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补阳还五汤激活pi3k-akt通路促进氧糖剥夺再灌注损伤的脑微血管内皮细胞血管生成

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浙江大学学报（医学版） 2022年第5期51卷 544-551页

作者：胡小伟李琳龚荧荧方燕杨琰许家栋储利胜浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学第二临床医学院浙江杭州310053

目的:探讨补阳还五汤促进氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)血管生成的机制。方法:RBMEC经补阳还五汤含药血清孵育24 h后,构建OGD/R细胞损伤模型。将细胞随机分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组(给予补阳... 详细信息

目的:探讨补阳还五汤促进氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)血管生成的机制。方法:RBMEC经补阳还五汤含药血清孵育24 h后,构建OGD/R细胞损伤模型。将细胞随机分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组(给予补阳还五汤含药血清)和LY294002组[给予补阳还五汤含药血清前使用磷脂酰肌醇3激酶(pi3k)抑制剂LY294002预处理1 h]。采用CCk-8法、细胞划痕实验和Transwell迁移实验、管腔形成实验分别检测细胞增殖、迁移和形成管腔能力。蛋白质印迹法检测pi3k、蛋白激酶B(akt)、低氧诱导因子(HIF)-1α及血管内皮生长因子(VEGF)等蛋白的表达。结果:与模型对照组比较,补阳还五汤组RBMEC存活率、迁移能力及管腔形成能力显著增强(均Ppi3k、磷酸化akt、HIF-1α和VEGF蛋白表达增加(均Ppi3k-akt信号通路上调HIF-1α和VEGF表达有关。

关键词：补阳还五汤脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注血管生成 pi3k-akt通路低氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子

加巴喷丁通过pi3k-akt信号通路减轻大鼠心肌缺血—再灌注损伤

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中华急诊医学杂志 2022年第3期31卷 344-348页

作者：吴彬曹亚红李锐安徽医科大学第二附属医院麻醉与围术期医学科合肥230601

目的观察加巴喷丁对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并进一步探讨其机制。方法清洁级雄性SD大鼠60只,10周龄,体重250 g~300 g,采用随机数字表法分为5组,每组12只:假手术组(Sham组)、心肌缺血-再灌注组(I/R组)、加巴喷丁组(Gap组)、LY294002... 详细信息

目的观察加巴喷丁对心肌缺血-再灌注损伤的影响,并进一步探讨其机制。方法清洁级雄性SD大鼠60只,10周龄,体重250 g~300 g,采用随机数字表法分为5组,每组12只:假手术组(Sham组)、心肌缺血-再灌注组(I/R组)、加巴喷丁组(Gap组)、LY294002组(LY组)和加巴喷丁+LY294002组(Gap+LY组)。采用左冠状动脉前降支结扎30 min和再灌注120 min,制备心肌缺血-再灌注损伤模型。记录心肌缺血前基线(T0)、缺血30 min(T1)和再灌注120 min(T2)时大鼠的心率(Heart rate,HR)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)和心率血压乘积(Rate pressure product,RPP),评价心肌缺血再灌注期间血流动力学变化;记录室性早搏(Premature ventricular complexes,PVCs)和室速/室颤(ventricular tachycardia/ventricular fi brillation,VT/VF)次数,评价缺血-再灌注期间心律失常。术毕取心肌组织采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triph enyltetrazoliumchloride,TTC)染色法,检测心肌梗死面积;免疫印迹法检测心肌组织pi3k和p-akt蛋白表达水平。结果与I/R组相比,Gap组心肌梗死面积显著下降,PVCs和VT/VF次数显著减少,pi3k蛋白表达水平和p-akt/akt比值显著升高(Ppi3k蛋白表达水平和p-akt/akt比值显著降低(Ppi3k-akt信号通路有关。

关键词：加巴喷丁心肌缺血-再灌注损伤 pi3k-akt通路心律失常心肌梗死

防己黄芪汤对CIA大鼠关节pi3k-akt通路的调控作用研究

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中国免疫学杂志 2023年第2期39卷 291-296页

