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临床心血管病杂志 2021年第10期37卷 952-958页

作者：傅强邓小芳 Akindavyi Gael 刘云峰王慧敏邓钰莹李志樑邓婷南方医科大学深圳医院心内科广东深圳518110 南方医科大学珠江医院心内科广东省人民医院新生儿科深圳大学平湖医院心内科广州中医药大学第一附属医院心内科

目的:通过iTRAQ联合Label-free法筛选主动脉夹层潜在诊断标志物。方法:入选急性主动脉夹层及对照组(急性冠状动脉综合征)血清各50例。将两组患者中各15例血清标本用于iTRAQ及Label-free分析筛选表达差异蛋白。对所有收集血清进行差异蛋... 详细信息

目的:通过iTRAQ联合Label-free法筛选主动脉夹层潜在诊断标志物。方法:入选急性主动脉夹层及对照组(急性冠状动脉综合征)血清各50例。将两组患者中各15例血清标本用于iTRAQ及Label-free分析筛选表达差异蛋白。对所有收集血清进行差异蛋白的免疫吸附测定(ELISA)验证。结果:两组血清标本使用iTRAQ方法共鉴定出84种差异表达蛋白质,Label-free方法共鉴定有或无差异蛋白20种。通过Panther软件进行生信分析与主动脉夹层发病机制9种相关蛋白作为候选生物标志物。进行ELISA验证后得出2种差异蛋白Lumican、pi16有统计学差异,且特异性和敏感性较高。结论:蛋白Lumican、pi16可能成为主动脉夹层潜在的诊断标志物。

关键词：主动脉夹层蛋白质组学 iTRAQ Label-free Lumican pi16

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肽酶抑制蛋白16调控脂肪来源间充质干细胞化成脂肪细胞的分子机制

肽酶抑制蛋白16调控脂肪来源间充质干细胞化成脂肪细胞的分子机制

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作者：杨芸南京医科大学

学位级别：硕士

背景:目前无论发达国家或者中国,肥胖病人比例和流行程度已经成为一个严重公共卫生问题,因为过度肥胖病人常常继发多种并发症,如心血管疾病、2型糖尿病、高血压、癌症等。肥胖是一种常见的慢性代谢疾病,主要表现在脂肪细胞的增大或者脂... 详细信息

背景:目前无论发达国家或者中国,肥胖病人比例和流行程度已经成为一个严重公共卫生问题,因为过度肥胖病人常常继发多种并发症,如心血管疾病、2型糖尿病、高血压、癌症等。肥胖是一种常见的慢性代谢疾病,主要表现在脂肪细胞的增大或者脂肪细胞增多的病理表现。其中脂肪组织除了储存和调动能量外,也是一个重要内分泌器官调节全身代谢水平。脂肪组织中除绝大部分成熟的脂肪细胞外,还包括如巨噬细胞、成纤维细胞、间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCS)和脂肪前体细胞。所有这些细胞都位于血管基质部分(Stromal vascular fraction,SVF),不同脂肪组织中,血管基质部分决定了细胞种类和表型的差异。在遗传、环境、饮食等因素作用下改变血管基质特定微环境,间充质干细胞和脂肪前体细胞呈现出增殖潜能并向成熟的脂肪细胞分化。脂肪细胞分化是一个复杂多步的过程,涉及一系列转录因子调控关键蛋白表达和促进脂肪细胞发育。对于发育调控研究机制愈加深入,疾病发病机制解释更加宽广的基础上。尤其在脂肪组织中发现一种新的转录因子肽酶抑制蛋白16(Peptidase Inhibitor 16,pi16),pi16拥有调节细胞外基质功能并作为转录因子参与多种基因的表达。因此,以脂肪间充质干细胞作为研究对象,深入探索pi16在脂肪细胞分化中作用,为寻找肥胖防治新靶点、新机制提供新思路,并可能为肥胖及相关代谢类疾病提供潜在分子靶点。目的:本研究的主要目的:1.通过观察检测pi16在脂肪间充质干细胞及其诱导分化为脂肪细胞、高脂饮食(High fatdiet,HFD)诱导肥胖小鼠脂肪组织中表达特征,2.观察pi16过表达对于HFD诱导肥胖小鼠功能影响,3.研究pi16对于间充质干细胞成脂分化的影响,并探索其调控成脂分化的机制,4.探索肥胖中脂肪分化机制影响和临床治疗的潜在新靶点。方法:1.通过提取原代人内脏脂肪、大鼠皮下脂肪和内脏脂肪来源的间充质干细胞使用经典的“鸡尾酒”方案:胰岛素、地塞米松、罗格列酮、1-甲基-3-3异丁基黄嘌呤(IBMX)诱导各类间充质干细胞分化为成熟脂肪细胞,2.高脂饮食诱导肥胖小鼠,获取皮下和内脏脂肪组织,采用Western Blot技术检测pi16在脂肪细胞、HFD小鼠脂肪组织中表达水平,3,体外采用pi16腺病毒感染间充质干细胞,油红O染色观察成脂分化后脂滴形成情况,定量检测成熟细胞中甘油三酯和胆固醇含量,4.检测参与脂肪细胞分化关键基因(PPARγ、C/EBP-α、FAS、ACC、FABP4)蛋白表达水平。结果:***16在原代人和大鼠脂肪来源的间充质干细胞,诱导分化第三天中呈现低表达模式,***16在HFD诱导肥胖小鼠中,皮下,棕色,内脏脂肪组织中表达量低于正常饮食喂养的小鼠,3.与WT野生型小鼠在HFD诱导肥胖后相比,pi16转基因小鼠葡萄糖耐量实验及胰岛素耐量实验各时间点血糖明显改善,4.过表达pi16明显抑制间充质干细胞诱导的成熟脂肪细胞脂滴形成状态,5.过表达pi16明显减少甘油三酯、胆固醇合成,6.过表达pi16下调脂肪分化关键基因PPARγ、C/EBP-α、FAS、ACC、FABP4蛋白水平的表达,7.过表达pi16抑制经典的胰岛素信号通路,抑制PTEN和AKT表达量,8.并抑制促脂肪分化的P38的磷酸化,增强Erk和Jnk磷酸化,抑制成脂分化的作用。结论:1.通过检测发现pi16在不同脂肪细胞和肥胖小鼠中低表达,提示pi16的确与肥胖相关,***16明显改善HFD诱导的体重增加和糖代谢功能,***16过表达抑制原代人间充质干细胞成脂分化,***16通过抑制PTEN和AKT表达从而抑制经典的脂肪分化胰岛素信号通路,***16通过促进Erk和Jnk的表达,抑制P38表达调节MAPK通路从而抑制脂肪分化过程。

