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从pgc1-α/FNDC5/UCP1信号通路探讨淫羊藿苷对FNDC5基因敲除小鼠脂代谢的影响

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时珍国医国药 2022年第4期33卷 850-853页

作者：许世超冯艺昕黄展辉唐佩华李植书冯泓锐苏晴黄进丁富平张进广州中医药大学中西医结合基础研究中心广东广州511400

目的探究淫羊藿苷(ICA)调控pgc1-α/FNDC5/UCP1信号通路对FNDC5基因敲除模型(KO)中老年小鼠脂代谢的影响。方法50周龄野生型(WT)和KO小鼠随机分成4组:对照组、淫羊藿苷组(40mg·kg^(-1)·d^(-1))、KO模型组、KO淫羊藿苷组(40mg·kg^(-1)... 详细信息

目的探究淫羊藿苷(ICA)调控pgc1-α/FNDC5/UCP1信号通路对FNDC5基因敲除模型(KO)中老年小鼠脂代谢的影响。方法50周龄野生型(WT)和KO小鼠随机分成4组:对照组、淫羊藿苷组(40mg·kg^(-1)·d^(-1))、KO模型组、KO淫羊藿苷组(40mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃给药21天后处死。分离血清与腹股沟白色脂肪,检测血清甘油三酯(total triglyceride,TG)与总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,通过苏木素伊红染色((hematoxylin-eosin staining,H&E)染色和UCP1免疫组化检测淫羊藿苷对白色脂肪组织的影响,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测pgc1-α、FNDC5、UCP1 mRNA与蛋白水平。结果与对照组相比,KO模型组体重,皮下白色脂肪积聚程度,血清TC均显著增加,pgc1-α,FNDC5,UCP1mRNA和蛋白水平均显著降低;淫羊藿苷组体重,皮下白色脂肪积聚程度,血清TC均显著降低,pgc1-α,FNDC5,UCP1mRNA和蛋白水平均显著增加。与KO模型组相比,KO淫羊藿苷组以上指标均无显著变化。结论淫羊藿苷可能主要通过pgc1-α/FNDC5/UCP1信号通路促进白色脂肪的棕色化,从而发挥减脂减重效果。

关键词：淫羊藿苷 pgc1-α FNDC5 UCP1 基因敲除白色脂肪

反式脂肪酸通过SIRT1/pgc1-α/Nrf2信号通路介导的大鼠血管损伤

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反式脂肪酸通过SIRT1/PGC1-α/Nrf2信号通路介导的大鼠血管损伤

作者：李冉河北医科大学

学位级别：硕士

目的:本次研究主要致力于观察摄入低剂量反式脂肪酸是否会对血管造成损伤及其可能的机制。方法:8周龄清洁级SD大鼠48只,雌雄各半。大鼠适应性喂养一周,遵从随机、均衡原则,随机分为3组:(1)对照组(ND);(2)1%TFA饮食组(LTD);(3)4%TFA饮食... 详细信息

目的:本次研究主要致力于观察摄入低剂量反式脂肪酸是否会对血管造成损伤及其可能的机制。方法:8周龄清洁级SD大鼠48只,雌雄各半。大鼠适应性喂养一周,遵从随机、均衡原则,随机分为3组:(1)对照组(ND);(2)1%TFA饮食组(LTD);(3)4%TFA饮食组(HTD),每组16只,自由进食、进水,雌雄分笼,饲养12周。实验期间每周测量体重及进食量,并定期测量血压。连续喂养12周后,断头处死,收集血液,分离血清用于血脂检测。分离出大鼠的血管组织,其中每组6只用于做病理学切片,观察血管形态学变化,每组取3只用于检测血管组织内ROS生成情况,余下血管组织采用Western blot法测定大鼠血管组织SIRT1、pgc1-α、PPARγ、NOX4、Nrf2、Bcl-2、Bax、caspase3和cleaved-caspase3蛋白的表达量。数据以`x±SD表示,多组间比较采用SPSS 20.0软件对数据进行One-way ANOVA检验,P1.实验结束时,各组大鼠体重及进食量均随年龄增加而增加,且各组间无统计学差异(P>0.05)。各组大鼠于0、6、12周测量的血压亦无统计学差异(P>0.05)。***和HTD组的TG水平均明显高于ND组(P1、pgc1-α、PPARγ、NOX4、Nrf2蛋白表达均明显降低(P1/pgc1-α/Nrf2信号通路引起血管氧化应激,进而诱发大鼠血管组织细胞凋亡。