作者：姬霄霄李振郝慧琴(指导) 高玉亭山西中医药大学中西医结合基础实验室晋中030619 山西中医药大学基础医学院晋中030619

目的:研究防己黄芪汤(FHD)治疗胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的药理学机制及其对pi3k-akt信号通路的调控作用。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为健康对照组(Control)、CIA组、不同剂量FHD[2.2、4.4、8.8 g(/kg·d)]干预组。除对照组外,其... 详细信息

目的:研究防己黄芪汤(FHD)治疗胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的药理学机制及其对pi3k-akt信号通路的调控作用。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为健康对照组(Control)、CIA组、不同剂量FHD[2.2、4.4、8.8 g(/kg·d)]干预组。除对照组外,其余各组采用牛Ⅱ型胶原构建CIA模型,不同剂量FHD干预,持续给药6周。HE染色检测大鼠关节和脾脏病理变化,ELISA检测血清TNF-α、IL-1、IL-6表达,网络药理学分析FHD治疗类风湿关节炎(RA)的核心信号通路,Western blot检测核心通路蛋白表达。结果:与Control组相比,CIA组大鼠关节炎症细胞浸润和骨质破坏明显,脾脏内白髓增生显著,血清TNF-α、IL-1、IL-6表达显著升高(P0.05);网络药理学分析显示FHD治疗RA的核心通路为pi3k-akt通路;CIA组大鼠关节p-pi3k、p-akt表达较Control组显著升高(Ppi3k、p-akt表达较CIA组显著降低(Ppi3k、akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建CIA大鼠模型;FHD对CIA大鼠具有良好治疗作用,其安全用药剂量为2.2~4.4 g(/kg·d);FHD可能通过抑制pi3k-akt通路激活和炎症因子生成发挥RA治疗作用。

关键词：防己黄芪汤胶原诱导性关节炎 pi3k-akt通路

pi3k-akt通路基因DNA甲基化修饰在银屑病中的作用

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PI3K-Akt通路基因DNA甲基化修饰在银屑病中的作用

作者：高凯乐内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:验证pi3k-akt信号通路中DNA甲基化具有差异的基因及其CpG位点的甲基化水平,探究pi3k-akt信号通路基因DNA甲基化对银屑病的作用,进一步筛选可能的致病基因和致病CpG位点,为探索银屑病新的检测方法、治疗靶点及预测性生物标志物做理... 详细信息

目的:验证pi3k-akt信号通路中DNA甲基化具有差异的基因及其CpG位点的甲基化水平,探究pi3k-akt信号通路基因DNA甲基化对银屑病的作用,进一步筛选可能的致病基因和致病CpG位点,为探索银屑病新的检测方法、治疗靶点及预测性生物标志物做理论铺垫。方法:首先通过cluster Profiler软件对850k芯片检测的差异甲基化基因进行kEGG富集分析,筛选差异显著并且文献报道与银屑病有关的通路作为目标通路,挑选通路中差异显著基因的CpG位点(p30例银屑病患者皮损组织(PP)和皮损附近正常皮肤组织(PC)作为验证标本,提取DNA后,利用琼脂糖凝胶电泳、分光光度计检测DNA浓度和纯度等方法对DNA样品进行质控,用重亚硫酸盐法处理DNA,对样本进行转化。将基于“Primer3”软件设计的引物进行优化,以转化后的样本基因组为模板,进行分panel多重PCR反应。利用PCR扩增向文库末端引入Index序列,把所有样品Index PCR扩增产物等量混合获得测序文库,文库浓度定量后进行高通量测序。测序数据利用Fast QC软件进行质控,通过Flash、Blat软件进行过滤、比对,获得候选位点的甲基化水平数据,利用统计学方法进行甲基化水平分析,筛选差异甲基化位点。结果:1.pi3k-akt、Cakium、Ras等信号通路在PP组与PC组的甲基化水平差异分析中显著富集,其中pi3k-akt信号通路中富集基因最多,差异最显著;2.经过Methyl Target技术验证获得可靠的甲基化测序数据,CpG位点甲基化水平差异分析显示,PP组与PC组相比,包括附加位点在内共检测出30个CpG位点甲基化水平存在显著差异,其中17个甲基化水平上调,13个甲基化水平下调;3.基因甲基化水平差异分析显示,有11个CpG位点在PP组和PC组之间甲基化水平差异显著,其中9个CpG位点与前期全基因组DNA甲基化检测结果一致。在PP组中上调的共有5个,分别为cg15381320、cg24818418、cg17940858、cg25409939、cg24116498。而在PP组中下调的共有4个,分别为cg09931511、cg14815878、cg24421822、cg10219562;4.JAk1、EGFR、EGF、FGFR2、HGF、NFkB1、PRL、TLR4等基因的CpG位点甲基化水平发生变化;5.对PP组和PC组的CpG位点的每种甲基化单倍型的丰富度进行差异显著性检验,共检测出34个具有显著统计学差异的单倍型。结论:1.pi3k-akt通路基因的DNA甲基化对银屑病的发生、发展可能具有重要作用;2.cg15381320、cg24818418、cg17940858、cg25409939、cg24116498、cg09931511、cg14815878、cg24421822、cg10219562等9个CpG位点可能成为新的银屑病的治疗靶点或者生物标志物;3.JAk1、EGFR、EGF、FGFR2 HGF、NFkB1、PRL、TLR4等基因具有作为治疗靶点或生物标志物的潜力;4.检出的34个甲基化单倍型可能与银屑病的发病风险增高有关,可能为发现银屑病DNA甲基化检测试剂,寻找新的检测方式提供理论依据。

