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pi3k/akt信号传导通路对子宫内膜生理修复的作用及机制初步研究

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PI3K/AKT信号传导通路对子宫内膜生理修复的作用及机制初步研究

作者：张欣北京协和医学院

学位级别：硕士

在正常女性体内,自青春期开始至绝经时,子宫内膜在雌、孕激素严密调控下,发生周期性变化即月经周期。月经周期分为月经期、分泌期、增殖期。在未妊娠状态下,细胞存在周期性增殖分化,子宫内膜也发生崩解出血、修复再生周期性变化。子宫... 详细信息

在正常女性体内,自青春期开始至绝经时,子宫内膜在雌、孕激素严密调控下,发生周期性变化即月经周期。月经周期分为月经期、分泌期、增殖期。在未妊娠状态下,细胞存在周期性增殖分化,子宫内膜也发生崩解出血、修复再生周期性变化。子宫内膜的生理性修复对于女性生育力保护意义极大。本论文以小鼠月经样模型和人子宫内膜基质细胞体外培养为基础,探究pi3k/akt信号传导通路在子宫内膜生理修复过程中的作用。从以下三方面展开:探究pi3k/akt信号传导通路在人子宫内膜月经周期和小鼠月经样模型子宫组织中表达水平、pi3k抑制剂LY294002在小鼠月经样模型中对子宫内膜修复的影响以及pi3k/akt信号传导通路下游调控机制的初步探究。***3k/akt信号传导通路在人子宫内膜和小鼠月经样模型子宫中的表达。在人子宫内膜组织月经周期的增殖期akt显色较多,阳性信号多分布于细胞核。在小鼠月经样模型中akt阳性信号随子宫内膜修复时间逐渐由基底层蔓延至整个子宫内膜,且在孕酮撤退后40 h 阳性信号多分布于细胞核。qPCR与Western blot结果显示,随子宫生理修复时间的增加p-akt呈现存在先增加后降低的趋势。以上结果提示pi3k/akt信号传导通路在子宫内膜修复存在重要作用。***3k/akt信号传导通路在小鼠月经样模型中对子宫内膜生理修复的影响。在小鼠月经样模型中pi3k抑制剂LY294002干预小鼠。对照组与LY294002组大体与HE进行子宫内膜修复程度形态分级,孕酮撤退后32 h、40 h、48 h子宫内膜修复程度分级构成比在对照组与LY294002组存在显著性差异(PkI67、CD31、Ck17免疫组织化学染色、Western blot、qPCR结果提示,LY294002组与对照组相比细胞增殖被抑制血管生成减少,延缓子宫内膜修复进程。pi3k/akt信号传导通路在人子宫内膜基质细胞,HESCs给予pi3k/akt信号传导通路激活剂Insulin激活通路之后加入抑制剂LY294002。分为对照组、Insulin组、Insulin+LY294002 组 3 组。细胞划痕实验、CCk-8 实验、Western blot、qPCR结果显示pi3k/akt信号传导通路抑制剂抑制了细胞增殖与迁移,且akt1 mRNA相对表达量Insulin+LY294002组较Insulin组显著降低(Ppi3k/akt信号传导通路显著影响(P3.小鼠月经样模型孕酮撤退后32 h、40 h、48 h的子宫进行表达谱基因芯片分析,pi3k/akt信号传导通路kEGG与细胞周期GO结果相关下调基因比对分析筛选得到细胞周期蛋白E2(CCNE2)明显下调。小鼠子宫内膜生理修复期组织qPCR和Western blot结果显示,CCNE2随修复时间增加逐渐增加,且抑制pi3k/akt信号传导通路降低CCNE2表达的同时促进P21的表达,在孕酮撤退后40h结果有显著差异(Ppi3k/akt信号传导通路通过调节CCNE2影响细胞周期,从而调节子宫内膜的生理性修复。在人子宫内膜基质细胞进行验证,qPCR和Western blot结果显示CCNE2与pi3k/akt信号传导通路正相关。综上所述,pi3k/akt信号传导通路通过正向调控CCNE2影响细胞增殖从而促进子宫内膜生理性修复,本研究为子宫内膜修复提供新的研究靶点。

