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基于pink1/parkin途径探究绿原酸对泡沫细胞线粒体自噬-炎症反应的作用机制

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 914-920页

作者：于红红杨韵琪罗培俞琦马玉玲田维毅贵州中医药大学贵州贵阳550025 牛津大学中医药研究中心英国牛津OX12JD 澳门科技大学中国澳门999078

目的探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)通过同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(pink1)/帕金森蛋白(parkin)信号通路对ox-LDL诱导的泡沫细胞线粒体自噬及炎症反应的调控作用。方法将RAW264.7巨噬细胞分为正常(Control)组、模型(Model)组、CG... 详细信息

目的探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)通过同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(pink1)/帕金森蛋白(parkin)信号通路对ox-LDL诱导的泡沫细胞线粒体自噬及炎症反应的调控作用。方法将RAW264.7巨噬细胞分为正常(Control)组、模型(Model)组、CGA低剂量(CGA-L)组、中剂量(CGA-M)组、高剂量(CGA-H)组、CGA-H+Mdivi-1(CGA-H+Mdi)组。油红O法鉴定细胞泡沫化;CCK-8法确定CGA干预浓度;透射电镜观察细胞线粒体结构改变;ELISA检测IL-1β、IL-18、IFN-γ表达;qRT-PCR及免疫荧光标记法检测pink1/parkin线粒体自噬通路相关基因及蛋白表达。结果油红O染色显示泡沫细胞模型制备成功。与Model组相比,不同浓度CGA干预后细胞线粒体损伤明显减轻,诱导了pink1、parkin、p-parkin、PHB2、LC3Ⅱ表达,抑制了TOMM20表达,以及降低了IL-1β、IL-18、IFN-γ的表达(Ppink1、parkin、p-parkin、PHB2、LC3Ⅱ表达,诱导了TOMM20表达,以及增强了IL-1β、IL-18、IFN-γ表达(Ppink1/parkin通路诱导泡沫细胞线粒体自噬以及抑制了促炎因子IL-1β、IL-18、IFN-γ过表达,这可能是CGA抗动脉粥样硬化机制之一。

关键词：绿原酸泡沫细胞 pink1/parkin 线粒体自噬炎症反应动脉粥样硬化

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川芎嗪通过pink1/parkin通路调控自噬对新生大鼠缺氧缺血性脑病的影响

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中国当代儿科杂志 2023年第7期25卷 751-758页

作者：杨丹王刚杨丽君段壬泽陈显兵湖北民族大学附属民大医院病理科湖北恩施445000 湖北民族大学医学部湖北恩施445000

目的研究川芎嗪注射液对缺氧缺血性脑病新生大鼠自噬的影响及其分子机制。方法将7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=12)、川芎嗪组(n=12)。模型组和川芎嗪组行左侧颈总动脉结扎后再缺氧处理,制备新生大鼠缺... 详细信息

目的研究川芎嗪注射液对缺氧缺血性脑病新生大鼠自噬的影响及其分子机制。方法将7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=12)、川芎嗪组(n=12)。模型组和川芎嗪组行左侧颈总动脉结扎后再缺氧处理,制备新生大鼠缺氧缺血性脑病模型。假手术组只暴露血管不做其他处理。川芎嗪组在缺氧缺血后每日腹腔注射川芎嗪注射液20 mg/kg,假手术组与模型组每日腹腔注射等体积的0.9%氯化钠溶液。在治疗7 d后取材,采用苏木精-伊红染色及尼氏染色观察脑组织神经元病理变化情况。采用免疫组织化学染色观察各组新生大鼠大脑海马及皮质区域PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,pink1)、parkin表达。采用TUNEL染色检测神经元凋亡情况。通过免疫印迹法检测pink1、parkin、自噬特异性基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和泛素结合蛋白(Protein 62,P62)的表达。结果与假手术组相比,模型组新生大鼠神经元数量减少,细胞间隙增大,排列疏松,胞质空泡化,尼氏小体减少;pink1、parkin阳性表达增加,神经元凋亡率升高(均Ppink1、parkin、Beclin1、LC3蛋白表达增加,P62蛋白表达减少(均Ppink1、parkin阳性表达减少,神经元凋亡率降低(均Ppink1、parkin、Beclin1、LC3蛋白表达减少,P62蛋白表达增加(均Ppink1/parkin介导的自噬相关。

