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肝细胞NLRP3与pkcε互作驱动肝脏胰岛素抵抗和脂肪变性

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Science Bulletin 2023年第13期68卷 1413-1429,M0004页

作者：秦伟伟翁建平 Department of Endocrinology Institute of Endocrine and Metabolic DiseasesThe First Affiliated Hospital of USTCDivision of Life Sciences and MedicineClinical Research Hospital of Chinese Academy of Sciences(Hefei)University of Science and Technology of ChinaHefei 230027China

肝脏胰岛素抵抗(IR)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的重要特征之一,与肝脏脂肪变性密切相关.肝脏IR发病机制仍不清楚,本研究通过转录组学筛选鉴定到肝细胞NLRP3是肝脏IR的重要诱导因子,进一步证实其在人和小鼠NAFLD模型肝脏组织中表达增加... 详细信息

肝脏胰岛素抵抗(IR)是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的重要特征之一,与肝脏脂肪变性密切相关.肝脏IR发病机制仍不清楚,本研究通过转录组学筛选鉴定到肝细胞NLRP3是肝脏IR的重要诱导因子,进一步证实其在人和小鼠NAFLD模型肝脏组织中表达增加.功能方面,肝细胞特异性NLRP3功能丧失或获得分别改善或加重高脂饮食(HFD)诱导的肝脏IR及脂肪变性.机制方面,NLRP3直接结合并促进蛋白激酶C蛋白(pkcs)的激活,从而损害胰岛素信号通路和增加肝脏脂肪变性;相反,抑制pkce明显阻断HFD诱导的NLRP3缺陷小鼠的有益作用.此外,研究筛选发现转录因子阴阳1(YY1)调控NLRP3启动子.治疗方面,腺相关病毒血清型8介导的肝脏NLRP3敲低减轻瘦素受体缺陷(db/db)小鼠的肝脏IR和脂肪变性.同时,药理抑制NLRP3显著减轻饮食诱导的代谢紊乱.综上,本研究揭示了肝细胞NLRP3是肝脏IR和脂肪变性的直接驱动因素,并提示YY1-NLRP3-pkcε轴为NAFLD的潜在治疗靶点.

关键词： NLRP3 Hepatic IR NAFLD pkcε

pkcε/TRPV1参与普瑞巴林减轻大鼠神经病理性疼痛的机制

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PKCε/TRPV1参与普瑞巴林减轻大鼠神经病理性疼痛的机制

作者：张潇雨重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过干预蛋白激酶C epsilon（protein kinase Cε,pkcε）及其下游因子瞬时阳离子受体亚家族V成员1蛋白（transient receptor potential vanilloid subtype 1,TRPV1）在坐骨神经分支选择性损伤（spared nerve injury,SNI）大鼠模型中的表达,观察普瑞巴林（pregabalin,PGB）对SNI大鼠行为学及生化指标的影响及其与pkcε/TRPV1特异性通路抑制剂和激动剂的关系,探讨pkcε/TRPV1信号通路参与普瑞巴林减轻大鼠神经病理性疼痛的机制。方法:Sprague-Dawley雄性大鼠在研究开始前均建立鞘内置管模型。60只SD大鼠鞘内置管后随机分为5组,每组12只:假手术组（sham组）、坐骨神经分支结扎组（SNI组）、普瑞巴林组（SNI+PGB组）、pkc抑制剂组（SNI+BIMⅠ组）及普瑞巴林联合pkc激动剂组（SNI+PGB+PMA组）。假手术组大鼠只显露坐骨神经及其分支,而其余四组大鼠在显露神经后均结扎胫神经和腓总神经,从而诱导疼痛模型。用Von-Frey法测定造模前1d、造模后1、4、7、14d大鼠机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）,于造模后第14d测量大鼠PWMT值处死大鼠,取L4-L6脊髓组织。大鼠脊髓组织pkcε、TRPV1、磷酸化TRPV1（phosphorylated TRPV1,p TRPV1）及酸性纤维蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的表达采用蛋白质印迹法测定,采用免疫荧光法分析大鼠脊髓背角pkcε、TRPV1及p TRPV1阳性细胞的分布与星形胶质细胞激活情况,采用酶联免疫吸附法检测脊髓产生的白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和白介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平。结果:与sham组相比,SNI组PWMT值下降,pkcε、TRPV1、p TRPV1及GFAP表达上调,脊髓背角pkcε、TRPV1及p TRPV1阳性细胞分布增加,脊髓组织IL-1β、IL-6含量增加,星形胶质细胞激活增加（P＜0.05）。采用普瑞巴林或pkc抑制剂干预可提高SNI组大鼠PWMT值,并下调pkcε、TRPV1、p TRPV1及GFAP表达,抑制星形胶质细胞活化,降低脊髓组织IL-1β及IL-6含量（P＜0.05）。与SNI+PGB组比较,普瑞巴林联合pkc激动剂干预SNI大鼠可逆转普瑞巴林对其的治疗效果,降低PWMT值且上调pkcε、TRPV1、p TRPV1及GFAP蛋白的表达（P＜0.05）。然而,SNI+PGB+PMA组与SNI组在上述指标比较均无明显差异（P＞0.05）。结论:普瑞巴林可通过阻断pkcε/TRPV1信号通路的激活,减轻TRPV1磷酸化,改善SNI大鼠中枢神经痛觉敏化,抑制炎症因子释放减轻脊髓炎症反应,减轻星形胶质细胞激活,防止神经病理性疼痛的持续发展。