关键词：反式脂肪酸血管损伤氧化应激凋亡 SIRT1 pgc1-α Nrf2

电针对VD大鼠学习记忆能力及海马CA1区SIRT1/pgc1-α表达的影响

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医学理论与实践 2022年第2期35卷 181-184页

作者：叶伟李文强汪玥胡馨王林丁见皖南医学院临床医学院安徽省芜湖市241002 皖南医学院基础医学院安徽省芜湖市241002

目的:通过建立血管性痴呆(VD)大鼠模型,观察电针对VD大鼠学习记忆能力改善和对海马CA1区神经元中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(pgc1-α)的表达水平的调节作用,探讨中医电针法对VD的神经保护机... 详细信息

目的:通过建立血管性痴呆(VD)大鼠模型,观察电针对VD大鼠学习记忆能力改善和对海马CA1区神经元中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(pgc1-α)的表达水平的调节作用,探讨中医电针法对VD的神经保护机制。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为对照组、模型组和电针组。采用结扎双侧颈总动脉法制作VD大鼠模型,模型制备后,电针组通过电针刺激“百会”穴和“足三里”穴,2Hz、30min连续针刺治疗4周。采用Morris水迷宫法检测各组大鼠的空间学习记忆能力,尼氏染色法比较各组大鼠的海马CA1区细胞形态,免疫组织化学染色法检测大鼠海马CA1区SIRT1及pgc1-α蛋白表达水平的变化。结果:(1)Morris水迷宫实验结果显示:与对照组相比,模型组大鼠在第5天时,平均逃避潜伏期明显升高(P1区神经细胞形态结构完整,核仁清晰可见,尼氏颗粒丰富;模型组海马区CA1区细胞形态多呈空泡状,核仁固缩;电针组海马CA1区的异常形态学变化相对减轻。(3)免疫组织化学实验结果显示:与对照组相比,模型组大鼠海马CA1区SIRT1和pgc1-α阳性神经元数量明显减少(P1区SIRT1阳性神经元数量明显增加(P1/pgc1-α改善了VD大鼠学习记忆能力,对VD治疗提供一定中医研究基础。

关键词：血管性痴呆 SIRT1 pgc1-α 电针

灌服L-亮氨酸对仔猪骨骼肌Myostatin、pgc1-α、NDUFS2和NDUFS7基因mRNA丰度的影响

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灌服L-亮氨酸对仔猪骨骼肌Myostatin、PGC1-α、NDUFS2和NDUFS7基...

SIRT1/pgc1-α轴在有氧运动改善糖尿病主动脉平滑肌表型转换中的作用

中国畜牧兽医学会动物营养学分会第八届全国会员代表大会暨第十次动物营养学术研讨会

作者：朱娅琴张绍进晏向华华中农业大学动物科技学院动物分子营养研究室

支链氨基酸(branched-chain amino acid,简称 BCAA)是一组在碳链上具有支链结构的脂肪族中性氨基酸,包括亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val),均为动物体内不能合成的必需氨基酸,支链氨基酸对畜禽蛋白质合成和骨骼肌蛋白质周转调... 详细信息

支链氨基酸(branched-chain amino acid,简称 BCAA)是一组在碳链上具有支链结构的脂肪族中性氨基酸,包括亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)和缬氨酸(Val),均为动物体内不能合成的必需氨基酸,支链氨基酸对畜禽蛋白质合成和骨骼肌蛋白质周转调节等方面具有重要的生物学功能。由于对仔猪

关键词：仔猪亮氨酸 Myostatin pgc1-α NDUFS2 NDUFS7

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SIRT1/PGC1-α轴在有氧运动改善糖尿病主动脉平滑肌表型转换中的...