关键词：川芎嗪 pink1/parkin 缺氧缺血性脑病自噬新生大鼠

迷迭香酸通过上调pink1/parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的机制研究

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中国中药杂志 2022年第23期47卷 6450-6456页

作者：程成沙舟陈想张薇史丽云南京中医药大学江苏南京210023

探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)通过上调线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的具体分子机制。将巨噬细胞RAW264.7用不同浓度的迷迭香酸预处理后感染金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,提取细胞总RNA和总蛋白,利用q-PCR和Western blot法... 详细信息

探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)通过上调线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的具体分子机制。将巨噬细胞RAW264.7用不同浓度的迷迭香酸预处理后感染金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,提取细胞总RNA和总蛋白,利用q-PCR和Western blot法分别检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,pink1)转录水平和蛋白表达的变化;使用线粒体分离试剂盒分离巨噬细胞线粒体,结合Western blot法检测E3泛素-蛋白连接酶parkin在线粒体的募集情况及其磷酸化水平的变化;综合运用免疫共沉淀和激光共聚焦显微技术观察pink1和parkin在细胞内的共定位情况并观察迷迭香酸对pink1/parkin相互作用的影响;利用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1(mitochondrial division inhibitor 1)预处理、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲除技术以及细菌平板计数,检测炎症细胞因子水平和胞内杀菌能力,确证迷迭香酸可以通过上调pink1/parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫。结果显示,迷迭香酸可显著上调pink1转录和蛋白水平的表达,促进parkin由细胞质向线粒体募集并增强其磷酸化水平,促进pink1和parkin的相互作用并增强其在巨噬细胞内的共定位;阻断线粒体自噬或敲除pink1能显著抑制迷迭香酸对巨噬细胞抗菌免疫的促进作用。该研究表明,迷迭香酸通过上调pink1/parkin介导的线粒体自噬促进巨噬细胞抗菌固有免疫应答。

关键词：迷迭香酸 pink1/parkin 线粒体自噬巨噬细胞抗菌免疫

pink1/parkin通路在线粒体自噬氧化损伤中的作用

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中国细胞生物学学报 2018年第1期40卷 116-123页

作者：梁丹阳戴汉川华中农业大学动物医学院动物生物化学教研室武汉430070

线粒体是细胞进行氧化还原反应的主要场所,其数量、质量和功能的完整性对调节细胞内环境稳态和维持细胞正常生理功能发挥着重要作用。当机体受不利环境影响时,体内产生活性氧类(reactive oxygen species,ROS)和活性氮类(reactive nitrog... 详细信息

线粒体是细胞进行氧化还原反应的主要场所,其数量、质量和功能的完整性对调节细胞内环境稳态和维持细胞正常生理功能发挥着重要作用。当机体受不利环境影响时,体内产生活性氧类(reactive oxygen species,ROS)和活性氮类(reactive nitrogen species,RNS)的水平显著增加,导致线粒体结构紊乱与功能障碍,引发机体氧化损伤,并且激活pink1(PTEN induced putative kinase 1)/parkin信号通路诱导的线粒体自噬,该通路同时也参与了细胞氧化损伤过程。该文从ROS与氧化应激、pink1/parkin通路与线粒体自噬及氧化损伤等方面展开,重点概述了pink1/parkin通路调控线粒体自噬在氧化损伤中的作用,为抗氧化产品的研发和机体氧化损伤相关疾病的防治提供新的思路与科学依据。

