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阴阳双补方及各拆方对PC12细胞氧化损伤的保护作用及对PLC-γ1-pkcα-PLD信号转导通路影响的研究

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阴阳双补方及各拆方对PC12细胞氧化损伤的保护作用及对PLC-γ1-PK...

作者：杨红亚河南中医学院

学位级别：硕士

目的:观察阴阳双补方(YY)及各拆方(核桃仁、玉竹HY,核桃仁、甘草HG,玉竹、甘草YG,核桃仁H,玉竹Y,甘草G)对Hz02所致PCI2细胞氧化损伤的保护作用及其对PLC-γ—pkcα—PLD信号转导通路的影响,研究补阳法、补阴法抗神经元细胞氧化损伤的机... 详细信息

目的:观察阴阳双补方(YY)及各拆方(核桃仁、玉竹HY,核桃仁、甘草HG,玉竹、甘草YG,核桃仁H,玉竹Y,甘草G)对Hz02所致PCI2细胞氧化损伤的保护作用及其对PLC-γ—pkcα—PLD信号转导通路的影响,研究补阳法、补阴法抗神经元细胞氧化损伤的机理,探讨阳虚、阴虚与氧自由基损伤和神经系统病变的关系。方法:采用PC12细胞为实验对象,用MTT法检测PC12细胞生存率,用公式(药物处理组OD值—模型组OD值)/(对照组OD值—模型组OD值)×100%计算细胞恢复率,筛选出适用的HO氧化损伤模型;用正交实验优选出疗效最好的方剂;设对照组和模型组,用阴阳双补方全方及其六个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察PC12细胞形态的改变,用Western blot法检测其对PC12细胞PLC-γ—pkcα—PLD信号转导通路各蛋白表达的影响。结果:1.阴阳双补方全方及各拆方对HO所致PC12细胞氧化损伤有明显的保护作用,各组细胞形态差异不大,主要区别在于正常和死亡细胞的数量上,与模型组相比,阴阳双补方及各拆方均能提高受损细胞的生存率;2.阴阳双补方全方及各拆方对HO所致PC12细胞氧化损伤的保护作用以合方最强,其作用大小依次为:YY>HG>HY>YG>H>Y>G。*** blot分析表明,与对照组相比,模型组PLC-γ—pkcα—PLD信号通路的各蛋白表达水平均下降,当用IC药物剂量处理受到HO攻击的PC12细胞时,阴阳双补方及各拆方能上调PLC-γ—pkcα—PLD信号通路的各蛋白表达水平。结论:1.阴阳双补方及各拆方对HO所致PC12细胞氧化损伤有保护作用,全方效果最好;补阴、补阳法的合用,尤其是佐使药甘草的应用使本方配伍合理,更好地发挥协同作用。***所致的神经细胞氧化损伤是通过下调PLC-γ、pkcα及PLD表达,部分阻断PLC-γ—pkcα—PLD信号通路而抑制了细胞增殖、促进了细胞死亡。3.阴阳双补方全方及各拆方通过上调PLC-γ—pkcα—PLD信号通路的各蛋白表达水平发挥其抗氧化损伤的功能。4.通过药效反证,以神经元氧化损伤为主要病理变化的神经系统疾病,其中医证型以阴阳俱虚居多,而阳虚又重于阴虚。5.阴虚、阳虚与PLC-γ—pkcα—PLD信号表达和转导减弱密切相关。

关键词： PC12细胞阴阳双补方氧自由基 PLC-γ pkcα PLD 信号转导

Myocardin与pkcα对心肌肥厚调控机制的研究

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Myocardin与PKCα对心肌肥厚调控机制的研究

作者：李韡宗天津科技大学

学位级别：硕士

心肌肥厚是心脏对循环系统各种病理状态维持适当收缩功能的一种代偿性反应。是舒张性心力衰竭的主要病因。因此,深入了解心肌肥厚过程中的分子调控机制显得尤为重要。本实验室之前的研究已经证明Myocardin可以诱导心肌肥厚,然而对于Myoc... 详细信息