大鼠一次性下坡跑运动后FNDC5和Irisin水平变化特点

2022年第七届广州运动与健康国际学术研讨会

作者：李宗祥王丹刘燕中江东谋刘一平福建师范大学体育科学学院运动与健康福建省高校重点实验室

研究目的:糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一种以糖脂代谢紊乱为特征的全身代谢性疾病, DM大血管病变是糖尿病患者致死致残的主要原因,其中,DM主动脉重塑是DM血管病变的一种,主要病理特征是血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell... 详细信息

研究目的:糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一种以糖脂代谢紊乱为特征的全身代谢性疾病, DM大血管病变是糖尿病患者致死致残的主要原因,其中,DM主动脉重塑是DM血管病变的一种,主要病理特征是血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)表型从以α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)等标志蛋白为特征的收缩型转化为以骨桥蛋白(osteopontin, OPN)等标志蛋白为特征的合成型,致使VSMC大量增殖和迁移,最终导致主动脉增厚变硬、收缩舒张功能紊乱。研究表明,有氧运动可以改善DM患者的血管收缩与舒张功能,但其涉及的具体机制尚未完全阐明。基于此,本文采用C57/6BL雄性小鼠主动脉进行原代VSMC培养,采用AMPK激动剂(AICAR)模拟细胞层次的有氧运动,通过检测VSMC增殖与迁移能力和细胞中α-SMA、OPN、SIRT1和pgc1-α蛋白水平,探讨SIRT1/pgc1-α轴在有氧运动改善DM血管表型中的作用,旨在为有氧运动改善DM血管疾病提供一定的理论依据。研究方法:取6周龄C57/6BL雄性小鼠16只进行原代VSMC培养, VSMC分为正常组(CON)、正常运动组(CON+E)、糖尿病组(DM)和糖尿病运动组(DM+E),糖尿病组采用高糖(30mM,24h)干预、运动组采用AICAR(2mM,24h)干预。EdU法检测VSMC增殖能力、细胞划痕实验检测VSMC迁移能力,western bolt检测VSMC中α-SMA、OPN、SIRT1和pgc1-α的表达水平。研究结果:(1)与CON组相比,CON+E组VSMC增殖和迁移能力显著下降(p1),与CON组相比,DM组VSMC增殖和迁移能力显著上升(p1),与DM组相比,DM+E组VSMC增殖与迁移能力显著下降(p1);(2)与CON组相比,CON+E组VSMC中SIRT1、pgc1-α蛋白表达有上升趋势,与CON组相比,DM组VSMC中α-SMA、SIRT1、pgc1-α蛋白显著下降(p1),而OPN显著上升(p1),与DM组相比,DM+E组VSMC中α-SMA、SIRT1、pgc1-α蛋白显著上升(p1/pgc1-α可能发挥着重要的作用。

关键词：高糖血管平滑肌细胞表型转换 SIRT1 pgc1-α

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中国运动医学杂志 2016年第10期35卷 908-912页

作者：于涛李鹏飞房国梁杨星雅温悦萌李良郭妍田野国家体育总局体育科学研究所北京100061 国家体育总局反兴奋剂中心北京100029

目的:探讨大鼠一次性下坡跑运动后FNDC5和Irisin随时间的变化特点及意义。方法:30只8周龄Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=5)和一次性下坡跑运动组(n=25)。运动组大鼠在坡度为-16度的跑台上以17米/分的速度跑90分钟。在运动结束后的... 详细信息

目的:探讨大鼠一次性下坡跑运动后FNDC5和Irisin随时间的变化特点及意义。方法:30只8周龄Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=5)和一次性下坡跑运动组(n=25)。运动组大鼠在坡度为-16度的跑台上以17米/分的速度跑90分钟。在运动结束后的1天、3天、5天、7天和14天分别选取5只大鼠采集尾静脉血和比目鱼肌。通过ELISA检测大鼠血清Irisin水平;采用实时荧光定量PCR检测骨骼肌中FNDC5的表达;应用Western Blot检测骨骼肌中pgc1-α蛋白水平以及AMPK的磷酸化。结果:大鼠一次性下坡跑运动引起CK活性增加(运动后第5天,Ppgc1-α水平显著增加;FNDC5的m RNA水平在运动后的第1天和第3天升高(P1天增加(Ppgc1-α表达增加,并在运动后初期通过调控大鼠骨骼肌表达FNDC5引起血清中Irisin含量增加,进而通过激活AMPK在运动后的骨骼肌能量代谢中发挥作用。