关键词： ROS 氧化应激 pink1/parkin 线粒体自噬氧化损伤

pink1/parkin通路介导的自噬在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用研究

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PINK1/Parkin通路介导的自噬在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用研究

作者：梁海燕南昌大学

学位级别：硕士

目的:探究pink1/parkin通路介导的自噬在H9C2心肌细胞A/R损伤中的作用。方法:本研究以H9c2心肌样细胞为实验对象,构建体外缺氧复氧（A/R）损伤模型。实验对象分为5组:（1）control组;（2）A/R组;（3）p LKO+AR组;（4）p LKO-parkin+AR组... 详细信息

目的:探究pink1/parkin通路介导的自噬在H9C2心肌细胞A/R损伤中的作用。方法:本研究以H9c2心肌样细胞为实验对象,构建体外缺氧复氧（A/R）损伤模型。实验对象分为5组:（1）control组;（2）A/R组;（3）p LKO+AR组;（4）p LKO-parkin+AR组;（5）自噬抑制剂组（3-MA+AR）。每组数据重复验证3次。分光光度计法检测乳酸脱氢酶（LDH）活性和线粒体通透性转换孔（m PTP）的开放程度;Western blotting法分析Beclin1、LC3II/I、parkin、pink1、VDAC1等蛋白表达水平;荧光标记流式细胞术测定活性氧（ROS）生成、线粒体膜电位（ΔΨm）以及细胞凋亡情况,MDC染色检测自噬泡的形成,免疫荧光法检测parkin在细胞内的亚定位。结果:1、A/R处理后,LDH活性上升,ROS爆发,线粒体膜电位崩溃,细胞凋亡增多,Western blot结果显示,VDAC1,自噬标志蛋白LC3II/I比值和Beclin1表达均显著上调。然而,自噬抑制剂（3-MA）可明显改善A/R诱发的心肌损伤;2、A/R处理后,相比于control组,pink1与parkin蛋白表达均显著增强,激光共聚焦免疫荧光法检测到parkin位移至线粒体数量也明显增多;通过RNAi质粒p LKO-parkin下调parkin后,pink1蛋白水平一定程度上得到抑制;与此同时,自噬标志蛋白LC3II/I比值、Beclin1表达显著降低,单丹磺酰尸胺（MDC）法检测结果显示细胞自噬体生成数量也明显减少;3、结果显示:通过RNAi质粒p LKO-parkin下调parkin,可显著减少心肌细胞A/R损伤后ROS生成,改善线粒体膜电位和m PTP开放程度,此外,心肌细胞的LDH活性和凋亡数量均降低。这提示,下调parkin表达可改善A/R诱导的心肌细胞损伤。结论:A/R损伤激活pink1/parkin通路,自噬增强。通过RNAi下调parkin表达,则可减轻自噬,改善A/R损伤。

关键词： H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤自噬 pink1/parkin VDAC1

pink1/parkin介导的线粒体自噬在白蛋白超负荷所致肾小管上皮细胞损伤中的作用

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PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在白蛋白超负荷所致肾小管上皮细胞...

作者：解琦天津医科大学

学位级别：硕士

目的:蛋白尿不仅仅是肾小球疾病肾损伤的结果,更是加重肾小管-间质损伤的一种重要原因。前期研究已证实自噬激活减轻了尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞损伤,然而自噬激活减轻尿蛋白所致肾小管上皮细胞损伤而发挥保护作用的具体机制尚未完全... 详细信息

