检索结果-南通市图书馆

Science China(Life Sciences) 2015年第6期58卷 531-540页

作者： CHEN Li TAO Yong JIANG YanRong Department of Ophthalmology People's Hospital Peking University key Laboratory of Vision Loss and Restoration Ministry of Education Beijing key Laboratory of Diagnosis and Therapy of Retinal and Choroid Diseases

This paper aims to observe the changes of the inflammatory cytokines in microglial BV2 cells stimulated by apelin, and inves- tigate the mechanism of inflammatory cytokines secretion after apelin stimulation. Immunofluorescence and quantitative re- al-time PCR were performed to observe expression of TNF-α, IL-Iβ, IL-10, MIP-let, and MCP-1 in BV2 cells. Western blot was used to investigate the expression of phosphorylation pi-3k/akt and phosphorylation Erk signaling pathways in BV2 cells after stimulation by apelin. Furthermore, pi-3k/akt inhibitor （LY294402） and Erk inhibitor （U0126） were used as antagonists to detect the secretion mechanisms of cytokines in BV2 cells stimulated by apelin. Exogenous recombinant apelin activated the expression of TNF-α, IL-1β, MCP-1 and MIP-1α in BV2 cells by the detection of fluorescence expression and mRNA. Apelin also unregulated the protein expression of p-pi-3k/akt and p-Erk in BV2 cells induced by apelin. LY294002 and U0126 in- hibited activation of p-pi-3k/akt and p-Erk expression by Western blot and attenuated the expression of inflammation factors in BV2 cells by fluorescence staining. This study demonstrates that apelin is a potential activator of inflammation factors through the pi3k/akt and Erk signaling pathway and is potential therapeutically relevant to inflammatory responses of micro- glia cells.

关键词： apelin inflammation cytokines BV2 pi-3k/akt MEk/Erk

pi-3k/akt通路的下游因子磷酸二酯酶3B及其临床研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞生物学杂志 2007年第6期29卷 800-804页

作者：曹文石放雄南京农业大学动物科学技术学院南京210095

在胰岛素诱导的pi-3k/akt通路中,磷酸二酯酶3B(phosphodiesterase type3B,PDE3B)作为akt的下游因子,通过调控胞内cAMP浓度,来调节抗糖原水解、抗脂解以及葡萄糖转运等一系列生理过程。最近研究表明PDE3B的活性及表达的变化是产生胰岛素... 详细信息

在胰岛素诱导的pi-3k/akt通路中,磷酸二酯酶3B(phosphodiesterase type3B,PDE3B)作为akt的下游因子,通过调控胞内cAMP浓度,来调节抗糖原水解、抗脂解以及葡萄糖转运等一系列生理过程。最近研究表明PDE3B的活性及表达的变化是产生胰岛素抵抗的关键因素之一。因此,PDE3B及影响PDE3B活性的一些物质将可能成为治疗2型糖尿病、肥胖症等以胰岛素抵抗为病理基础疾病的重要靶因子。

关键词：磷酸二酯酶3B pi-3k/akt 胰岛素抵抗 2型糖尿病

硒化壳聚糖对k562/ADM细胞增殖的影响及其与pi-3k/akt信号途径的关系(英文)

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

时珍国医国药 2012年第8期23卷 2031-2033页

作者：邓守恒潘东风李芳李林均王贤和陈萍湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心湖北十堰442000

目的研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株k562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与pi-3k/akt信号途径的关系。方法硒化壳聚糖作用k562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用... 详细信息

目的研究硒化壳聚糖对耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞株k562/ADM增殖的影响,探讨这种影响与pi-3k/akt信号途径的关系。方法硒化壳聚糖作用k562/ADM细胞后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖和存活的影响,计算逆转倍数;应用免疫印迹法检测p-akt蛋白表达的改变。结果随着硒化壳聚糖浓度的增加,细胞增殖抑制率相应增加,存活率相应减少,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够下调p-akt表达(Pk562/ADM细胞的增殖抑制作用(Ppi-3k/akt信号途径对耐药白血病细胞株k562/ADM产生增殖抑制和多药耐药逆转作用。

关键词：硒化壳聚糖 k562/ADM细胞增殖 pi-3k/akt

山茱萸对T2DM小鼠糖脂代谢及骨骼肌pi-3k/akt信号通路的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山茱萸对T2DM小鼠糖脂代谢及骨骼肌PI-3K/AKT信号通路的影响