心肌肥厚是心脏对循环系统各种病理状态维持适当收缩功能的一种代偿性反应。是舒张性心力衰竭的主要病因。因此,深入了解心肌肥厚过程中的分子调控机制显得尤为重要。本实验室之前的研究已经证明Myocardin可以诱导心肌肥厚,然而对于Myocardin上游的调控分子如何调节其表达水平和蛋白稳定性仍然知之甚少。有大量数据表明蛋白激酶C(pkcα)同样可以诱导心肌肥厚。但是pkcα与Myocardin在心脏中具有怎样的关系以及pkcα调控Myocardin介导的心肌肥厚的分子机制尚不明确,所以本文旨在探究pkcα与Myocardin在诱导心肌肥厚的过程中的分子调控机制。首先,在心肌细胞中过表达pkcα,用RT-PCR、Western blot的方法检测了心肌肥厚标志基因ANF和BNP以及内源的Myocardin的表达情况。结果表明:pkcα促进心肌肥厚标志基因ANF和BNP表达,同时促进了 Myocardin的表达上调,由此推断pkcα与Myocardin可能协同促进心肌肥厚的发生。其次,在心肌细胞H9c2中同时过表达pkcα和Myocardin,用荧光素酶报告分析检测的方法检测了二者对启动子ANF和4×CArG的转录活性。与推测结果相反过表达的pkcα不仅抑制了 Myocardin诱导的启动子ANF和4×CArG的转录激活,同时对Myocardin本身的的转录活性也有抑制作用,并且具有剂量依赖性。为进一步确定pkcα对Myocardin功能的抑制作用,在心肌细胞中过表达pkcα和Myocardin,利用免疫荧光检测肥厚基因α-actinin的表达,利用Western blot和RT-PCR的方法检测肥厚markerANF和BNP的表达。结果表明pkcα能够抑制Myocardin诱导的心肌肥厚,出现细胞表面积减小及肥厚标志性基因ANF、BNP表达量低等现象。当加入pkcα抑制剂CalphasinC后得到了与之相反的结果。进一步表明:pkcα抑制Myocardin诱导的心肌肥厚。最后,采用蛋白质免疫沉淀(IP)和蛋白质免疫共沉淀(Co-IP)的方法分析了pkcα促进过表达的Myocardin蛋白水平降低的具体分子机制。结果表明:pkcα和myocardin存在蛋白-蛋白相互作用,激活的pkcα明显的促进了 Myocardin在丝氨酸/苏氨酸位点的磷酸化。并且利用蛋白酶体抑制剂MG132证实pkcα的激活促进Myocardin磷酸化后发生蛋白降解。

关键词： pkcα Myocardin 心肌肥厚磷酸化

岩藻糖基转移酶IV及pkcα的表达抑制诱导A431细胞凋亡作用的研究

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岩藻糖基转移酶IV及PKCα的表达抑制诱导A431细胞凋亡作用的研究

作者：贾爽大连医科大学

学位级别：硕士

α1,3-岩藻糖基转移酶(α1,3 FUT)参与Lewis糖链合成最后一步岩藻糖化反应,包括FUT3、FUT4、FUT5、FUT6、FUT7、FUT9六种。其中FUT4是催化LeY寡糖合成的关键酶,它可将GDP-岩藻糖转移到N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的末端形成α1,3糖苷键。... 详细信息

α1,3-岩藻糖基转移酶(α1,3 FUT)参与Lewis糖链合成最后一步岩藻糖化反应,包括FUT3、FUT4、FUT5、FUT6、FUT7、FUT9六种。其中FUT4是催化LeY寡糖合成的关键酶,它可将GDP-岩藻糖转移到N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的末端形成α1,3糖苷键。正常生理条件下,FUT4主要在白细胞和上皮细胞中表达;而在肠癌、克隆癌、胰腺癌中表达异常升高。因此,调控特异岩藻糖基转移酶表达可改变LeY寡糖的合成,进而影响LeY寡糖参与的生物学功能。LeY寡糖[Fucα1→2Galβ1→4(Fucα1→3)GlcNAcβ1→R]是细胞表面的糖蛋白和糖脂分子上的Ⅱ型岩藻化寡糖。研究显示:LeY寡糖参与个体发育、器官形成、造血细胞分化及肿瘤发生与转移等。约70-90%的人类上皮细胞来源的肿瘤高表达LeY,并与肿瘤细胞的增殖、浸润和转移潜能密切相关,因此被认为是一种肿瘤相关的标志物。本课题组前期工作表明:应用RNAi技术抑制FUT4表达及利用LeY寡糖抗原的特异抗体封闭LeY,可抑制人上皮癌细胞A431的生长;而FUT4的过表达可促进LeY的合成,并抑制细胞凋亡。关于FUT4对人上皮癌细胞增殖和凋亡的影响机制还不完全清楚。信号传导分子蛋白激酶C在肿瘤的发生发展中有重要作用,并且蛋白激酶Cα亚型(pkcα)作为靶向药物治疗肿瘤已经在临床上得到初步应用。本文旨在通过细胞凋亡相关检测及Western blot等方法,研究转染FUT4干扰序列和反义pkcα对A431细胞凋亡作用的影响及初步探讨其作用机制。实验结果表明:FUT4 RNAi及pkcαAS均可以可以诱导A431细胞的凋亡,而且二者有一定的协同作用;FUT4 RNAi可能通过调控pkcα的表达诱导细胞凋亡。