关键词：小鼠月经样模型子宫内膜生理修复 pi3k/akt信号传导通路细胞周期

pi3k/akt信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移关系的探讨

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现代诊断与治疗 2014年第15期25卷 3386-3387页

作者：周江成万明秦晋张萃官炜周姝贵州省航天医院贵州遵义563000 贵州省遵义医学院附属医院贵州遵义563003

目的观察pi3k/akt信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移之间的对应关系。方法选择我院及遵义医学院所收集的存档石蜡标本共计50例作为分析对象,25例标本为无淋巴道转移的鼻咽癌组织,25例标本为有淋巴道转移的鼻咽癌组织,分别设置为对照组以及... 详细信息

目的观察pi3k/akt信号传导通路与鼻咽癌侵袭转移之间的对应关系。方法选择我院及遵义医学院所收集的存档石蜡标本共计50例作为分析对象,25例标本为无淋巴道转移的鼻咽癌组织,25例标本为有淋巴道转移的鼻咽癌组织,分别设置为对照组以及观察组。所有标本均进行HE染色以及免疫组化染色处理,对处理结果进行观察分析。结果对照组患者P13k与E-cad表达呈负相关关系,akt与E-cad表达呈负相关关系,P3k与E-cad表达呈负相关关系,Pakt与E-cad表达无明显相关性关系,P>0.05,无统计学意义。结论 pi3k/akt信号传导通路的激活与鼻咽癌侵袭转移之间存在相关关系,值得临床重视。

关键词： pi3k/akt信号传导通路鼻咽癌侵袭转移关系

pi3k/akt信号传导通路及其在结直肠癌中的研究进展

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临床肿瘤学杂志 2011年第6期16卷 558-561页

作者：肖秀英于宝华上海市徐汇区中心医院肿瘤科上海200031 复旦大学附属肿瘤医院病理科 200032

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近十年来,结直肠癌在我国的发病率呈逐年上升的趋势。已有研究表明,pi3k/akt信号传导通路是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一。随着pi3k/akt信号通路在结直肠癌发生、发展中的研究不断深... 详细信息

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近十年来,结直肠癌在我国的发病率呈逐年上升的趋势。已有研究表明,pi3k/akt信号传导通路是与细胞增殖和细胞凋亡关系最密切的信号传导通路之一。随着pi3k/akt信号通路在结直肠癌发生、发展中的研究不断深入,该通路对结直肠癌发生、发展及治疗药物的研发具有十分重要的价值。本文就pi3k/akt信号传导通路在结直肠癌发生、发展和治疗中的作用以及机制的研究进展作一综述。

关键词： pi3k/akt信号传导通路结直肠癌

pi3k/akt信号传导通路与肿瘤多药耐药研究进展

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中华临床医师杂志（电子版） 2011年第2期5卷 96-99页

作者：张晔刘云鹏中国医科大学附属第一医院肿瘤内科辽宁沈阳110001

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase（pi3k）/protein kinase B（akt）,pi3k/akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗... 详细信息

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase（pi3k）/protein kinase B（akt）,pi3k/akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用。近年来,关于pi3k/akt信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点。akt是pi3k/akt通路中的关键性效应分子,多种肿瘤组织中都有akt的过度表达和活化。

关键词： pi3k/akt信号传导通路肿瘤多药耐药 pi3k/akt信号通路 pi3k/akt通路磷脂酰肌醇3-激酶促进细胞生长化疗耐药药物耐药性

基于pi3k/akt信号传导通路探究骨痹合剂对膝关节骨关节炎小鼠细胞凋亡和相关蛋白水平表达的影响

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实用医学杂志 2021年第15期37卷 1916-1920页