作者：白嫄陕西师范大学

学位级别：硕士

中药山茱萸是我国传统药用植物山茱萸(Cornus officinalis *** Zucc.)的去核干燥成熟果肉,味酸、涩,性微温,归肝、肾经,有补肝益肾、涩精固脱之功效,主治内热消渴、大汗虚脱、腰膝酸痛等症状。现代药理学研究表明,山茱萸具有改善2型糖... 详细信息

中药山茱萸是我国传统药用植物山茱萸(Cornus officinalis *** Zucc.)的去核干燥成熟果肉,味酸、涩,性微温,归肝、肾经,有补肝益肾、涩精固脱之功效,主治内热消渴、大汗虚脱、腰膝酸痛等症状。现代药理学研究表明,山茱萸具有改善2型糖尿病及其并发症的作用,但是多数研究停留在证明山茱萸降血糖的功效,并未对其降血糖作用机制进行深入研究及阐述,从而限制了山茱萸在临床治疗糖尿病中的应用。本研究采用高脂高糖膳食诱导联合注射STZ建立2型糖尿病小鼠模型,对比山茱萸纳米粉及醇提物对T2DM小鼠糖脂代谢的一般体征、生化指标(血糖值、血脂水平、胰岛素含量、炎症因子及氧化因子含量)、胰腺和肝脏组织病理学变化、骨骼肌pi-3k/akt信号通路中关键基因mRNA及蛋白表达量的影响,研究山茱萸对T2DM小鼠的降脂降糖作用,并初步探讨其作用机制。主要结果及结论如下:(1)糖脂代谢及胰腺病理学检测结果显示:山茱萸纳米粉及醇提物能够显著降低T2DM小鼠空腹血糖水平、餐后血糖水平、AUC值、FINS、HOMA-IRI值及血清TC、TG、LDL-C含量,升高HOMA-ISI值、HOMA-β值及血清HDL-C含量,改善胰腺组织中空泡变性和胰岛萎缩症状,表明山茱萸纳米粉及醇提物可以增强胰岛β细胞功能,促进胰岛素分泌,缓解胰岛素抵抗,从而调节T2DM小鼠体内糖耐量受损及血脂异常症状,修复受损胰腺组织。(2)肝脏炎症及氧化应激因子含量检测结果显示:山茱萸纳米粉组及醇提物组小鼠肝脏组织中炎症因子CRP、TNF-α、IL-6和氧化因子MDA含量减少,T-SOD活性增强,肝脏组织脂肪变性和细胞肿胀程度减轻,表明山茱萸纳米粉及醇提物可以抵抗T2DM小鼠肝脏炎症反应,增强其抗氧化能力。(3)小鼠骨骼肌pi-3k/akt信号转导通路中关键基因mRNA及蛋白表达量检测结果显示:山茱萸纳米粉及醇提物可以上调T2DM小鼠骨骼肌基因GLUT-4、INSR、pi-3k、aktmRNA的表达量,促进T2DM小鼠骨骼肌GLUT-4、蛋白的表达,增加INSR、pi-3k和akt的磷酸化水平,从而促进T2DM小鼠骨骼肌组织中胰岛素与胰岛素受体的结合及葡萄糖的转运,缓解T2DM小鼠体内胰岛素抵抗状态,降低其血糖值。(4)实验结果表明同等剂量组相比,山茱萸醇提物对T2DM小鼠糖脂代谢的改善作用略优于山茱萸纳米粉组。综上可知,山茱萸具有良好的改善T2DM小鼠糖脂代谢相关指标的作用。机制研究发现,山茱萸可以调节外周组织器官糖脂代谢过程中的关键基因表达,实现对2型糖尿病模型小鼠降脂降糖的作用。其中主要包括上调胰岛素信号转导通路pi-3k/akt中关键靶基因GLUT-4、INSR、pi-3k、akt mRNA的表达量和GLUT-4、p-INSR、p-pi-3k、p-akt蛋白的表达量,促进T2DM小鼠骨骼肌组织中胰岛素与胰岛素受体的结合及葡萄糖的转运。最终表现出增强胰岛β细胞功能,缓解胰岛素抵抗,控制高血糖高血脂症状,保护胰腺和肝脏组织,减轻肝脏炎症反应和氧化应激损伤,延缓2型糖尿病及其并发症的发生与发展。