关键词： FNDC5 Irisin 骨骼肌下坡跑 AMPK pgc1-α

基于转录组学的芪参颗粒改善心衰大鼠线粒体功能障碍的机制研究

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基于转录组学的芪参颗粒改善心衰大鼠线粒体功能障碍的机制研究

作者：何昊北京中医药大学

学位级别：硕士

目的:心力衰竭（heart failure,HF）是诸多心血管疾病的终末阶段,是威胁人类健康的重大疾病。心脏在体内保持着一定的节律进行收缩和舒张运动,以维持周身血液运转,这一系列连贯的动作需要大量的能量作为支持。当处于心衰状态时,细胞内... 详细信息

目的:心力衰竭（heart failure,HF）是诸多心血管疾病的终末阶段,是威胁人类健康的重大疾病。心脏在体内保持着一定的节律进行收缩和舒张运动,以维持周身血液运转,这一系列连贯的动作需要大量的能量作为支持。当处于心衰状态时,细胞内线粒体呼吸链酶的活性改变,氧化应激增加,线粒体稳定的状态也遭到破坏,因此治疗和改善线粒体功能进而调节能量代谢,是近年心衰的治疗新热点。课题组前期研究发现芪参颗粒（QSG）可提高心衰大鼠的心肌能量供应,但是并未探讨其作用机制。本研究通过对大鼠心脏左冠状动脉进行结扎建立心梗后心力衰竭模型,同时构建H9C2细胞缺氧复氧缺糖复糖离体损伤模型,结合转录组学技术、蛋白质免疫印迹法等多种手段,探究QSG改善线粒体功能,促进能量代谢进而防治心衰的作用机制。方法:1.本实验利用左冠状动脉前降支结扎术（leftanteriordescending,LAD）制备大鼠心梗后心衰的动物模型,将心衰大鼠分为假手术组、模型组、QSG组三个组别。LAD结扎21天后利用心脏超声评价各组大鼠的心功能;取大鼠心肌组织,采用透射电镜观察心肌线粒体超微结构;通过苏木精-伊红染色法（Haematoxylin-eosin,HE）检测评价各组大鼠心肌细胞排列情况。2.通过转录组学技术分析假手术组、模型组和QSG组大鼠心肌的mRNA表达量;通过GO功能富集分析和KEGG数据库的通路注释,筛选出QSG对心力衰竭发挥治疗作用的候选基因与信号通路;应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对转录组学筛选出的部分目的基因的mRNA表达水平进行双向验证。3.体外培养H9C2大鼠心肌细胞,建立缺氧缺糖复氧复糖模型,JC-1染色观察H9C2心肌细胞线粒体膜电位的变化;试剂盒检测离体和在体两种环境下的大鼠心肌细胞中腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）水平,观察QSG对心衰大鼠心肌组织呼吸功能以及能量代谢的影响。4.使用Western blot实验检测大鼠心肌组织和缺氧缺糖复氧复糖模型细胞损伤模型中线粒体融合素1（mitofusin1,Mfn1）、线粒体融合素2（mitofusin2,Mfn2）、视神经萎缩相关蛋白1（opticatrophy1,Opa1）线粒体分裂蛋白1（fission1,Fis1）、动力相关蛋白1（dynamin-relatedproteinl,Drp1）的水平含量,评价QSG对心衰状态下线粒体动力学的影响;Western blot实验检测大鼠心肌组织和细胞损伤模型中线粒体过氧化物酶体增殖受体γ共激活因子 α（peroxisome proliferator-activated receptor coactivator-1 α,pgc-1 α）、核呼吸因子-1（nuclear respiratory factor1,NRF-1）和线粒体转录因子（mitochondrial transcription factor A,TFAM）蛋白的表达水平,探讨QSG对线粒体生物发生机制的调控作用。结果:1.心脏超声结果显示,LAD结扎21天后模型组大鼠心肌的射血分数和短轴缩短率显著下降,提示模型成功建立。QSG组EF值显著提高（P＜0.01）,提示QSG能有效抑制心衰引发的大鼠心功能下降,增强心肌收缩能力为泵血提供动力;心肌组织HE染色结果显示,相较于LAD结扎模型组大鼠,QSG组大鼠的心肌细胞排列较整齐,细胞间距减小,结构清晰。2.采用转录组学技术分析假手术组、模型组和QSG大鼠心脏组织中的mRNA表达量。在模型组与假手术组的比较中,40个基因上调39个基因下调;在QSG组与模型组对比中,QSG组38个基因上调29个基因下调。在模型组与QSG组能够共同调控的基因中,QSG能够显著回调的27个差异基因,继而进行后续的分析。通过对差异基因的KEGG通路富集,筛选出9条通路（P＜0.01）,主要涉及氧化磷酸化（oxidativephosphorylation）、心肌收缩（cardiac muscle contraction）、代谢途径（metabolicpath ways）等;KEGG 通路富集结果提示,QSG的潜在药物靶点与细胞的线粒体功能联系密切;GO生物学过程分析根据其富集的数目各取前16条,细胞组成（cellular component,CC）涉及线粒体以及与线粒体上的呼吸链、细胞外基质成分、细胞质等;生物学过程（biological process,BP）主要涉及药物反应、老化、肌肉组织发育、对氧气转运水平的应答、对氧化应激的应答等;分子功能（molecular function,MF）主要涉及AT