关键词：神经病理性疼痛普瑞巴林 pkcε TRPV1 炎症星形胶质细胞

pkcs在肾透明细胞癌进展和免疫调节中的作用及机制初探

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PKCs在肾透明细胞癌进展和免疫调节中的作用及机制初探

作者：范铭铭南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是一种泌尿系统恶性肿瘤,起源于肾小管上皮,在西方国家发病率最高,在我国的发病率也逐年攀升。肾透明细胞癌(kidney clear cell carcinoma,KIRC)是肾细胞癌中患者最多的亚型,KIRC患者预后较... 详细信息

研究背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是一种泌尿系统恶性肿瘤,起源于肾小管上皮,在西方国家发病率最高,在我国的发病率也逐年攀升。肾透明细胞癌(kidney clear cell carcinoma,KIRC)是肾细胞癌中患者最多的亚型,KIRC患者预后较差,且对化疗和放疗会产生抵抗性,晚期还会受到转移和复发的威胁。因此,寻找新的KIRC治疗靶点和预后标志物将为KIRC患者治疗和改善预后提供重要基础。蛋白激酶C(protein kinase C,pkc)属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,pkcε属于新型(novel)pkc。prkce是编码pkcε的基因,prkce已被证明是上皮细胞和成纤维细胞中的癌基因,已有研究表明pkcε在促进肿瘤细胞侵袭和转移中的作用,且与化疗耐药有关,同时,pkcε被发现在转化的间质细胞中表达下调。有研究发现pkcε在KIRC中异常表达,并与肿瘤Fuhrman分级和T分期相关,但pkcε的异常表达在KIRC中的预后价值和潜在机制仍未得到充分研究。研究目的:探讨KIRC中pkcε异常表达的调节机制及pkcε表达与KIRC免疫细胞浸润的临床相关性。研究方法:首先整合多个数据库的数据,主要包括TCGA、GTEx和GEO,分析并评估pkcε在KIRC中的表达情况,以及pkcε的表达与不同临床病理特征的KIRC患者恶性程度的联系。同时,采用Kaplan-Meier绘图法和多变量Cox回归分析,评估pkcε与临床病理特征和预后之间的相关性。然后,用CancerSEA分析KIRC中pkcε的功能,并在pkcε过表达的KIRC细胞中检测其对KIRC细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。然后,采用多种甲基化分析数据库,包括UALCAN、DiseaseMeth、LinkedOmics 和 MEXPRESS 获得 pkcε 的启动子 DNA甲基化水平,并分析其甲基化水平与pkcε表达之间的关系。接着,用Starbase数据库进行了 pkcε的上游潜在miRNA预测,以探讨pkcε在KIRC中异常低表达的机制。最后,我们分析了 pkcε对KIRC免疫细胞浸润的影响以及相关的免疫细胞与免疫检查点和KIRC患者预后的相关性。研究结果:(1)pkcε在KIRC中表达下调,且下调的表达与较差的病理表型相关。(2)pkcε表达降低与KIRC的不良预后相关。(3)pkcε的表达与KIRC细胞增殖、侵袭和迁移能力呈负相关。(4)pkcε的低表达与pkcε的高启动子DNA甲基化水平有关。(5)hsa-miR-21-5p 是 KIRC 中 pkcε 潜在的调控 miRNA。(6)pkcε的低表达与KIRC微环境中抗癌免疫浸润减少有关。(7)pkcε与免疫检查点呈负相关。(8)pkcε表达降低可能影响KIRC患者的预后。结论:pkcε可能通过调节KIRC的免疫浸润影响预后,pkcε可能是KIRC免疫治疗及预后新的靶点。