关键词：山茱萸 2型糖尿病胰岛素抵抗 pi-3k/akt

pi-3k/akt信号传递途径与T细胞反应

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

国外医学（免疫学分册） 2004年第2期27卷 97-100页

作者：朱光旭朱利民余争平中国人民解放军第三军医大学预防医学院军事劳动卫生学教研室，重庆400038 中国人民解放军第三军医大学预防医学院军事劳动卫生学教研室

pi 3k/akt信号传递途径是T细胞最为重要的信号转导途径之一 ,与T细胞的增殖、分化、活化和抗病毒能力等密切相关 ,其功能主要表现为与CD2 8协同刺激信号一道促进T细胞活化 ;调节周期蛋白和促T细胞增殖因子等表达使T细胞周期正常进行 ;... 详细信息

pi 3k/akt信号传递途径是T细胞最为重要的信号转导途径之一 ,与T细胞的增殖、分化、活化和抗病毒能力等密切相关 ,其功能主要表现为与CD2 8协同刺激信号一道促进T细胞活化 ;调节周期蛋白和促T细胞增殖因子等表达使T细胞周期正常进行 ;通过调控凋亡信号转导相关激酶活性和凋亡调控因子表达以拮抗P5 3、Fas等诱导的T细胞凋亡以及增强T细胞的抗病毒能力等。

关键词： pi-3k/akt 信号传递细胞凋亡 CD28

三七皂苷R1对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及组织中ROS、pi3k/akt信号转导通路及蛋白AkR1-C3的作用机制研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

三七皂苷R1对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及组织中ROS、PI3K/AKT...

作者：麻艺群昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]瘢痕疙瘩是继发于皮肤创伤、炎症后的一种病理性愈合,其发病机制不明确,前期研究显示磷酯酸肌醇-3 激酶/蛋白激酶 B(Phosphatidylinositol 3-kinase/Protein kinase B,pi3k/akt)信号通路在增生性瘢痕形成过程中发挥作用,线粒体应... 详细信息

[目的]瘢痕疙瘩是继发于皮肤创伤、炎症后的一种病理性愈合,其发病机制不明确,前期研究显示磷酯酸肌醇-3 激酶/蛋白激酶 B(Phosphatidylinositol 3-kinase/Protein kinase B,pi3k/akt)信号通路在增生性瘢痕形成过程中发挥作用,线粒体应激可能导致瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡异常核心事件之一。由于三七皂苷R1具有抗肝细胞纤维化的作用[1],三七皂苷R1是否能影响瘢痕疙瘩的增殖?其可能的作用机制是什么?本文通过三七皂苷R1干预体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,检测pi3k/akt通路相关蛋白及mRNA、ROS、AkR1-C3的表达,探讨三七皂苷R1抑制体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的可能机制,为进一步了解瘢痕疙瘩发病机制和临床药物作用研究提供实验依据。[方法]1、原代培养成纤维细胞(Fibroblast,FB);实验分组为:瘢痕疙瘩组:对照组,实验组:三七皂苷R1组、LY294002组、NAC组;正常皮肤组:对照组,实验组:三七皂苷R1组、LY294002组、NAC组。用不同浓度LY294002干预瘢痕疙瘩成纤维细胞24小时后,通过CCk-8(Cell Counting kit-8)法进行细胞增殖-毒性检测,筛选LY294002最佳药物浓度;用120ug/ml三七皂苷R1干预瘢痕疙瘩成纤维细胞48小时[2]后,通过CCk-8法进行细胞增殖-毒性检测;用不同浓度NAC干预体外培养成纤维细胞1小时,通过流式细胞仪检测成纤维细胞内ROS,筛选NAC最佳药物浓度。2、Western Blot法对三七皂苷R1、LY294002、NAC干预体外培养成纤维细胞后,akt、akt[pS473]、akt[pT308]、AkR1-C3蛋白进行定性及半定量研究。3、免疫组化法观察瘢痕疙瘩及正常皮肤组织akt、akt[pS473]、akt[pT308]、AkR1-C3的定位及半定量研究。4、q-PCR法对三七皂苷R1、LY294002、NAC干预体外培养成纤维细胞后akt、akt[pS473]、akt[pT308]、AkR1-C3mRNA水平进行定性及半定量研究。5、流式细胞仪检测三七皂苷R1、LY294002干预后体外培养成纤维细胞内ROS。[结果]1、体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,应用组织块法分离原代培养成纤维细胞,瘢痕疙瘩组织块5-7天可见边缘有梭型细胞爬出,正常皮肤8-10有细胞爬出。细胞形态呈梭形,波形蛋白免疫细胞化学染色,显示细胞胞浆内见大量棕黄色颗粒,细胞核为蓝色。鉴定结果为体外成纤维细胞培养成功。2、CCk 8法检测结果瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast,kFB)经浓度分别为 5mmol/L,10mmol/L,15mmol/L,20mmol/L,25mmol/L,30mmol/L,35mmol/L,40mmol/L,45mmol/L,50mmol/L LY294002 干预 24 小时,OD 值为分别为 5mmol/L(1.49±0.11),l0mmol/L(1.51 ±0.08),15mmol/L(1.37±0.10),20mmol/L(1.39±0.06),25mmol/L(1.37±0.10),30mmol/L(1.23±0.09),35mmol/L(1.23±0.07),40mmol/L(1.18±0.10),45mmol/L(1.14±0.08),50mmol/L(1.18±0.09)与对照组(1.54±0.08)相比,药物浓度在15-50mmol/L之间OD值较对照组明显降低(P31±0.06)与对照组(1.53±0.06)相比明显降低(P3、流式细胞仪筛选NAC最佳药物浓度结果瘢痕疙瘩对照组ROS荧光值(0.86±0.01)较正常皮肤对照组(0.79±0.01)明显增加(t=7.839,P3)、8mM(0.78±0.01)、10mM(0.77±0.02)、12mM(0.75±0.06),当 NAC 浓度为 6mM(F=5.347,P3 ±0.07)相比,正常皮肤对照组(0.31±0.05)中 AkR1-C3 表达降低(t=7.949,pkR