关键词：银屑病 DNA甲基化 pi3k-akt通路

STC1通过激活pi3k-akt通路驱动糖代谢重编程促进胃癌细胞增殖

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STC1通过激活PI3K-AKT通路驱动糖代谢重编程促进胃癌细胞增殖

作者：郑妮蚌埠医学院

学位级别：硕士

胃癌的发展与能量代谢异常密切相关,通过调节能量代谢以满足细胞快速生长、侵袭和转移的需要。有研究发现,STC1在许多类型的癌症中高表达,并参与肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,但关于STC1在代谢重编程中的作用机制尚不清楚。因此,本研究旨... 详细信息

胃癌的发展与能量代谢异常密切相关,通过调节能量代谢以满足细胞快速生长、侵袭和转移的需要。有研究发现,STC1在许多类型的癌症中高表达,并参与肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,但关于STC1在代谢重编程中的作用机制尚不清楚。因此,本研究旨在探索STC1在胃癌进展中的作用及潜在的分子机制。目的:本研究探讨糖代谢重编程对STC1诱导的细胞增殖的影响及STC1参与糖代谢重编程的可能分子机制。方法:通过生物信息学分析STC1的表达与胃癌患者临床病理和预后相关性。利用CCk-8细胞增殖实验确定STC1对胃癌细胞的增殖能力;对糖代谢重编程相关的四个指标(葡萄糖消耗、乳酸产生、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性、ATP水平)的测定,探究STC1对糖代谢重编程的影响;采用糖酵解抑制剂2-DG验证STC1通过糖代谢重编程对胃癌细胞增殖的影响。转录组测序探讨STC1参与糖代谢重编程的可能分子机制,通过蛋白质印迹法探讨STC1对pi3k-akt通路相关蛋白表达的影响;最后使用akt抑制剂Mk-2206验证STC1介导的akt磷酸化对胃癌细胞恶性增殖的影响。结果:通过生信筛选出STC1是潜在的参与糖代谢基因,并且STC1的表达与胃癌患者临床病理和预后显著相关。STC1过表达显著促进细胞增殖,提高糖酵解及磷酸戊糖途径等糖代谢水平,糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-DG)能够降低STC1介导的葡萄糖消耗,乳酸产生,G6PDH活性和ATP产生并显著降低STC1诱导的细胞增殖。转录组测序分析显示,STC1主要富集在pi3k-akt通路;蛋白质印迹法检测发现STC1过表达后,pi3k和akt的磷酸化表达水平显著上调,相反,STC1敲低后,pi3k和akt的磷酸化表达水平显著下调;使用akt抑制剂Mk2206后,STC1过表达的胃癌细胞增殖能力,葡萄糖消耗,乳酸产生,G6PDH活性和ATP产生显著抑制;STC1介导的pi3k和akt的磷酸化表达水平显著降低。结论:STC1通过激活pi3k-akt通路驱动细胞糖代谢重编程促进胃癌细胞增殖,靶向STC1及其通路为胃癌患者提供了潜在的治疗靶点。

关键词： STC1 胃癌细胞增殖糖代谢重编程 pi3k-akt通路

肠道菌群及其代谢物丁酸通过pi3k-akt通路改善高盐小鼠认知功能损伤的研究

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肠道菌群及其代谢物丁酸通过PI3K-AKT通路改善高盐小鼠认知功能损...