关键词： pi16 MSC 脂肪细胞分化肥胖转录调控 AKT

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肽酶抑制蛋白16抑制血管紧张素Ⅱ诱导的高血压和血管重构的机制研究

肽酶抑制蛋白16抑制血管紧张素Ⅱ诱导的高血压和血管重构的机制研...

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作者：沈烨娇南京医科大学

学位级别：硕士

背景:高血压是临床最常见的慢性心血管病。长期高血压引发的血管重塑是高血压疾病进展和导致心血管并发症的重要原因。高血压引起的血管重构主要表现为血管壁肥厚、细胞外基质增多和纤维化等,该过程涉及血管平滑肌增殖、炎症反应、细胞... 详细信息

背景:高血压是临床最常见的慢性心血管病。长期高血压引发的血管重塑是高血压疾病进展和导致心血管并发症的重要原因。高血压引起的血管重构主要表现为血管壁肥厚、细胞外基质增多和纤维化等,该过程涉及血管平滑肌增殖、炎症反应、细胞凋亡和细胞外基质增多等众多细胞生物学过程。我们的前期研究发现一种功能未知的新蛋白---肽酶抑制蛋白16(Peptidase inhibitor 16,pi16)在血管中高表达。pi16在血管重构中是否发挥作用目前尚不清楚。目的:通过在体内外AngⅡ处理模型中过表达pi16来研究pi16对Ang Ⅱ诱导的高血压及主动脉血管重构中的作用及其分子机制,为临床高血压与血管重构的防治寻找潜在新靶点。万法:1.通过对pi16转基因小鼠皮卜微量泵人AngⅡ建立高血压及血管重构模型,采用尾动脉法测量血压,胸主动脉组织马松染色及Western Blot、PCR等技术评价小鼠主动脉纤维化程度及相关分子的表达;2.在体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞中转染pi16腺病毒过表达pi16,应用Western Blot、qPCR技术检测纤维化相关分子的表达,评价pi16对平滑肌细胞纤维化的作用;3.应用免疫共沉淀、免疫荧光及Chip技术等探索pi16作用的具体分子机制。结果:***Ⅱ的刺激后野生型小鼠血压显著升高,而pi16转基因小鼠的血压及血管纤维化水平均显著低于野生型小鼠;2.与对照组细胞相比,过表达pi16显著抑制AngⅡ诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞纤维化相关分子如TGF-β,CTGF等的表达;3.免疫共沉淀结果表明pi16能够直接与组蛋白H3K79位点的特异性甲基化转移酶DOT1L结合,并升高H3K79位点的甲基化水平(包括单甲基化、二甲基化和三甲基化);4.进一步Chip分析表明pi16能增加甲基化H3K79对ATF4、KLF4等转录因子启动子区域的结合,激活其核酸和蛋白水平的表达,并抑制了 KLF4下游AT1受体;5.在体内外通过小分子化合物抑制DOT1L的功能后,pi16对AngⅡ诱导的高血压及血管纤维化的保护作用明显减弱。结论:过表达pi16能显著改善AngⅡ诱导的小鼠高血压和血管纤维化程度,其主要机制为:pi16通过与组蛋白H3K79位点的甲基化转移酶DOT1L的结合升高了 H3K79位点的甲基化水平,在此基础上通过促进其ATF4、KLF4等关键基因的转录与表达,抑制了 AT1受体的表达,最终改善了 AngⅡ诱导的平滑肌纤维化。

关键词： pi16 血管紧张素Ⅱ 高血压血管重构 DOT1L KLF4

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