关键词：瘢痕疙瘩三七皂苷 R1 pi-3k/akt AkR1-C3 ROS

异补骨脂色烯查尔酮改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗作用机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

异补骨脂色烯查尔酮改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗作用机制研究

作者：徐兰婷河南大学

学位级别：硕士

糖尿病患者中90%以上为2型糖尿病(T2DM),其主要的病理特征表现为,胰岛β细胞分泌胰岛素功能障碍,或/和靶器官对胰岛素的抵抗。近年来,T2DM炎症学说颇受关注,即T2DM是一种慢性低度炎症性疾病,持续的低度炎症反应贯穿于T2DM的发生与发展... 详细信息

糖尿病患者中90%以上为2型糖尿病(T2DM),其主要的病理特征表现为,胰岛β细胞分泌胰岛素功能障碍,或/和靶器官对胰岛素的抵抗。近年来,T2DM炎症学说颇受关注,即T2DM是一种慢性低度炎症性疾病,持续的低度炎症反应贯穿于T2DM的发生与发展。低度炎症为机体的一种亚临床炎症,是感染性炎症和自身免疫性炎症水平以下的炎症,无临床上可见的红、肿、热、痛等局部或全身症状。在T2DM易感人群中,随着老龄化和营养过剩等因素的作用,先天性免疫系统被激活,巨噬细胞和脂肪细胞等细胞分泌多种炎症因子,进而引起或加重胰岛素抵抗(IR)。大量研究表明,从天然产物中提取的活性成分可通过不同途径增加胰岛素的敏感性,对于IR有一定的改善作用。本论文对课题组从补骨脂中分离鉴定的12个化合物(补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、异补骨脂色烯查尔酮、补骨脂查尔酮、4′,5′-去氢异补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂宁、补骨脂乙素、补骨脂定、次甘草查尔酮和新补骨脂异黄酮)开展活性筛选,发现异补骨脂色烯查尔酮(IB)可明显改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取。因此,本文对该化合物IB改善IR的作用及其作用机制开展研究。本文探索了IB改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取作用与机制。(1)建立3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型。培养3T3-L1前脂肪细胞,用含有地塞米松、胰岛素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的诱导分化液将其分化为成熟的脂肪细胞,使用地塞米松建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型,并设置空白对照组、模型组、阳性对照组、药物处理组。细胞处理后,收集细胞上清液,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测细胞培养上清液中葡萄糖含量。(2)使用Western blotting法研究IB对pi-3k/akt胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、p-IRS-1、pi-3k、akt、p-akt,以及细胞膜蛋白GLUT4表达的影响。同时使用实时荧光定量PCR法检测GLUT4基因转录水平。(3)采用渥曼青霉素(pi-3k抑制剂)进一步检测IB对pi-3k/akt信号通路的影响。同时,为了研究IB改善3T3-L1脂肪细胞炎症作用与机制,开展了以下工作。(1)使用RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型,研究IB对RAW264.7巨噬细胞炎症的影响。培养RAW264.7巨噬细胞,药物预处理1 h后,使用LPS建立炎症模型。设置空白对照组、模型组、药物处理组。收集上清,使用一氧化氮试剂盒、ELISA法检测IB对炎症细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量的影响。使用实时荧光定量PCR法测定炎症因子m RNA转录水平。Western blotting法检测IB对NF-κB和MAPk信号中关键蛋白表达水平的影响。免疫荧光实验观察IB作用后p65蛋白的核移位现象。(2)使用Transwell小室检测IB对巨噬细胞向脂肪细胞迁移能力的影响。使用ELISA法、实时荧光定量PCR法检测IB对炎症脂肪细胞产生趋化因子MCP-1、MCP-1α的影响。(3)建立脂肪细胞炎症模型,探索IB对脂肪细胞炎症的影响。使用上述方法将前脂肪细胞分化成为成熟脂肪细胞后,采用TNF-α建立炎症脂肪细胞模型。设置空白对照组、模型组、药物处理组。细胞处理后,收集上清,使用ELISA法、实时荧光定量PCR法检测IB对炎症脂肪细胞分泌炎症因子的影响,以及使用Western blotting法研究IB对炎症主要信号通路JNk、NF-κB和SOCS-3相关蛋白的影响。结果显示,与模型组相比,IB可显著促进胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖摄取(Ppi-3k/akt胰岛素信号传导通路关键蛋白(pi-3k、p-IRS-1和p-akt)表达,促进GLUT4膜移位,即IB可通过激活pi-3k/akt信号通路来调控葡萄糖转运,影响葡萄糖摄取,进而改善IR。炎症实验表明,IB可抑制RAW264.7巨噬细胞向IR脂肪细胞浸润,抑制RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,及NF-κB和MAPk信号中关键蛋白(NF-κB/P65、ERk1/2、JNk和P38)磷酸化水平。同时,IB还显著抑制脂肪细胞炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β),趋化因子(MCP-1、MCP-1α)的分泌,以及炎症相关信号通路JNk、NF-κB和SOCS-3相关蛋白的表达。综上所述,IB可通过激活pi-3k/akt信号通路改善IR脂肪细胞葡萄糖摄取,并通过可抑制JNk、NF-κB和SOCS-3炎症信号通路改善脂肪细胞炎症,进而起到改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用。

关键词：异补骨脂色烯查尔酮胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞 pi-3k/akt RAW264.7巨噬细胞

PTEN基因在口腔鳞癌免疫逃逸中的作用及分子机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

PTEN基因在口腔鳞癌免疫逃逸中的作用及分子机制

作者：焦会杰河北医科大学

学位级别：硕士

目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)占口腔颌面部恶性肿瘤的90%,是最常见的恶性肿瘤。目前经治疗后OSCC的5年生存率也仅为50%-60%。近几年随着肿瘤免疫学研究的深入,人们认识到肿瘤的免疫逃逸导致了机体对肿瘤的免疫无... 详细信息