作者：刘聪广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景:轻度认知功能损害(Mild cognitive impairment,MCI)是脑退化到阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)的中间过渡状态,在65岁及以上成年人的患病率为10%至20%,且风险随年龄增长而增加。MCI表现包括生活质量低下,抑郁症状加重,... 详细信息

研究背景:轻度认知功能损害(Mild cognitive impairment,MCI)是脑退化到阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)的中间过渡状态,在65岁及以上成年人的患病率为10%至20%,且风险随年龄增长而增加。MCI表现包括生活质量低下,抑郁症状加重,以及回避社交活动。对患者及社会,都造成了不小的负担。早期难以对MCI进行有效诊断是普筛无法推广的重要因素。炎症和免疫机制被证实与MCI发病机制相关,且炎症标记物可能反映中枢神经系统的变化。目前MCI主流治疗多以认知能力治疗、运动治疗等方式为主,然而收效甚微。从菌群-肠-脑轴观点来看,认知损伤与肠道菌群存在关联。与健康人群组相比,MCI组被发现拥有更高的变形杆菌相对丰度。MCI患者中,睡眠受损和昼夜节律紊乱是常见症状,昼夜节律对肠道菌群及其代谢产物至关重要,昼夜节律紊乱使肠道菌群失调。丁酸,作为肠道常见的菌群代谢物,是人肠道上皮细胞的主要营养物质,使结肠细胞保持稳定从而防止癌变。在脑认知方面,丁酸处理β淀粉样蛋白诱导的神经胶质细胞,可抑制NF-κB p65的磷酸化。本课题组前期研究工作显示,单纯给予高盐饮食16周,引起正常小鼠认知损伤,通过细胞自噬影响肠屏障的表达。细胞自噬与常见信号通路pi3k-akt联系紧密。因此,本研究提出“肠道菌群及其代谢物丁酸通过pi3k-akt通路改善高盐小鼠认知功能损伤的研究”的假设,以高盐认知损伤小鼠为实验模型,探索菌群及菌群代谢物丁酸对高盐认知损伤的影响以及pi3k-akt通路可能的潜在作用。为认知损伤治疗靶点药物的研发和临床认知损伤患者的治疗提供新的思路和见解。研究方法:(1)用Y迷宫实验、新异物体识别实验验证HSD(高盐组)和NSD(正常盐饮食组)之间的认知功能表型差异,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法分析两组小鼠海马组织突触素(Synaptophysin,SYP)、突触蛋白1(synapsin 1,SYN1)的m RNA相对表达水平,采用Western blot分析两组小鼠海马组织的SYP、SYN1的蛋白表达水平,分析两组突触功能状态从而评估认知损伤差异。(2)通过HE染色观察不同组小鼠肠道组织形态学变化,使用16S r DNA测序技术分析各组间小鼠肠道菌群组成差异。采用气相色谱-质谱联用法(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析各组间小鼠菌群代谢产物丁酸含量差异。(3)通过粪菌移植实验分析肠道菌群在菌群-肠-脑轴中的作用:分析r HSD组(接受高盐饮食小鼠粪菌移植的正常饮食小鼠组)和r NSD组(接受正常饮食小鼠粪菌移植的正常饮食小鼠组)两组间的Y迷宫实验和新异物体识别实验行为学表型差异、海马组织SYP、SYN1蛋白表达水平差异和m RNA水平差异。对两组脑组织进行全长转录组测序分析,找出其中有差异的基因和相关通路,并用Western blot实验对各组别小鼠海马蛋白进行通路验证。(4)验证高盐认知损伤小鼠代表性差异肠道菌和菌群代谢物丁酸与小鼠认知功能的关系。分析丁酸盐干预组(HSD+BA)和对照组之间的行为学表型(Y迷宫和新异物体识别实验)和脑组织SYP、SYN1 m RNA和蛋白表达水平差异。分析差异菌灌胃组和对照组之间的行为学表型(Y迷宫和新异物体识别实验)和脑组织SYP、SYN1 m RNA和蛋白表达水平差异。(5)通过ELISA检测差异菌干预组小鼠和丁酸盐干预组小鼠血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平。研究结果:1.行为学实验:与NSD组小鼠(正常饮食组小鼠)相比,HSD组小鼠(高盐饮食组小鼠)Y迷宫自发性交替反应率下降(P<0.01)、新异物体识别实验探索时间率下降(P<0.001)。与r NSD(接受正常小鼠粪菌移植组相比,r HSD组(接受高盐饮食小鼠粪菌移植组)小鼠Y迷宫自发性交替反应率下降(P<0.01),新异物体识别实验探索时间率下降(P<0.05)。与HSD组小鼠(高盐饮食组小鼠)相比,HSD+BA组小鼠(丁酸盐干预组小鼠)Y迷宫自发性交替反应率上升(P<0.05),新异物体识别实验探索时间率上升(P<0.0001)。与C.lep con组小鼠(柔嫩梭菌对照组小鼠)相比,C.lep组小鼠(柔嫩梭菌干预组小鼠)Y迷宫自发性交替反应率上升(P<0.01)、新异物体识别实验探索时间率上升(P<0.001)。2.WB结果:○1突触相关蛋白SYP、SYN1:与NSD组小鼠相比,HSD组小鼠SYP相对表达下降(P<0.05),SYN1相对表达下降。与r NSD组相比,r HSD组小鼠SYP相对表达下降(P<0.05),SYN1相对表达下降。与HSD组小鼠相比,HSD+BA组小鼠SYP相对表达增加(P<0.05),SYN1相对表达增加(P<0.05)。与C.lep con组小鼠相比,C.lep组小鼠SYP相对表