关键词： LeY 岩藻糖基转移酶IV pkcα A431细胞细胞凋亡

牛磺酸通过pkcα-TGF-β1通路对缺氧肺动脉高压模型大鼠PASMCs的影响

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牛磺酸通过PKCα-TGF-β1通路对缺氧肺动脉高压模型大鼠PASMCs的...

作者：于洋哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

目的:本文研究了缺氧对大鼠引起的肺动脉高压的一般情况的影响,及肺血管重塑的病理机制。探讨牛磺酸(Taurine,Tau)是否通过pkcα-TGFβ1通路降低右心室收缩压,改善右心肥厚,及抑制肺血管平滑肌细胞(Pulmonary arterial smooth muscle ce... 详细信息

目的:本文研究了缺氧对大鼠引起的肺动脉高压的一般情况的影响,及肺血管重塑的病理机制。探讨牛磺酸(Taurine,Tau)是否通过pkcα-TGFβ1通路降低右心室收缩压,改善右心肥厚,及抑制肺血管平滑肌细胞(Pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)的过度增殖。方法:选择200g左右的雄性Wistar大鼠进行实验。建立缺氧肺动脉高压大鼠模型,分为4组:常氧对照组、缺氧7天、14天、21天组。观察缺氧时间对大鼠一般情况、右心室收缩压及缺氧时间对肺动脉血管壁重构的影响。探讨Tau对缺氧肺动脉高压大鼠的影响。分为5组:包括常氧对照组、缺氧对照组、缺氧+Tau低、中、高剂量组。观察Tau对缺氧肺动脉高压大鼠一般情况、右心室收缩压、右心肥厚指数的影响;H&E染色法观察Tau对肺动脉血管壁的影响;Western Blot法研究对肺组织蛋白中Tau对PCNA、pkcα、TGF-β1表达的影响。通过加入化学抑制剂研究Tau是否通过抑制pkcα-TGF-β1通路活性来抑制PASMCs的增殖。分为4组:常氧对照组、缺氧组、缺氧+Tau组、缺氧+Tau+STS组。观察并定量分析Tau对TGF-β1表达的改变。结果:1、缺氧使肺血管平滑肌层增厚,PASMCs增殖,Tau可显著抑制这一现象。2、Tau还可以降低右心室收缩压和右心肥厚指数(P≤0.05)。3、pkcα、TGF-β1同时参与了 Tau抑制肺血管平滑肌过度增殖的过程(P≤0.05),当牛磺酸的浓度达到320mg(/Kg·d)时,效果最佳。4、加入了 pkcα抑制剂后,Tau抑制肺动脉细胞增殖的能力降低。结论:Tau可能通过pkcα-TGF-β1通路的活性降低由缺氧引起的肺动脉高压大鼠右心室收缩压和右心肥厚指数,以及抑制缺氧诱导PASMCs的过度增殖引起的肺血管重塑。

关键词：牛磺酸肺动脉高压平滑肌细胞 pkcα TGF-β1

miR-216a通过靶向调控pkcα促进胃癌细胞凋亡的研究

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重庆医学 2013年第33期42卷 4051-4052,4055页

作者：张雪梅兰辉刘方邓敏梁晓秋怀化医学高等专科学校基础医学部湖南怀化418000 南华大学肿瘤研究所湖南衡阳421001 湖南省怀化市第三人民医院普外科 418000

目的本文旨在明确miR-216a是否通过靶向调控pkcα表达而抑制胃癌细胞增殖和促进其凋亡,从而进一步揭示miR-216a的抑瘤分子机制。方法首先构建pkcα3′UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-216a对pkcα3′UTR-荧光素酶活... 详细信息