作者：廖建青吕静张英杰谢邦马富文王琦云南中医药大学昆明650500 云南省中医医院昆明650021

目的观察具有活血通络作用的骨痹合剂对膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,kOA)小鼠关节软骨细胞凋亡和pi3k/akt信号传导通路相关蛋白表达水平的影响。方法采用前交叉韧带切断法建立kOA模型小鼠,造模8周后分别予骨痹合剂、氨糖美辛肠... 详细信息

目的观察具有活血通络作用的骨痹合剂对膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,kOA)小鼠关节软骨细胞凋亡和pi3k/akt信号传导通路相关蛋白表达水平的影响。方法采用前交叉韧带切断法建立kOA模型小鼠,造模8周后分别予骨痹合剂、氨糖美辛肠溶片溶于同体积蒸馏水、等体积的生理盐水灌胃,取双膝关节软骨进行检测。通过甲苯胺蓝染色对kOA软骨进行形态学观察,TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡情况、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组软骨细胞中pi3k/akt/mTOR蛋白的表达水平。结果与生理盐水组比较,骨痹合剂组与氨糖美辛组甲苯胺蓝染色较深,软骨组织有明显改善,细胞凋亡明显减少(Ppi3k、akt和mTOR蛋白表达均下降(Ppi3k、akt和mTOR蛋白表达均下降(PkOA小鼠软骨细胞都具有明显的改善作用,骨痹合剂能通过抑制pi3k/akt信号通路,减少软骨细胞凋亡,缓解膝关节骨关节炎进一步发展。

关键词：膝关节骨关节炎软骨细胞凋亡活血通络法骨痹合剂 pi3k/akt信号传导通路

苦参碱对肿瘤坏死因子-α诱导胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞pi3k/akt信号传导通路的影响

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风湿病与关节炎 2022年第8期11卷 1-5,12页

作者：刘琼丁超华白菊芳关金花孙娜娜吕杨张乐王凤春杨永生内蒙古医科大学内蒙古呼和浩特010110 呼和浩特市蒙医中医医院内蒙古呼和浩特010000

目的:探讨苦参碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)中磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)/蛋白激酶B(PkB/akt)信号传导通路相关蛋白及基因表达的影响。方法:按照随机数字表法将40只SD大鼠分为正常对... 详细信息

目的:探讨苦参碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)中磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)/蛋白激酶B(PkB/akt)信号传导通路相关蛋白及基因表达的影响。方法:按照随机数字表法将40只SD大鼠分为正常对照组、炎症细胞组、苦参碱组、抑制剂组,每组10只。除正常对照组外,其余各组通过牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型。断椎法处死大鼠,剥离大鼠滑膜组织,提取FLS,并进行细胞培养、鉴定。正常对照组不加任何药物干预,炎症细胞组仅予TNF-α干预,苦参碱组予TNF-α及苦参碱干预,抑制剂组予TNF-α及LY294002干预。Western Blot测定各组CIA大鼠FLS中p-pi3k、p-akt、akt蛋白的表达程度,RT-PCR测定pi3k mRNA、akt mRNA的表达程度。结果:与正常对照组比较,其余各组CIA大鼠FLS数量明显增多;免疫荧光测定显示绝大多数细胞染色呈阳性表达。与炎症细胞组比较,苦参碱组、抑制剂组p-pi3k、p-akt蛋白表达程度下降(Ppi3k mRNA、akt mRNA表达程度受到明显抑制(Pakt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苦参碱对CIA大鼠FLS中pi3k/akt信号传导通路的过度活化具有抑制作用。

关键词：类风湿关节炎苦参碱 pi3k/akt信号传导通路成纤维样滑膜细胞胶原诱导性关节炎

淫羊藿苷调控急性淋巴细胞白血病pi3k/akt信号传导通路的实验研究

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中国中医急症 2018年第6期27卷 1000-1003,1011页

作者：王黎柯鸿湖北医药学院附属人民医院湖北十堰442000

目的观察淫羊藿苷对近交系DBA小鼠急性淋巴细胞白血病磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)/蛋白激酶B(akt)信号传导通路的影响并分析其机制。方法近交系DBA/2小鼠60只,采用皮下注射急性淋巴细胞白血病细胞系L1210细胞以建立L1210白血病模型,然后随... 详细信息