关键词：菌群-肠-脑轴肠道菌群粪菌移植认知损伤丁酸高盐饮食 pi3k-akt通路

细胞衰老通过驱动MAFB/NOTCH3轴激活pi3k/akt通路促进骨肉瘤进展

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细胞衰老通过驱动MAFB/NOTCH3轴激活PI3K/AKT通路促进骨肉瘤进展

作者：张振皓华中科技大学

学位级别：硕士

目的:骨肉瘤是一种好发于青少年的原发性恶性骨肿瘤,然而最近发现60岁以上的老年人中出现了第二个发病高峰。与年轻患者相比,老年患者表现出不同的临床特征,这通常导致预后不良。细胞衰老通过各种机制加速肿瘤发生和恶性进展。最近研究... 详细信息

目的:骨肉瘤是一种好发于青少年的原发性恶性骨肿瘤,然而最近发现60岁以上的老年人中出现了第二个发病高峰。与年轻患者相比,老年患者表现出不同的临床特征,这通常导致预后不良。细胞衰老通过各种机制加速肿瘤发生和恶性进展。最近研究表明,甲基丙二酸(MMA)在老年人的血清中显著上调,通过促进侵袭性特征促进了肿瘤的发展。探究老年原发性骨肉瘤的发生机制具有重大的临床意义。方法:通过转录组测序,探究MMA对骨肉瘤造成的基因转录差异与信号通路改变。通过TCGA数据集、实时定量聚合酶链式反应检测(PCR)、蛋白印迹实验和组织标本的免疫组化检测,验证MAFB与骨肉瘤患者的临床病理特征以及预后的相关性。基于使用公共基因转录调控数据库的数据分析,使用CHIP-PCR测定来验证MAFB和NOTCH3的蛋白质-DNA相互作用。通过体内外表型实验如CCk8测定、克隆形成实验、transwell实验和骨肉瘤异种移植实验,探究MAFB-NOTCH3轴在骨肉瘤中的生物学作用。结果:老年人血清中的高浓度MMA显著促进了骨肉瘤的细胞增殖和迁移能力,这与老年骨肉瘤患者采集的肿瘤组织标本中MAFB的表达显著增加一致。MAFB在转录水平上正向调节NOTCH3的表达水平。此外,MAFB-NOTCH3轴的激活通过增加akt磷酸化在体内和体外实验中促进了骨肉瘤的增殖。结论:总之,本研究证实了衰老和肿瘤的一种新联系,即MMA驱动的MAFBNOTCH3轴转录重编程通过激活pi3k-akt通路加速骨肉瘤的进展。此外,MAFB是一种新的年龄相关的骨肉瘤生物标志物,靶向MAFB-NOTCH3轴结合akt抑制剂可以作为一种针对老年骨肉瘤患者的新型治疗策略。