关键词：肾透明细胞癌 pkcε miRNA 免疫微环境

腹部推拿调控Tryptase-PAR2-pkcε通路防治IBS-D内脏痛的机制研究

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天津中医药 2023年第1期40卷 75-81页

作者：李华南王毓岩张小凡张玮马菲董桦王金贵天津中医药大学第一附属医院国家中医针灸临床医学研究中心天津300381 国家中医药管理局推拿手法生物效应三级实验室天津300381 天津市中医药研究院附属医院天津300120

[目的]验证腹部推拿防治腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏高敏感的效果,阐明其作用途径与机制。[方法]40只SD雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、腹部推拿组、西药组,每组10只。采用母婴分离结合慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。应... 详细信息

[目的]验证腹部推拿防治腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏高敏感的效果,阐明其作用途径与机制。[方法]40只SD雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、腹部推拿组、西药组,每组10只。采用母婴分离结合慢性应激法制备IBS-D大鼠模型。应用腹壁撤退评分评价干预效果。采用甲苯胺蓝染色观察结肠组织肥大细胞(MC)聚集数量及状态。利用免疫组化及蛋白质印迹法(Western blot)法分别检测胰蛋白酶(Tryptase)颗粒分布、结肠组织中蛋白酶激活受体2(PAR2)和蛋白激酶Cε(pkcε)蛋白表达。[结果]与模型组比较,腹部推拿组和西药组腹壁撤退反射评分(AWR)明显降低(Ppkcε表达量均显著降低(Ppkcε通路,进而改善IBS-D模型大鼠肠道高敏感性作用机制。

关键词：腹部推拿腹泻型肠易激综合征内脏高敏感 Tryptase PAR2 pkcε

肠吉泰对肠易激综合征内脏高敏感大鼠PAR2、pkcε、TRPV1蛋白表达的影响

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西部中医药 2022年第4期35卷 60-63页

作者：耿琦丛军上海中医药大学附属曙光医院上海200021

目的:探讨肠吉泰对内脏高敏感模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠40只,按照随机数字表法随机分为空白组、模型对照组、阳性对照组及肠吉泰组,每组10只。参照Alchaer直肠醋酸刺激法建立IBS内脏高敏感大鼠模型。造模期间阳性对照组... 详细信息

目的:探讨肠吉泰对内脏高敏感模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠40只,按照随机数字表法随机分为空白组、模型对照组、阳性对照组及肠吉泰组,每组10只。参照Alchaer直肠醋酸刺激法建立IBS内脏高敏感大鼠模型。造模期间阳性对照组大鼠给予腹腔注射Capsazepine,其余各组除空白组外均给予相同体积的溶剂腹腔注射。从第8周开始,肠吉泰组每日给予0.423 g/mL的剂量中药灌胃,空白组、模型对照组和阳性对照组每日予以等量去离子水灌胃,各组均持续灌胃4周。干预4周后,采用结直肠气囊扩张法测定并记录大鼠腹壁反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分,进行肠道敏感性评估;使用Western blot法检测大鼠结肠黏膜组织蛋白酶激活受体2(proteinase-activated receptors 2,PAR2)、下游物质蛋白激酶Cε(protein kinaseCε,pkcε)、瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid1,TRPV1)、磷酸化TRPV1(p-TRPV1)的表达。结果:当气囊压力为40、60 mm Hg(1 mm Hg≈0.133 kPa)时,模型对照组大鼠AWR评分较空白组明显升高(Ppkcε、TRPV1、p-TRPV1的表达显著降低(Ppkcε、TRPV1、p-TRPV1的表达,抑制其活化,从而改善IBS内脏高敏感。