目的:蛋白尿不仅仅是肾小球疾病肾损伤的结果,更是加重肾小管-间质损伤的一种重要原因。前期研究已证实自噬激活减轻了尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞损伤,然而自噬激活减轻尿蛋白所致肾小管上皮细胞损伤而发挥保护作用的具体机制尚未完全清楚。近年来线粒体功能异常已成为研究肾小管上皮细胞损伤的热点问题。适时地清除功能异常的线粒体,对于维持肾小管上皮细胞正常生长与代谢具有非常重要的意义。pink1/parkin介导的线粒体自噬便是清除线粒体的经典途径之一。由此我们推测尿蛋白所诱导的肾小管上皮细胞损伤是否是通过受损的线粒体激活了pink1/parkin介导的线粒体自噬,清除了受损的线粒体,从而减轻了尿蛋白超负荷所致肾小管上皮细胞损伤的呢。本研究通过选取尿蛋白的主要成分白蛋白超负荷处理肾小管上皮细胞,并结合基因沉默技术敲除PARK2基因,检测肾小管上皮细胞凋亡水平、细胞内线粒体功能、自噬水平以及线粒体自噬强度的变化,研究尿蛋白的主要成分白蛋白诱导的肾小管上皮细胞线粒体受损是否通过pink1/parkin信号通路介导了肾小管上皮细胞线粒体自噬激活。方法:(1)研究对象:人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞(2)模型建立与分组:应用终浓度为0mg/ml,4mg/ml,8mg/ml,12mg/ml的白蛋白处理HK-2细胞,处理8小时。(3)基因沉默与分组:应用基因沉默技术敲除PARK2基因,设正常对照组、siRNA组、白蛋白处理组和siRNA+白蛋白处理组,选取自噬表达变化最明显的白蛋白浓度8mg/ml作为处理条件。(4)需要检测的指标:通过western blot技术以及免疫荧光染色技术检测HK-2细胞LC3-II表达;通过电子显微镜和JC-1荧光染色观察线粒体结构功能变化;通过western blot技术检测线粒体内蛋白细胞色素C在胞浆及线粒体内的变化情况;通过western blot技术检测各组HK-2细胞pink1/parkin信号通路相关蛋白pink1、parkin的表达变化及线粒体自噬变化,溶酶体荧光探针Lyso Tracker和线粒体荧光探针Mito Tracker共定位观察溶酶体与线粒体的融合情况,TUNEL法检测各实验组HK-2细胞凋亡率。结果:(1)白蛋白超负荷对肾小管上皮细胞凋亡的影响。与对照组相比,白蛋白超负荷处理的HK-2细胞的凋亡率显著增加,差异具有统计学意义(P1检测结果显示,随白蛋白浓度升高细胞内线粒体膜电位降低明显,差异具有统计学意义(Ppink1、parkin蛋白表达的影响和线粒体自噬水平的变化:白蛋白处理后,免疫荧光显示LC3-II阳性点增加,免疫印迹证实自噬相关蛋白LC3-II表达增加,并且8mg/ml时到达高峰,差异具有统计学意义(Ppink1、parkin表达增加,差异具有统计学意义(Pparkin的蛋白表达、线粒体自噬水平的影响。结果显示,敲低PARK2的表达水平可抑制白蛋白组parkin表达增加,同时线粒体与溶酶体荧光共定位结果显示线粒体与溶酶体融合减少,差异具有统计学意义(P1)尿蛋白中的主要成份(白蛋白)诱导了肾小管上皮细胞凋亡及线粒体损伤(2)白蛋白超负荷损伤线粒体同时自噬激活,并伴有线粒体自噬关键蛋白pink1、parkin表达增加(3)敲低PARK2基因水平后,白蛋白超负荷损伤线粒体所诱导的线粒体自噬关键蛋白parkin表达增加降低。综上所述,白蛋白超负荷诱导了肾小管上皮细胞内线粒体损伤,并激活pink1/parkin信号通路介导的线粒体自噬。

关键词：蛋白尿线粒体线粒体自噬肾小管上皮细胞 pink1/parkin

pink1/parkin在甲醇代谢物-甲酸致PC12细胞自噬中的作用机制研究

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PINK1/Parkin在甲醇代谢物-甲酸致PC12细胞自噬中的作用机制研究