关键词：骨肉瘤老年患者细胞衰老甲基丙二酸 MAFB-NOTCH3轴 pi3k-akt通路

Tβ4通过pi3k-akt信号通路影响绒山羊毛囊细胞增殖与凋亡的研究

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Tβ4通过PI3K-AKT信号通路影响绒山羊毛囊细胞增殖与凋亡的研究

作者：赵子璇内蒙古大学

学位级别：硕士

羊绒具有很高的经济价值,随着世界范围对羊绒产品的需求增大,对羊绒生产的质量要求也在逐渐增高。绒山羊作为我国的优良畜种之一,所产生的羊绒手感细腻,保暖性更强。在影响绒山羊羊绒质感和产量的众多因素里,其中毛囊起到了十分关键的... 详细信息

羊绒具有很高的经济价值,随着世界范围对羊绒产品的需求增大,对羊绒生产的质量要求也在逐渐增高。绒山羊作为我国的优良畜种之一,所产生的羊绒手感细腻,保暖性更强。在影响绒山羊羊绒质感和产量的众多因素里,其中毛囊起到了十分关键的作用。胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)是一种分子量仅有4.9 kDa的小肽,它与细胞增殖和分化等众多生物学过程相关。在细胞生长存活与凋亡等方面,pi3k-akt通路起到了至关重要的作用,它是一条研究较为广泛的关键信号通路。已有研究表明,Tβ4对毛囊的生长发育具有一定的作用,细胞的增殖和凋亡与pi3k-akt通路联系紧密,Tβ4能够通过该通路促进细胞增殖,但对于Tβ4是如何通过pi3k-akt通路相关的基因影响绒山羊毛乳头细胞增殖或凋亡的具体作用机制尚未发现。本研究以绒山羊毛乳头细胞为实验对象,探究Tβ4与pi3k-akt通路相关基因对绒山羊毛乳头细胞增殖及凋亡的影响。1.绒山羊毛乳头细胞体外分离培养及鉴定采用Ⅳ型胶原酶法在体视镜下分离绒山羊生长期的背部皮肤组织,得到初级毛乳头细胞(PHF-DPCs)和次级毛乳头细胞(SHF-DPCs),以含有10%FBS的培养液来培养细胞,通过免疫荧光检测标志蛋白α-SMA和CD133,鉴定结果表明在体外成功分离培养毛乳头细胞,可以用于后续实验。2.Tβ4过表达载体的构建、转染及Tβ4干扰片段的转染通过基因克隆、转化、连接、胶回收、酶切等方法,构建pc DNA3.1(+)-Tβ4过表达载体,提取去内毒素的质粒,经过筛选电转条件并优化,PHF-DPCs的最佳电转条件为225 V/10 ms,SHF-DPCs的最佳电转条件为225 V/2.5 ms。通过实时定量PCR检测,相比对照组,Tβ4基因的表达量分别是13.49倍和9.92倍。通过Western blot检测,相比对照组,Tβ4蛋白水平表达量升高。结果表明,构建了Tβ4过表达载体并将其质粒转到PHF-DPCs和SHF-DPCs中。通过设置不同的浓度梯度,确定150 n M时si RNA干扰位点3在PHF-DPCs和SHF-DPCs中的干扰效果最佳。通过实时定量PCR检测,相比于对照组,Tβ4基因的表达量分别是0.49倍和0.21倍。通过Western blot检测,相比对照组,Tβ4蛋白水平表达量下降。3.Tβ4过表达和干扰后对毛乳头细胞增殖的影响通过实时定量PCR检测细胞增殖相关基因ki67和PCNA的表达情况。相比对照组,Tβ4过表达后,ki67和PCNA在PHF-DPCs和SHF-DPCs中的表达量均显著增加。Tβ4干扰后,ki67和PCNA在PHF-DPCs和SHF-DPCs中的表达量均显著下降。通过CCk-8检测Tβ4基因过表达和干扰后对毛乳头细胞增殖的影响。Tβ4过表达后,在PHF-DPCs和SHF-DPCs中,实验组的增殖活性整体高于对照组。Tβ4干扰后,在PHF-DPCs和SHF-DPCs中,实验组的增殖活性均低于对照组。4.Tβ4过表达和干扰后对毛乳头细胞凋亡的影响通过流式细胞仪检测凋亡,在PHF-DPCs中,Tβ4过表达后,实验组细胞的凋亡率低于对照组,但没有显著差异。Tβ4干扰后,实验组细胞的凋亡率高于对照组,但没有显著差异。在SHF-DPCs中,Tβ4过表达后,实验组细胞的凋亡率低于对照组,具有显著差异。Tβ4干扰后,实验组细胞的凋亡率高于对照组,但没有显著差异。通过实时定量PCR检测凋亡基因表达情况,与对照组相比,Tβ4过表达后在PHF-DPCs中,BCL2上调,FAS、p53、Caspase3、Caspase8和Caspase9下调。在SHF-DPCs中,BCL2和Caspase3上调;FAS、p53、Caspase8、Caspase9下调。Tβ4干扰后,与对照组相比,在PHF-DPCs中,BCL2和Caspase8下调;FAS、p53、Caspase3和Caspase9上调。在SHF-DPCs中,BCL2和FAS下调;p53、Caspase3、Caspase8和Caspase9上调。5.Tβ4过表达和干扰后对毛乳头细胞周期的影响通过流式细胞仪检测发现,在PHF-DPCs和SHF-DPCs中,相比对照组,Tβ4过表达后,G0/G1期实验组比例降低,S期和G2/M期比例升高,但均无显著差异。Tβ4干扰后,G0/G1期实验组比例降低,S期和G2/M期比例升高,但均无显著差异。6.Tβ4过表达和干扰后对pi3k-akt通路的影响通过Western blot对磷酸化akt检测,在PHF-DPCs和SHF-DPCs中,相比对照组,Tβ4过表达后,磷酸化akt蛋白水平的表达量显著升高;而Tβ4干扰后,在PHF-DPCs中磷酸化akt蛋白水平的表达量下降,但无显著性差异;在SHF-DPCs中则显著性下降。通过实时定量PCR检测与pi3k-akt通路的相关因子,在PHF-DPCs中,相比对照组,T

