酸和弱碱性环境使pma基因的表达量增加。氧化、还原剂处理均能显著降低VmaH和pma的表达水平,且pma的下调尤为显著。pma在不同杀菌剂处理条件下表达量均显著下降;而VmaH对不同杀菌剂处理的响应有所差异。结论:通过VmaH和pma的生物信息学和表达规律分析,可以将VmaH和pma所编码的蛋白作为指状青霉潜在杀菌作用靶点进行深入研究。

关键词：指状青霉 VmaH pma 基因表达作用靶点

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pma-PCR诊断技术研究进展

中国动物检疫 2023年第3期40卷 72-78页

作者：石艳萍陈弟诗王印陈斌杨悦张鹏飞李春邵靓四川省动物疫病预防控制中心四川成都610041 四川农业大学四川成都611130

叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,pma)是一种光反应的DNA结合染料,具有极高的DNA亲和结合能力。pma可进入死亡和外膜损伤严重的微生物内部,插入DNA结构中,经可见光刺激发生光裂解后,同DNA结合发生共价交联反应,共价交联产物可以抑制DN... 详细信息

叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,pma)是一种光反应的DNA结合染料,具有极高的DNA亲和结合能力。pma可进入死亡和外膜损伤严重的微生物内部,插入DNA结构中,经可见光刺激发生光裂解后,同DNA结合发生共价交联反应,共价交联产物可以抑制DNA的PCR扩增。基于pma的这一特性,pmaPCR可用于鉴别活死细菌、真菌、病毒等微生物。在实际应用中,pma-PCR检测结果受样本浊度、活死微生物比例、pma浓度、暗处理条件(温度、暗处理时间)、曝光条件(光源、光处理时间)、样本处理方法以及目的基因扩增长度等多种因素影响。pma-PCR已被应用于动植物疫病防控、食品安全、公共卫生等多个领域,具有广阔的应用前景。

关键词：叠氮溴化丙锭 pma PCR 检测

pma诱导C6细胞rPer1,rDbp基因的近日节律表达

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航天医学与医学工程 2006年第6期19卷 462-464页

作者：薛建新甘露鲁芳刘延友肖静汪宇辉王正荣四川大学华西医学中心卫生部时间生物学重点实验室四川成都610041

目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用pma(phorbol12-myristate13-acetate),100nmol/L)及50%的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPer1mRNA的表达水平,比较... 详细信息

目的寻找一种新的体外节律诱导剂以研究C6神经胶质瘤细胞近日节律基因的表达情况。方法采用pma(phorbol12-myristate13-acetate),100nmol/L)及50%的马血清刺激体外培养的小鼠NIH-3T3细胞,RT-PCR检测不同时间点mPer1mRNA的表达水平,比较两者的诱导效率;pma刺激体外培养的大鼠C6神经胶质瘤细胞,RT-PCR检测不同时间点rPer1,rDbpmRNA的表达水平。结果pma及50%的马血清均能诱导NIH-3T3细胞mPer1的近日节律表达且诱导效率近似;并首次发现C6细胞的rPer1,rDbp基因存在着近日节律振荡。结论pma是一种有效的体外节律诱导剂;经pma诱导后,C6细胞的节律基因存在近日振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供依据。

关键词：近日节律 pma period1基因 D6p基因 C6神经胶质瘤细胞

金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏及pma-qPCR检测

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现代食品科技 2013年第6期29卷 1390-1394页

作者：田聪余以刚肖性龙吴晖赖富饶杨锡洪华南理工大学轻工与食品学院广东广州510640 广东温氏佳润食品有限公司广东云浮527400

为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和pma-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌4... 详细信息

为研究金黄色葡萄球菌活的非可培养(VBNC)状态的复苏问题,采取温度、盐度和酸度3个因素复合诱导制备VBNC菌,尝试四种复苏方法,并以荧光定量PCR和pma-qPCR技术结合的方法进行检测。结果证明:8%无菌Tween80可以使VBNC状态金黄色葡萄球菌48 h后复苏,同时pma-qPCR能够有效检出VBNC状态金黄色葡萄球菌,克服传统平板计数法对于VBNC菌的漏检。