关键词：肠易激综合征肠吉泰内脏高敏感 PAR2 pkcε TRPV1 动物实验

内皮素受体拮抗剂CPU0213和钙拮抗剂CPU86017改善异丙肾上腺素诱导的大鼠心衰的作用机制

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中国药科大学学报 2011年第1期42卷 58-63页

作者：成于思戴德哉季晖戴茵中国药科大学药理学研究室南京210009

为了验证内皮素受体拮抗剂CPU0213和钙拮抗剂CPU86017改善异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心衰的分子生物学机制,将SD大鼠均分为5组:正常组、ISO组、药物治疗组(3组)。除正常组外,其余4组均皮下给予异丙肾上腺素(ISO,1 mg/kg... 详细信息

为了验证内皮素受体拮抗剂CPU0213和钙拮抗剂CPU86017改善异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心衰的分子生物学机制,将SD大鼠均分为5组:正常组、ISO组、药物治疗组(3组)。除正常组外,其余4组均皮下给予异丙肾上腺素(ISO,1 mg/kg,10 d),其中3个治疗组于第10,11天分别皮下注射:氨基胍(30 mg/kg)、CPU0213(30 mg/kg)和CPU86017(4 mg/kg)。结果发现,ISO组,内皮素受体A(ETA)、iNOS、衰老蛋白p66Shc、ε型蛋白激酶C(pkcε)、瘦素受体(OBRb)、NADPH氧化酶p67phox、瘦素(leptin)mRNA或蛋白表达均上调,药物治疗后对这些异常均有逆转。CPU0213和CPU86017均通过抑制内皮素受体和氧化应激及下调p66Shc和pkcε等相关分子表达,减轻ISO引起的心衰。

关键词： CPU0213 CPU86017 心衰 pkcε p66Shc

脊髓pkcε和μ阿片受体参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏

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中山大学学报（医学科学版） 2020年第6期41卷 850-857页

作者：于萍王晓娥崔宇陈元中山大学中山医学院广东广州510080 中山大学附属第一医院麻醉科广东广州510080 中山大学医学院广东广州510080

【目的】在瑞芬太尼诱导痛觉过敏的大鼠脊髓组织中观察pkcε和μ阿片受体(MOR)的表达水平变化,探讨pkcε和MOR两者之间的关系。【方法】18只成年雄性SD大鼠随机平均分为3组(每组6只),分为空白对照组(C组)、生理盐水对照组(S组)和瑞芬太... 详细信息

【目的】在瑞芬太尼诱导痛觉过敏的大鼠脊髓组织中观察pkcε和μ阿片受体(MOR)的表达水平变化,探讨pkcε和MOR两者之间的关系。【方法】18只成年雄性SD大鼠随机平均分为3组(每组6只),分为空白对照组(C组)、生理盐水对照组(S组)和瑞芬太尼组(R组)。通过大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)给药2 h建立瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏模型。采用Hargreaves法观察瑞芬太尼输注后6、24 h的大鼠热刺激撤足阈值。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测大鼠脊髓组织中的pkcε和MOR的表达水平,并用免疫荧光观察pkcε和MOR在大鼠脊髓组织中的分布情况。瑞芬太尼输注前30 min预先鞘内注射不同的pkc抑制剂Bisindolylmaleimide I(BIS,pkc广谱抑制剂)和Gö6983(抑制pkc的亚型不包括pkcε),观察不同的pkc抑制剂预处理对瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏的影响以及检测大鼠脊髓组织MOR蛋白表达变化。【结果】输注瑞芬太尼24 h后可显著引起大鼠热痛阈值降低[PWTL=(5.31±0.87)s,Ppkcε表达上调(Ppkcε和MOR均与神经元存在共定位。预先鞘内注射BIS可以缓解大鼠痛觉过敏以及抑制MOR表达上调(P0.05)。【结论】脊髓背角神经元pkcε和MOR参与瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏,且pkcε可能调控MOR表达水平变化,本研究将为探明瑞芬太尼诱导痛觉过敏机制提供新的理论依据。