目的本文旨在明确miR-216a是否通过靶向调控pkcα表达而抑制胃癌细胞增殖和促进其凋亡,从而进一步揭示miR-216a的抑瘤分子机制。方法首先构建pkcα3′UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-216a对pkcα3′UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-216a模拟物转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测pkcα蛋白表达水平;将pkcαsiRNA转染MGC-803,通过MTS细胞增殖活性检测和Annexin V-FITC/PI凋亡实验考察pkcα下调对MGC-803增殖和凋亡的影响。结果荧光素酶报告检测显示,miR-216a能特异性地与pkcα3′UTR结合,抑制其荧光素酶活性,下调36%。过表达miR-216a的MGC-803pkcα蛋白表达水平降低。siRNA干扰pkcα表达能抑制MGC-803的增殖和侵袭能力,它能部分模拟miR-216a的抑瘤功能。结论 miR-216a通过靶向pkcαmRNA 3′UTR而抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力。

关键词：胃肿瘤细胞凋亡 miR-216a pkcα

急性力竭运动对大鼠心肌pkcα、δ和ε表达的影响

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中国应用生理学杂志 2016年第4期32卷 333-335页

作者：马治云九江学院体育学院江西九江332005

目的:检测分析急性力竭运动对大鼠心肌蛋白激酶C(pkc)α、δ和ε亚型总蛋白及其磷酸化蛋白表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组(C组)和急性力竭运动组(AEE组)(n=25),采用一次力竭跑台运动建立急性力竭运动模型,Western ... 详细信息

目的:检测分析急性力竭运动对大鼠心肌蛋白激酶C(pkc)α、δ和ε亚型总蛋白及其磷酸化蛋白表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠50只,随机分为对照组(C组)和急性力竭运动组(AEE组)(n=25),采用一次力竭跑台运动建立急性力竭运动模型,Western blot法检测pkcα、δ和ε总蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平。结果:与C组比较,AEE组大鼠心肌pkcα、p-pkcα^(Ser-657)、pkcδ、P-pkcδ^(Thr-507)及pkcε水平均显著升高(Ppkcα、pkcδ、pkcε表达水平和pkcα、pkcδ活化水平上调,可能是急性力竭运动导致大鼠心肌损伤的重要因素,三亚型之间的交互作用可能是更重要的因素。

关键词：急性力竭运动心肌 pkcα pkcδ pkcε 大鼠

Apelin-13通过APJ/pkcα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内LPL的表达

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Apelin-13通过APJ/PKCα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡...

作者：张昕南华大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是一类慢性炎症性疾病,是血管壁对各种损伤的一种异常反应。脂蛋白脂酶（Lipoprotein lipase,LPL）是水解甘油三酯（Triglyceride,TG）的关键酶,它影响动脉粥样硬化的形成,巨噬细胞LPL与炎症以及脂... 详细信息

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是一类慢性炎症性疾病,是血管壁对各种损伤的一种异常反应。脂蛋白脂酶（Lipoprotein lipase,LPL）是水解甘油三酯（Triglyceride,TG）的关键酶,它影响动脉粥样硬化的形成,巨噬细胞LPL与炎症以及脂质蓄积关系密切,而这两者是促进动脉粥样硬化发生发展的重要因素。Apelin-13是APJ的内源性配体,其与心血管疾病密切相关,并且能够影响动脉粥样硬化的发生发展。然而apelin-13如何通过LPL影响动脉粥样硬化的发生发展其具体机制尚未明确。本研究主要探讨apelin-13能否通过APJ/pkcα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内LPL的表达同时减少脂质蓄积和促炎因子的分泌。目的:探讨apelin-13对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内LPL的m RNA和蛋白水平,以及脂质蓄积和促炎因子的分泌的影响。方法:首先采用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）检测不同浓度（0,1,10,100 n M）apelin-13处理24h以及100 n M apelin-13处理不同时间（0,6,12,24h）后,细胞内胆固醇酯（Cholesterol Ester,CE）、游离胆固醇（Free Cholesterol ester,FC）和总胆固醇（Total cholesterol,TC）水平;酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa）检测细胞上清液中白介素6（Interleukin-6,IL-6）、白介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）以及肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor,TNF-α）水平变化;用免疫印迹法和RT-PCR分别检测细胞内LPL蛋白水平及m RNA的表达。接着运用生物信息学法分析miR-361-5p与人源LPL m RNA 3’UTR序列基本情况;随后采用荧光素酶报告基因分析观察miR-361-5p与人源LPL m RNA 3’UTR的结合情况;之后,我们将G蛋白的抑制剂PTX、pkcαsi RNA或scrambled miR-361-5p、miR-361-5p mimic和miR-361-5p inhibitor分别与apelin-13共处理细胞,观察细胞内LPL蛋白水平和m RNA水平,促炎因子的分泌和胆固醇含量。结果:高效液相色谱检测apelin-13处理后的细胞,结果发现apelin-13能够降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内CE、FC和TC的含量。Elisa实验检测IL-6、IL-1β以及TNF-α的水平,结果显示apelin-13可以减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内促炎因子的分泌。实时定量PCR和Western blot观察LPL的m RNA表达和蛋白水平,实验结果发现apelin-13处理后的细胞内LPL的蛋白水平和m RNA水平明显降低。而当加入PTX预处理、转染pkcαsi RNA或miR-361-5p inhibitor后apelin-13对脂质水平、促炎因子的分泌以及LPL表达的影响随之消失。于是,本课题组推测,apelin-13可能是通过APJ/pkcα/miR-361-5p途径抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内的LPLm RNA和蛋白水平,进而减少脂质蓄积和炎症因子的水平。结论:Apelin-13通过激活APJ/pkcα/miR-361-5p途径下调LPL的表达,降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内的脂质蓄积和促炎因子的分泌。