关键词：金黄色葡萄球菌活的非可培养状态复苏 pma 荧光定量PCR

pma对人外周血T细胞和CD^（4＋）细胞表型影响的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1994年第3期14卷 176-179页

作者：韩作宁刘白马树俊陶家平张志欣志宏龙振洲北京医科大学免疫教研室北京市中心血站

本研究采用双色免疫荧光染色技术，用流式细胞计观察了经Ｅ花环法分离的正常人外周血Ｔ细胞和经补体介导的细胞毒方法用ＯＫＴ８单克隆抗体分离的人外周血ＣＤ４＋细胞在佛波酯（ＰＭＡ，一种ＰＫＣ激酶活化剂）活化早期细胞表型的变化... 详细信息

本研究采用双色免疫荧光染色技术，用流式细胞计观察了经Ｅ花环法分离的正常人外周血Ｔ细胞和经补体介导的细胞毒方法用ＯＫＴ８单克隆抗体分离的人外周血ＣＤ４＋细胞在佛波酯（ＰＭＡ，一种ＰＫＣ激酶活化剂）活化早期细胞表型的变化情况。我们已经研究了ＰＭＡ对人胎儿胸腺细胞表型变化的影响，发现ＰＭＡ可明显下调胸腺ＤＰ亚群ＣＤ４、ＣＤ８和ＣＤ３分子表达。但能明显促进ＣＤ２５和ＨＬＡ－Ⅰ类抗原表达。本文旨在通过研究ＰＭＡ对人外周血Ｔ细胞和ＣＤ４＋亚群表型变化的影响，探讨ＰＭＡ对发育成熟的外周血Ｔ细胞是否发挥同样的调节作用。并且通过观察外周血Ｔ细胞和ＣＤ４＋亚群对ＰＭＡ的反应性，探讨Ｔ细胞在对抗原发生应答而活化时，Ｔ细胞亚群之间是否存在某种影响细胞表型变化的相互作用。我们发现ＰＭＡ同样可下调外周血Ｔ细胞ＣＤ３ＣＤ４和ＣＤ８分子的表达，并促进ＣＤ２５分子表达。ＰＭＡ对外周血Ｔ细胞的作用与胎儿胸腺细胞相比在作用时间上有明显不同。表明处于不同发育阶段的Ｔ细胞对ｐＭＡ表现不同的反应性。另外，外周血总Ｔ细胞和ＣＤ４＋亚群细胞也对ＰＭＡ表现不同反应性，提示Ｔ细胞在ＰＭＡ作用下发生表型改变时，细胞亚群之间可能存在某种影响细胞表型变化的相互作用?

关键词： T细胞表型分化 pma

pma对Jurkat细胞株中可溶型分泌和膜型TRAIL表达的调节

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 276-279页

作者：李妍曹云新张赟宋朝君庄然方亮金伯泉第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032

目的:探讨乙酰肉豆蔻佛波酯(pma)对Jurkat细胞可溶型TNF相关的凋亡诱导配体(solubletumornecrosisfac tor-relatedapoptosis inducingigand,sTRAIL)分泌和膜型TRAIL(membraneboundTRAIL,mTRAIL)表达的调节,以及二者的细胞毒作用。方法:分别采用ELISA及间接免疫荧光染色和流式细胞术分析,检测sTRAIL的分泌和mTRAIL的表达水平;用4h51Cr释放试验检测sTRAIL和mTRAIL对靶细胞Raji的细胞毒作用。结果:pma刺激24h后jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达均增加,sTRAIL分泌在刺激后48h达峰值,mTRAIL表达峰值在60h。两型TRAIL都具有对Raji细胞的细胞毒作用。结论:PKC活化剂pma可上调Jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达,两型TRAIL分子都具有杀伤靶细胞的细胞毒作用。

关键词： pma sTRAIL mTRAIL Jurkat