关键词：瑞芬太尼痛觉过敏 pkcε μ阿片受体

过表达pkcε和pkcη在HCC1806细胞中的抗凋亡作用

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第7期22卷 559-564页

作者：苏湘鄂深圳大学生命科学学院深圳518060

为探讨pkcε、pkcη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长pkcε和pkcη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了pkcε、pkcη过表达对DNA断裂的... 详细信息

为探讨pkcε、pkcη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长pkcε和pkcη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了pkcε、pkcη过表达对DNA断裂的影响,用Western印迹方法检测了pkcε、pkcη过表达对PARP、caspase3和caspase8水解的影响,以及对Bcl-2,Bax表达的影响,和对MAPK磷酸化的影响.流式细胞仪分析DNA含量的结果表明:TNFα处理后,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub-G1状态的DNA含量分别为:57·7%、23·3%、14·6%.Western印迹结果表明,当用0·01nmol/LTNFα处理,HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低,HCC1806/ε中次之,HCC1806/PC最严重;与HCC1806/PC比较,无论用不用TNFα处理,HCC1806/ε都表达更高的Bcl-2,而HCC1806/η不影响Bcl-2的表达.过表达pkcη而不是pkcε抑制了由TNFα引起的p38和JNK的磷酸化,并且是JNK的抑制剂SP600125而不是p38的抑制剂SB220025抑制了PARP的裂解.以上结果显示,过表达pkcε、pkcη可能通过不同的信号途径在HCC1806中起抗凋亡作用,pkcε上调了bcl-2的表达,而pkcη抑制了JNK的磷酸化.

关键词： pkcε pkcη HCC1806 抗凋亡

大鼠福尔马林内脏炎症痛过程中脊髓pkc、pkcε膜转位的变化

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中国疼痛医学杂志 2005年第2期11卷 91-95页

作者：张颜波高翠英李菁锦吕国蔚泰山医学院附属医院神经内科泰山271000 首都医科大学神经生物学系

目的:初步探讨pkc、pkcε在内脏炎症痛过程中的作用。方法:本实验用福尔马林(F)直肠粘膜下注射的内脏炎症痛模型,经脊髓蛛网膜下腔插管分别给予pkc、pkcε激动剂PMA(phorbol12 myristate13 acetate)和抑制剂H 7(1 (5 isoquinolinesulfon... 详细信息

目的:初步探讨pkc、pkcε在内脏炎症痛过程中的作用。方法:本实验用福尔马林(F)直肠粘膜下注射的内脏炎症痛模型,经脊髓蛛网膜下腔插管分别给予pkc、pkcε激动剂PMA(phorbol12 myristate13 acetate)和抑制剂H 7(1 (5 isoquinolinesulfonyl)2 methylpiperazinedihydrochloride),结合SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、蛋白印迹 (Western blot)等生化技术。选用成年健康Wistar大鼠,随机分 4组: 正常对照组N,内脏痛组(F+NaCl),PMA组(F+PMA)和H 7组(F+H 7)。共分福尔马林直肠内致炎后 30min、60min和 120min三个时间段。结果:在福尔马林直肠致炎后 60min内,F+NaCl组与N组pkc、pkcε膜转位相比分别明显增高 (Ppkc、pkcε相比分别明显增高(Ppkc、pkcε相比分别明显降低 (Ppkc、pkcε被激活,提示pkc、pkcε可能参与了内脏炎症痛的发生。

关键词： pkcε 福尔马林炎症痛 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳脊髓转位 Wistar大鼠直肠粘膜下注射蛛网膜下腔插管正常对照组初步探讨蛋白印迹痛模型激动剂抑制剂内脏痛 PMA 直肠内时间段比分致炎增高