关键词： Apelin-13 pkcα miR-361-5p 脂蛋白脂酶 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞动脉粥样硬化

基于pkcα/Nrf2/ROS通路探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化大鼠的作用

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基于PKCα/Nrf2/ROS通路探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化大鼠的作用

作者：吕艳杭广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察柔肝化纤颗粒对四氯化碳(CCl)复合因素诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用,从pkcα/Nrf2/ROS信号通路方面探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤... 详细信息

目的:观察柔肝化纤颗粒对四氯化碳(CCl)复合因素诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用,从pkcα/Nrf2/ROS信号通路方面探讨柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的作用机制。方法:将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗组,每组12只。除正常组外,其余每组大鼠采用皮下注射40%CCl(第一次使用5ml/kg体重,以后每隔3天以每3ml/kg体重,每周2次,共8周)皮下注射,联合高脂低蛋白食物(以玉米面为饲料,实验第一、二周加用0.5%胆固醇、20%猪油),为了防止肝纤维化自然修复对实验结果造成的影响,除正常组外,其余各组仍每周腹腔注射一次40%CCl油剂3ml/kg体重/每次;正常组正常饲养,同时采用同体积花生油皮下注射8周后灌胃给予同体积的生理盐水,肝纤维化模型组造模成功病理模型组于4mg/kg生理盐水灌胃,秋水仙碱组于每日0.11mg/kg体重给予秋水仙碱进行灌胃;柔肝化纤颗粒剂量组予柔肝化纤颗粒溶液4mg/kg灌胃,每周3次,共8周,连续8周取材。各组分别于用药8周后,禁食12h,经1%戊巴比妥麻醉,股静脉采血后处死,开腹剖取肝脏,通过HE染色、Masson染色观察肝脏情况,采用ELLSA检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、超氧化歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;采用PCR、Western Blot检测平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cadherin,E-Cad)、I型胶原蛋白酶(Collagen I,Col I)、III型胶原蛋白酶(Collagen III,Col III)、血红素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:Quinone dehydrogenase1,NQO1)、蛋白激酶C(Protein Kinase C,pkcα)、核因子E2相关因子(NF-E2-related factor 2,Nrf2)m RNA及蛋白表达。结果:1.柔肝化纤颗粒对肝组织的影响正常组大鼠肝组织的肝小叶结构完整,轮廓清晰,肝组织致密,无假小叶结节形成,汇管区及其周围未见小胆管及纤维组织增生,胞核位于中央。病理模型组肝小叶结构被破坏,甚至消失,结节形成,肝索排列紊乱,汇管区大量增生的纤维,呈条索状,肝细胞脂肪变性,胞浆出现许多大小不等的空泡。秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组均存在肝小叶结构不清晰,汇管区及其周围小胆管可见纤维组织增生,肝细胞脂肪变性,胞浆出现许多大小不等的空泡,但程度均较病理模型组有明显减轻。2.柔肝化纤颗粒对SOD、GSH-Px、MDA含量的影响1与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的MDA含2量显著升高(Ppkcαm RNA、Nrf2mRNA、HO-1 m RNA、NQO1 m RNA、Collagen I m RNA、Collagen III m RNA表达的影响1与正常组相比,病理模型组的pkcαm RNA相对表达量下降(Ppkcαm RNA相对表达量升高(P0.05);与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的pkcαm RNA相对表达量明显升高(P<0.05)。2与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Nrf2m RNA相对表达量下降(P<0.05);与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的Nrf2 m RNA相对表达量明显升高(P<0.05)。3与正常组相比,病理模型组、秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的HO-1m RNA相对表达量下降(P<0.05);与病理模型组相比,秋水仙碱组、柔肝化纤颗粒组的HO-1 m RNA相对表达量明显升高(P<0.05)。4与正常组相比,病理模型组的NQO1 m RNA相对表达量下降(P<0.05);与病理模型组