目的观察淫羊藿苷对近交系DBA小鼠急性淋巴细胞白血病磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)/蛋白激酶B(akt)信号传导通路的影响并分析其机制。方法近交系DBA/2小鼠60只,采用皮下注射急性淋巴细胞白血病细胞系L1210细胞以建立L1210白血病模型,然后随机均分为模型对照组、阳性对照组和淫羊藿苷2.5 mL/kg组、淫羊藿苷5 mL/kg组和淫羊藿苷10 mL/kg组(n=12只),1周后淫羊藿苷2.5 mL/kg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组灌胃给予对应剂量的淫羊藿苷,模型对照组灌胃给予等体积0.9%氯化钠注射液对照,阳性对照组灌pi3k/akt抑制剂LY294002对照。治疗3周后采用人工法计数尾静脉血细胞分类及血象;取小鼠肝、脾组织,采用Westem blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及磷酸化蛋白激酶(p-akt)蛋白表达,实时定量PCR(RT-PCR)检测组织同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)m RNA和akt m RNA的表达。结果与模型对照组比较,淫羊藿苷2.5 mL/kg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组尾静脉血细胞淋巴细胞、白细胞和L1210细胞总数均明显降低,而中性粒细胞升高(Pakt蛋白和akt m RNA蛋白表达水平显著降低,PTEN蛋白和PTEN m RNA则高表达(Pkg组与2.5 mL/kg组比较(Pkg与5 mL/kg组和2.5 mL/kg组比较,差异有统计学意义(Pkg组、5 mL/kg组和10 mL/kg组小鼠存活数、体质量、肝脾和皮下瘤重与模型对照组比较(Ppi3k/akt信号传导通路而实现抑制L1210细胞增殖效应,且这种作用呈剂量依赖性。

关键词：急性淋巴细胞白血病淫羊藿苷 pi3k/akt信号传导通路近交系DBA小鼠

pi3k/akt信号传导途径与甲状腺结节关系的研究

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PI3K/Akt信号传导途径与甲状腺结节关系的研究

作者：伊鹏飞天津医科大学

学位级别：硕士

目的：国外研究显示在甲状腺结节性病变中可发现pi3k/akt信号传导通路的异常激活。本实验旨在通过对此信号传导通路中相关分子表达情况的研究,进一步明确甲状腺结节的病因、发病机制,进而探索甲状腺结节性病变的分子生物学防治策略。 ... 详细信息