关键词： Tβ4 毛乳头细胞 pi3k-akt通路增殖凋亡

左旋半胱氨酸通过调控pi3k/akt通路减轻大鼠脑缺血损伤的研究

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现代实用医学 2023年第6期35卷 731-736页

作者：邵丽丽陆琦潘学威朱思亮温州市中心医院浙江省温州325000

目的探讨左旋半胱氨酸(L-Cys)通过调控pi3k-akt信号通路对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制。方法使用大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将SD大鼠分为Sham组(假手术组)、MCAO组、L-Cys组(MCAO+LCys)、LY294002组[MCAO+pi3k-akt通路特异性抑制... 详细信息

目的探讨左旋半胱氨酸(L-Cys)通过调控pi3k-akt信号通路对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制。方法使用大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将SD大鼠分为Sham组(假手术组)、MCAO组、L-Cys组(MCAO+LCys)、LY294002组[MCAO+pi3k-akt通路特异性抑制剂(LY294002)]、L-Cys+LY294002组(MCAO+L-Cys+LY294002)。建模前30min给相关组别腹腔注射10μ10.5 mg/ml的LY294002;建立MCAO模型后,使用L-Cys(5mg/kg)于术后2、24、48 h连续腹腔注射3次。Sham组和MCAO组给予相同量的0.9%氯化钠注射液腹腔注射。苏木精-伊红(HE)和TUNEL染色评价脑组织完整性和神经元凋亡程度。采用qRT-PCR、Western blot和ELISA测定Bad、Bax、Bcl-2、Bim、P53、MDM2、akt、pi3k、p-akt、p-pi3k和Cyt-C表达情况。结果与Sham组相比,MCAO组脑组织细胞凋亡率明显增加,脑功能评分明降低,促凋亡因子(Bad、Bax和Bim)的表达显著上调,抗凋亡因子Bcl-2的表达显著下调(均Ppi3k-akt信号通路激活调控。

关键词：左旋半胱氨酸神经损伤细胞凋亡缺血再灌注 pi3k-akt通路