作者：严姣宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的通过不同浓度甲酸染毒PC12细胞后检测细胞活力、细胞线粒体损伤以及相关自噬水平变化,探究pink1/parkin在甲醇代谢物——甲酸致PC12细胞自噬中的作用机制,为进一步阐明甲醇的神经毒性提供一定的理论依据。方法通过体外培养PC12细胞... 详细信息

目的通过不同浓度甲酸染毒PC12细胞后检测细胞活力、细胞线粒体损伤以及相关自噬水平变化,探究pink1/parkin在甲醇代谢物——甲酸致PC12细胞自噬中的作用机制,为进一步阐明甲醇的神经毒性提供一定的理论依据。方法通过体外培养PC12细胞,采用0、8.32、12.48、16.64mmol/L(对照、低、中、高浓度组)甲酸染毒细胞24h后,倒置显微镜观察PC12细胞形态;透射电镜观察PC12细胞线粒体粒径大小及超微结构的变化;超微量酶试剂盒检测PC12细胞线粒体Na-K-ATP、Ca-Mg-ATP酶活力;JC-1检测PC12细胞线粒体膜电位(MMP)水平变化;MDC检测PC12细胞自噬水平;Western blot测定PC12细胞线粒体标志蛋白COXⅣ、自噬相关蛋白Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白,线粒体蛋白、胞浆蛋白中的pink1、parkin及磷酸化parkin蛋白。结果倒置显微镜观察,低甲酸浓度组PC12细胞数量略少于对照组,个别细胞变圆。中、高甲酸浓度组明显可见PC12细胞变圆、形态固缩、边缘变模糊、突触变短或消失、细胞间隙增大、表面光滑,细胞数量明显减少。高甲酸浓度组还清晰可见细胞成团飘浮。透射电镜观察发现,与对照组相比,低甲酸浓度组PC12细胞线粒体嵴减少稀疏,核周线粒体少有空泡。中、高甲酸浓度组PC12细胞可见明显线粒体损伤、线粒体嵴消失、线粒体数量逐渐减少,核周线粒体空泡化明显,可见线粒体自噬体。与对照组相比,各甲酸浓度组PC12细胞线粒体长径、短径均下降(Ppink1、parkin、P-parkin蛋白相对表达水平上升(Ppink1、P-parkin蛋白相对表达水平上升(Ppink1蛋白相对表达水平上升(Ppink1、parkin、P-parkin蛋白相对表达水平下降(Ppink1、parkin、P-parkin蛋白相对表达水平下降且差异具有统计学意义(Ppink1、parkin蛋白相对表达水平下降(Ppink1/parkin介导的线粒体自噬。

关键词：甲酸 PC12细胞线粒体自噬 pink1/parkin

pink1/parkin介导的线粒体自噬在攀登鱼藤异黄酮抗乳腺癌中的作用及其机制研究

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PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在攀登鱼藤异黄酮抗乳腺癌中的作用...

作者：毛联智南方医科大学

学位级别：硕士

背景乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤。虽然乳腺癌治疗方式在不断创新,但化疗仍占主要地位。临床上应用的化疗药物常存在中性粒细胞减少、衰老等副作用,因此,亟待开发一种用于乳腺癌治疗的低毒高效的药物。攀登鱼藤异黄酮是从拓树果... 详细信息