目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)占口腔颌面部恶性肿瘤的90%,是最常见的恶性肿瘤。目前经治疗后OSCC的5年生存率也仅为50%-60%。近几年随着肿瘤免疫学研究的深入,人们认识到肿瘤的免疫逃逸导致了机体对肿瘤的免疫无应答或免疫反应低下,通过对肿瘤免疫逃逸机制的了解,对临床的免疫治疗,预后判断及疗效评价具有很大的指导意义。第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(Phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)是迄今发现的第1种具有双特异性磷酸酶活性的肿瘤抑制基因,通过发挥磷酸酶作用,参与调控细胞内诸多重要的信号通路,其中包括pi3k/akt信号通路。研究发现,在人类多种肿瘤中包括口腔鳞癌均发现有PTEN的低表达或不表达等失活现象,其表达情况与肿瘤的发生﹑发展及预后有一定的相关性。本研究使用PTEN表达不同的两种口腔鳞癌细胞株和一种正常口腔黏膜细胞株,采用分子生物学的实验方法和技术,检测免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表达;使用pi3k/akt信号通路抑制剂干预后,检测免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的浓度变化。探讨PTEN失活后口腔鳞癌免疫逃逸的具体作用途径和分子靶点;揭示PTEN失活在口腔鳞癌免疫逃避中作用和分子机制。材料与方法:1.实验材料口腔鳞癌细胞株SCC-4:购置于美国ATCC公司口腔鳞癌细胞株Tca8113:购置于上海九院正常口腔黏膜细胞株HGFs(正常对照,来源于正常牙龈组织):来源于本院病理研究室2研究方法2.1采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和蛋白印迹法(WesternBlot)检测三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中PTEN蛋白的表达情况。2.2采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的含量。2.3使用pi3k的抑制剂(LY294002)干预三种细胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs),采用ELISA检测干预后免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表达变化情况。结果:1.免疫组化和Western Blot检测结果均显示正常口腔黏膜细胞株HGFs中PTEN蛋白为正常表达,口腔鳞癌细胞TCa8113中PTEN蛋白为中表达,口腔鳞癌细胞SCC-4中PTEN蛋白为低表达;***结果显示HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)浓度依次升高,且每两种细胞之间均有显著性差异(P3和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)浓度依次升高,且每两种细胞之间均有显著性差异(Ppi-3k抑制剂LY294002干预后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)浓度均降低,SCC-4降低最为显著(Ppi-3k抑制剂LY294002干预后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)浓度降低,且SCC-4降低最为显著(Ppi3k/akt实现的。

关键词： PTEN基因口腔鳞癌 pi-3k/akt IL-6 IL-10 VEGF B7-H1 免疫逃逸

siDrosha稳定细胞系的建立以及miR491-5p诱导胰腺癌细胞凋亡作用机制的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

siDrosha稳定细胞系的建立以及miR491-5p诱导胰腺癌细胞凋亡作用...