目的：国外研究显示在甲状腺结节性病变中可发现pi3k/akt信号传导通路的异常激活。本实验旨在通过对此信号传导通路中相关分子表达情况的研究,进一步明确甲状腺结节的病因、发病机制,进而探索甲状腺结节性病变的分子生物学防治策略。方法：研究对象分为甲状腺结节病变组和正常对照组,甲状腺结节病变组为2008年12月-2009年8月期间在济宁医学院附属医院乳甲外科行手术治疗的甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡型腺瘤以及结节性甲状腺肿患者中各随机选择30例。正常甲状腺组织取自甲状腺滤泡型腺瘤旁组织（30例）。各组均未经过化疗、放疗及内分泌治疗。记录所有研究对象的姓名、性别、年龄等基本病例资料,统计甲状腺结节组中甲状腺乳头状癌亚组的淋巴结转移情况及对甲状腺包膜的浸润程度。每例标本收集100mg左右的新鲜组织各两块（癌取癌肿块,腺瘤取腺瘤组织,结甲选取结节肿物）,取材后10分钟内迅速保存于液氮中,后转移保存到-80℃冰箱备用,同时收集以上标本的存档蜡块。用RT-PCR方法测定上述四种组织中pi3k/akt信号传导途径中pi3kmRNA、aktmRNA的表达;应用免疫组化法和Western-blot法测定甲状腺乳头样癌、甲状腺滤泡型腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中pi3k、akt、p-akt蛋白的表达。结果：①一般资料结果显示,正常对照组年龄为37.47±6.79岁,结甲组40±8.51岁,乳头状甲状腺癌37.13±6.36岁,各组间年龄、性别比较均无统计学差异（P＞0.05）。②RT-PCR结果显示,甲状腺结节中pi3kmRNA和aktmRNA的含量较正常组织明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。③免疫组化及Western Blot结果显示,甲状腺乳头状癌、甲状腺滤泡型腺瘤、结节性甲状腺肿pi3k、akt、pakt的蛋白的表达较正常甲状腺组织明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,甲状腺结节组中尤以甲状腺乳头状癌升高为著,与甲状腺滤泡型腺瘤、结节性甲状腺肿亚组相比有统计学差异（P＜0.05）,而甲状腺滤泡型腺瘤和结节性甲状腺肿之间无显著性差异（P＞0.05）。④相关分析显示,在研究的甲状腺组织中,蛋白pi3k和akt呈正相关（r=0.992,P＜0.001）;pi3k和pakt呈正相关（r=0.974,P＜0.001）;akt和pakt呈正相关（r=0.976,P＜0.001）;pi3kmRNA和aktmRNA呈正相关（r=0.978,P＜0.001）。在甲状腺乳头状癌中,pi3k、akt、pakt三种蛋白的含量与病人年龄、性别无关（P＞0.05）,而与淋巴结转移和对包膜的浸润程度有关（P＜0.05）。结论：①pi3kmRNA、aktmRNA的表达及pi3k、akt、pakt蛋白的含量在乳头状癌、腺瘤和结甲中比正常甲状腺中明显升高,说明在这些甲状腺结节性病变中存在pi3k/akt信号传导通路的异常激活。②pi3kmRNA、aktmRNA及pi3k、akt、pakt蛋白在乳头状癌中升高最为显著,说明在甲状腺乳头状癌等恶性疾病中此通路激活水平远远高于结甲、腺瘤等良性甲状腺结节。表明在甲状腺结节性疾病中,pi3k/akt信号传导途径中相关分子的激活程度与甲状腺结节的良恶性相关。③甲状腺乳头状癌组按照性别、年龄、是否包膜侵犯及淋巴结转移等因素进行亚组分析显示,pi3k、akt和pakt蛋白的表达在有包膜侵犯亚组及淋巴结转移亚组显著升高,而在不同性别、年龄亚组间无明显差异。

关键词：甲状腺结节甲状腺乳头状癌甲状腺滤泡状腺瘤结节性甲状腺肿 pi3k/akt信号传导通路

pi3k/akt信号转导通路与肿瘤发生相互作用的机制研究

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中国现代医药杂志 2017年第7期19卷 98-101页

作者：葛信艳黄玮李瑞琴刘伟河南中医药大学基础医学院河南郑州450046

信号转导通路对于维持细胞功能起着重要的作用，一直以来是人们广泛研究的热点之一。近年来的研究发现，pi3k/akt信号转导通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关，在鼻咽癌、胃癌、卵巢癌等中都有研究[1~3]，其影响肿瘤细胞的增殖能力... 详细信息

信号转导通路对于维持细胞功能起着重要的作用，一直以来是人们广泛研究的热点之一。近年来的研究发现，pi3k/akt信号转导通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关，在鼻咽癌、胃癌、卵巢癌等中都有研究[1~3]，其影响肿瘤细胞的增殖能力，诱导细胞的分化，抑制凋亡发生，促进肿瘤血管形成，促进肿瘤细胞的侵袭和转移以及在放化疗耐药中发挥了重要作用[4]。本研究就pi3k/akt信号传导通路与肿瘤发生相互作用机制进行综述，为防治肿瘤提供理论依据。

关键词： pi3k/akt信号传导通路信号转导通路肿瘤发生相互作用肿瘤血管形成细胞功能肿瘤细胞侵袭和转移