背景乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤。虽然乳腺癌治疗方式在不断创新,但化疗仍占主要地位。临床上应用的化疗药物常存在中性粒细胞减少、衰老等副作用,因此,亟待开发一种用于乳腺癌治疗的低毒高效的药物。攀登鱼藤异黄酮是从拓树果实中提取分离出的一种黄酮类化合物,具有抗氧化、降血压和抗癌活性。细胞自噬和凋亡作为细胞程序性死亡形式在肿瘤防治中发挥重要作用。攀登鱼藤异黄酮是否通过诱导乳腺癌细胞自噬和/或凋亡发挥其抗乳腺癌作用?具体机制如何?尚未清楚。目的探讨攀登鱼藤异黄酮抗乳腺癌作用及其分子机制,为研发攀登鱼藤异黄酮为抗乳腺癌药物提供理论基础。方法1.采用MTT法和细胞周期试剂盒检测攀登鱼藤异黄酮对不同类型乳腺癌细胞增殖活性的影响;2.采用Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI染色以及蛋白印迹法检测攀登鱼藤异黄酮是否诱导乳腺癌细胞凋亡;3.利用MDC染色、蛋白印迹法和免疫荧光染色等检测攀登鱼藤异黄酮是否诱导乳腺癌细胞自噬;***-tracker Red染色线粒体,共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察乳腺癌细胞内线粒体形态变化;利用线粒体膜电位检测试剂盒和活性氧检测试剂盒分别检测乳腺癌细胞线粒体膜电位和活性氧变化;***-tracker Red 染色线粒体,LysoTracker Green 染色溶酶体以及 LC3、pink1和parkin免疫荧光染色后,共聚焦显微镜观察乳腺癌细胞内线粒体和溶酶体或LC3共定位情况,pink1和parkin蛋白表达和共定位情况;蛋白印迹法和PCR检测乳腺癌细胞pink1和parkin mRNA和蛋白表达情况。结果1.攀登鱼藤异黄酮可抑制乳腺癌细胞增殖攀登鱼藤异黄酮在20μM 24h、15μM 24h、20 μM 24h和15 μM 24h即可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF7、ZR75-1和SKBR3增殖(Ppink1/parkin信号通路促发乳腺癌细胞线粒体自噬30 μM攀登鱼藤异黄酮作用于MDA-MB-231细胞12h,pink1和parkin mRNA表达均显著上调(Ppink1和parkin蛋白表达(Ppink1和parkin蛋白之间存在

关键词：攀登鱼藤异黄酮乳腺癌细胞凋亡线粒体自噬线粒体损伤 pink1/parkin

pink1/parkin介导的线粒体自噬在镉致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性中的作用

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PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在镉致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪...

作者：王超扬州大学

学位级别：硕士

根据2014年公布的《全国土壤污染状况公报》,我国因镉（Cadmium,Cd）的大量使用使其成为土壤中超标率最高的无机污染物。近年来随着我国蛋鸡规模化养殖的不断扩大,研究发现环境Cd暴露使得蛋鸡养殖过程中暴露出许多问题,其中蛋鸡肝脏脂... 详细信息