作者：郭蓉北京协和医学院

学位级别：硕士

MicroRNA(miRNA)是一类隶属于非编码RNA (non-coding RNA)大家族并可在转录后水平调控基因表达的重要小分子,长度为21～23个核苷酸,可以通过诱发mRNA降解或抑制蛋白翻译的方式负调控靶基因。到目前为止,在人类基因组中已经确定的miRNA有... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类隶属于非编码RNA (non-coding RNA)大家族并可在转录后水平调控基因表达的重要小分子,长度为21～23个核苷酸,可以通过诱发mRNA降解或抑制蛋白翻译的方式负调控靶基因。到目前为止,在人类基因组中已经确定的miRNA有650个以上,它们参与调控人类30%的蛋白表达。miRNA分子参与了包括发育、细胞分化、细胞凋亡、代谢和癌症等多种生理病理过程。基于miRNA的重要功能,近年来对miRNA的功能研究已成为科学研究的热点之一在miRNA的生物合成过程中,Drosha酶起到了非常重要的作用,它是RNaselll家族的成员,介导从pri-miRNA到-70nt pre-miRNA的加工过程。Drosha基因突变后,将会影响miRNA的正常生物合成,因此,建立Drosha基因突变细胞模型,有助于研究一些miRNA的生物学功能。本课题第一部分利用RNAi实验方法构建了293-siDrosha稳定细胞系,并探讨该稳定细胞系在miRNAs功能研究中的应用。具体研究如下：(1)将质粒pSicoR-human Drosha1转入人胚肾293细胞,用G418筛选2-3周后,获得293-siDrosha#3稳定细胞系。(2)用RT-PCR、Western blotting、real-time PCR等方法检测293-siDrosha#3稳定细胞系中Drosha基因mRNA和蛋白质表达情况。(3)用poly(A)实时定量RT-PCR方法检测野生型293细胞,Mix细胞(未克隆的293-siDrosha细胞）,293-siDrosha#3细胞(克隆的293-siDrosha细胞)中内源hsa-miR-491-5p的表达情况。本实验结果表明：(1)构建的293-siDrosha#3稳定细胞系与对照组相比,293-siDrosha#3细胞中Drosha基因的mRNA和蛋白质表达水平均显著下降。(2)通过检测内源性hsa-miR-491-5p在对照组和293-siDrosha#3细胞中表达情况,表明对照组细胞中表达的hsa-miR-491-5p是293-siDrosha#3细胞的近120倍。本实验成功构建了293-siDrosha稳定细胞系,并且证明此稳定细胞系可以作为研究一些microRNAs相关功能的模式细胞系。因为miRNA可以调控人类的生长发育、生理、病理状态,因此体液中广泛存在的miRNA可能作为研究人类生理和疾病状态的新的有效生物标志物。已经有研究表明在正常组织与病理组织中miRNA表达水平存在差异,即使是同一组织不同的分化时期,miRNA表达水平也不相同。这种差异表达也发生在肿瘤特异性miRNA上,从而帮助诊断肿瘤的组织来源和特定的肿瘤分型。研究表明miRNA对正常细胞的增殖有促进或抑制作用,因此miRNA表达异常可能诱发癌症等各种疾病。利用细胞凋亡实验研究某些miRNA对正常细胞和癌细胞增殖的影响,可能为一些疾病的诊断和治疗提供新的生物标志物。