关键词：柔肝化纤颗粒 pkcα Nrf2/ARE ROS 肝纤维化氧化应激

Src和pkcα参与肿瘤坏死因子α诱导的心房肌细胞超快速延迟整流钾电流下调

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Src和PKCα参与肿瘤坏死因子α诱导的心房肌细胞超快速延迟整流钾...

作者：周慧珊华南理工大学

学位级别：硕士

心房颤动是最常见的心律失常之一,可导致血栓栓塞和心衰等,使患者致残和致死。房颤相关的病理生理改变主要包括电重塑、结构重塑、自主神经重塑以及钙调控异常。超快速延迟整流钾电流(Ultra-rapid delayed rectifier Kcurrent,Ikur)是... 详细信息

心房颤动是最常见的心律失常之一,可导致血栓栓塞和心衰等,使患者致残和致死。房颤相关的病理生理改变主要包括电重塑、结构重塑、自主神经重塑以及钙调控异常。超快速延迟整流钾电流(Ultra-rapid delayed rectifier Kcurrent,Ikur)是心房肌细胞特有的电流,参与动作电位的复极化过程,可通过影响动作电位时程(Action potential duration,APD)参与房颤的电重塑,在房颤的发生和发展中起重要作用。炎症与房颤过程密切相关,肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)作为一种重要的细胞炎症因子,在多种离子电流的调控过程中发挥作用,从而对房颤的电重塑产生影响。基于以上研究背景,我们探讨了房颤时TNF-α在Ikur调控过程所起作用及机制。目的:阐明TNF-α是否参与房颤时Ikur的调控过程和潜在的分子机制。方法:1、窦性心律患者和房颤患者左心耳组织分离的心房肌细胞,全细胞膜片钳检测Ikur电流密度;2、Western blot检测窦律患者和房颤患者左心耳组织中Kv1.5,TNF-α,Src,蛋白激酶C(Protein kinase C,pkc)和pkcα/p-pkcα蛋白表达;3、不同浓度TNF-α,以及TNF-α和Src抑制剂PP1或pkcα抑制剂G?6976共同干预H9c2细胞和HL-1细胞,全细胞膜片钳检测Ikur电流密度;4、不同浓度TNF-α,以及TNF-α和PP1或G?6976共同干预H9c2细胞和HL-1细胞,Western blot检测Kv1.5,Src,p-Src,pkc,pkcα和p-pkcα蛋白表达。结果:1、房颤患者左心耳组织分离的心房肌细胞中Ikur电流密度显著降低;2、房颤患者左心耳组织中Kv1.5蛋白表达显著降低,而TNF-α蛋白表达显著升高,同时伴有Src蛋白表达和pkcα蛋白活性的显著升高;3、TNF-α干预H9c2细胞和HL-1细胞可明显抑制Ikur电流密度,且Ikur电流密度降低呈浓度依赖性;4、H9c2细胞和HL-1细胞中,TNF-α干预后Kv1.5蛋白表达呈浓度依赖性降低,而Kv3.1b蛋白表达无明显改变;同时Src,p-Src,pkc,pkcα和p-pkcα蛋白表达均显著升高,提示TNF-α可抑制H9c2细胞和HL-1细胞中的Kv1.5蛋白表达,而激活Src激酶和pkcα;5、H9c2细胞和HL-1细胞中,给予Src抑制剂PP1和pkcα抑制剂G?6976处理均可逆转TNF-α诱导的Ikur下调;6、H9c2细胞和HL-1细胞中,PP1可逆转TNF-α诱导的Kv1.5蛋白表达降低,而G?6976对TNF-α诱导的Kv1.5蛋白表达下降无明显影响。结论:心房肌细胞中,TNF-α可通过激活Src激酶和pkcα下调Ikur参与心房电重塑,最终导致房颤的发生和发展。

关键词： TNF-α Ikur Src pkcα 心房肌细胞心房颤动