根据2014年公布的《全国土壤污染状况公报》,我国因镉（Cadmium,Cd）的大量使用使其成为土壤中超标率最高的无机污染物。近年来随着我国蛋鸡规模化养殖的不断扩大,研究发现环境Cd暴露使得蛋鸡养殖过程中暴露出许多问题,其中蛋鸡肝脏脂肪沉积、肝脏发生脂肪变性、非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）等肝脏脂代谢紊乱相关疾病引起人们的高度重视。线粒体作为机体糖、脂肪、氨基酸代谢的核心细胞器,在维持肝脏脂代谢过程中发挥着重要作用。线粒体损伤直接导致肝脏脂代谢紊乱,细胞和组织内发生脂肪沉积。pink1/parkin介导的线粒体自噬参与损伤线粒体的清除,是控制细胞线粒体数量及质量的主要机制。然而,线粒体自噬在Cd致家禽脂肪沉积中的作用机制尚不明确。本试验以原代鸡胚肝细胞和鸡胚肝组织为研究对象,通过蛋白免疫印迹（Western blot）、实时荧光定量（QRT-PCR）、免疫荧光法（Immunofluorescence）等技术手段,揭示pink1/parkin介导的线粒体自噬在Cd致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性中的作用。***对原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性的影响为了探究Cd对原代鸡胚肝细胞和鸡胚肝组织脂代谢的影响,以原代鸡胚肝细胞和肝组织作为研究对象,使用不同浓度的Cd（0、2.5、5、10 μM）处理原代鸡胚肝细胞6h,7日龄鸡胚卵黄囊注射不同浓度的Cd（0、10、100、200、500、1000 nM）培养7 d。试剂盒检测原代鸡胚肝细胞和肝组织TG含量,QRT-PCR检测脂代谢相关基因转录水平,尼罗红荧光染色观察原代鸡胚肝细胞内脂肪滴蓄积情况,HE染色观察鸡胚肝组织内脂肪空泡化情况。结果显示,与对照组相比,镉处理组原代鸡胚肝细胞和肝组织内TG含量均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,脂肪酸合成相关基因（FASN、SREBP、SCD、ACACA）转录水平均呈现不同程度升高（P＜0.05或P＜0.01）,脂肪酸分解相关基因（ATGL、ACOX1、LPL、CPT1）转录水平均呈现不同程度下降（P＜0.05或P＜0.01）,原代鸡胚肝细胞和肝组织内脂滴蓄积加重,细胞内脂溶性空泡极显著增多。表明Cd通过干扰正常脂肪酸代谢引起原代鸡胚肝细胞和肝组织发生脂肪变性。***1/parkin参与Cd致原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体自噬为了研究Cd对原代鸡胚肝细胞及肝组织脂代谢的影响,以原代鸡胚肝细胞和鸡胚肝脏组织为研究对象,使用不同浓度的Cd（0、2.5、5、10μM）处理鸡胚肝细胞6h,7日龄鸡胚卵黄囊注射不同浓度的Cd（0、10、100、200、500、1000 nM）培养7 d。透射电镜观察原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体超微结构及线粒体自噬体的形成,免疫荧光法检测原代鸡胚肝细胞线粒体和自噬小体共定位程度,Western Blot检测原代鸡胚肝细胞和肝组织LC3-Ⅱ、pink1、parkin蛋白表达水平。结果表明,与对照组相比,Cd处理组原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体肿胀变圆,线粒体膜结构不完整,形成线粒体自噬体;线粒体与自噬体有明显的共定位;原代鸡胚肝细胞和肝组织中LC3-Ⅱ、pink1、parkin蛋白表达水平均显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。表明Cd导致原代鸡胚肝细胞和肝组织细胞线粒体损伤,发生线粒体自噬,pink1/parkin途径参与了损伤过程的调控。***1/parkin介导的线粒体自噬在Cd致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性中的作用为了探究线粒体自噬在Cd致原代鸡胚肝细胞和肝组织脂肪变性过程中的分子机制,以原代鸡胚肝细胞和胚肝脏组织作为研究对象。1 μM环保霉素A（Cyclosporine A,CsA）与10 μM Cd单独或共处理原代鸡胚肝细胞6 h,1 μM CsA与1 μM Cd单独或共处理鸡胚肝组织7 d。透射电镜观察线粒体超微结构的变化及线粒体自噬体的形成,试剂盒检测原代鸡胚肝细胞和肝组织TG含量,尼罗红荧光染色观察细胞内脂肪滴蓄积情况,HE染色观察组织内脂肪空泡化情况,QRT-PCR检测脂代谢相关基因转录水平,Western Blot检测LC3-Ⅱ、pink1、parkin蛋白表达水平。结果表明,与Cd组相比,1μM CsA可以抑制Cd诱导的原代鸡胚肝细胞和肝组织线粒体自噬体的形成,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、pink1、parkin蛋白表达量显著下降（P＜0.05或P＜0.01）;原代鸡胚肝细胞内TG含量极显著升高（P＜0.01）,脂质合成相关基因转录水平均极显著升高（P＜0.01）,脂质分解相关基因转录水平显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;1μM CsA有效抑制了鸡胚肝组织内Cd致鸡胚肝组织脂肪滴的蓄积,TG生成极显著减少（P＜0.

关键词：鸡胚肝细胞肝脏组织镉脂肪变性线粒体自噬 pink1/parkin