胰腺癌是一种恶性程度比较高的肿瘤,死亡率比较高而且早期临床表现不典型。近年来,胰腺癌生物标志物的研究受到了广泛的关注,其对胰腺癌早期诊断和治疗有着重要的作用。本课题第二部分实验通过生物图谱分析发现正常胰腺组织细胞中表达的hsa-miR491-5p (miR-491-5p)比胰腺癌细胞表达的高1200多倍,表明miR-491-5p在胰腺癌的发生过程中可能具有重要作用。本实验用不同剂量合成的miR-491-5p和构建的miR-491-5p的逆转录病毒载体pLNCX2-G491分别瞬时转染胰腺癌SW1990细胞,观察在niR-491-5p过表达情况下胰腺癌SW1990细胞的生长情况。具体实验如下：(1)用生物信息学软件预测出miR-491-5p在胰腺癌细胞中作用的靶基因,并用Western blotting、RT-PCR、qRT-PCR等实验证明预测靶基因的可靠性。(2)不同剂量化学合成的miR-491-5p和重组质粒pLNCX2-G491分别转染胰腺癌SW1990细胞后,用细胞流式实验和CCk-8实验分析过量表达的miR-491-5p对胰腺癌SW1990细胞增殖和凋亡的影响。(3)Western blotting实验找出miR-491-5p在胰腺癌细胞中发挥作用的信号通路。实验结果如下：(1)经生物信息学分析和Western blotting、qRT-PCR实验证明,Bcl-xL和TP53为miR-491-5p的靶基因。(2)在胰腺癌SW1990细胞中,过量表达的miR-491-5p可有效抑制靶基因Bcl-xL和TP53的mRNA和蛋白质的表达。(3)在胰腺癌SW1990细胞中,过量表达的miR-491-5p可抑制细胞增

关键词： siDrosha microRNAs 293细胞胰腺癌SW1990细胞 hsa-miR491-5p Bcl-xL TP53 STAT3 pi-3k/akt

IGF-I对视网膜新生血管形成的调控及其信号转导机制

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

国际眼科杂志 2005年第5期5卷 999-1005页

作者：李养军惠延年第四军医大学西京医院眼科全军眼科研究所中国陕西省西安市710032

视网膜新生血管形成是多种眼病的共同病理过程。IGF-1及其相关因子和信号转导机制对视网膜新生血管的形成和发展起重要的调控作用。IGF-I是一种结构和功能都与胰岛素类似的多肽类神经营养因子,具有广泛的生物学活性,与其受体结合后,能... 详细信息

视网膜新生血管形成是多种眼病的共同病理过程。IGF-1及其相关因子和信号转导机制对视网膜新生血管的形成和发展起重要的调控作用。IGF-I是一种结构和功能都与胰岛素类似的多肽类神经营养因子,具有广泛的生物学活性,与其受体结合后,能激活酪氨酸蛋白激酶,磷酸化特异性底物,激活pi-3k/akt和MAP-k依赖信号途径后导致HIF-1α、JNk/AP-1激活和VEGFmRNA表达,调控细胞的生长、增生、分化、迁移、抑制细胞凋亡,通过对IGF-I的干预,可能是预防视网膜新生血管的一个新途径。

关键词：胰岛素样生长因子-1(IGF-I) 视网膜新生血管基因调控信号转导视网膜新生血管形成信号转导机制 IGF-I 调控作用 pi-3k/akt JNk/AP-1 酪氨酸蛋白激酶神经营养因子 HIF-1α