关键词：能量代谢 pgc1-α 芪参颗粒心力衰竭线粒体功能

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氧化油脂对草鱼肝细胞损伤机制的研究

氧化油脂对草鱼肝细胞损伤机制的研究

作者：秦洁上海海洋大学

学位级别：硕士

试验一草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞分离与原代培养离体培养的肝细胞在短期内形态和功能会发现显著变化，为探讨其在这变化期间的最佳功能状态，在不同条件下进行原代培养，以探讨适合草鱼肝细胞生长的最佳条件及培养方法，... 详细信息

试验一草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞分离与原代培养离体培养的肝细胞在短期内形态和功能会发现显著变化，为探讨其在这变化期间的最佳功能状态，在不同条件下进行原代培养，以探讨适合草鱼肝细胞生长的最佳条件及培养方法，用于饲料营养与非营养物质对草鱼肝细胞代谢、损伤作用机制的研究。采用改进的胰蛋白酶消化法和红细胞裂解液分离、纯化肝细胞，置于已配置好的M199培养基中进行原代培养。通过显微镜计数法和台盼蓝排斥法计算细胞产量和存活率;MTT比色法连续测试培养6d肝细胞的活力;荧光显微镜观察其形态结构变化，并收集不同时期培养液上清，检测肝细胞白蛋白分泌、尿素合成功能和LDH释放量。结果显示采用0.25%浓度的温胰蛋白酶消化法，消化20min，分步收集肝细胞，经台盼蓝染色检测和血球计数板计数，活细胞数≥99%。在含10%胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199培养基中，以接种浓度1.7×106cell/mL左右为宜，置于27℃、4.5%CO2浓度的恒温培养箱中可成功培养草鱼原代肝细胞。MTT实验结果显示在培养第2d时A值最高，细胞处于最佳状态。荧光纤维镜下可见肝细胞成多边形生长，细胞周围有大量伪足伸出，使其贴壁更加牢固，细胞间隔清晰可见，高倍镜下可见圆形细胞核。细胞可生长10d以上。肝功能检测结果显示242h阶段细胞增殖能力强，LDH含量显著性降低(P15104g)组氧化豆油水溶物作用3h就可导致草鱼肝细胞形态发生明显变化，LDH释放量增加，T-AOC能力提高，MDA含量较高。草鱼肝细胞的损伤程度与水溶液的作用浓度和时间存在显著性关系，高浓度组与对照组相比损伤严重，随着时间的延长肝细胞加剧凋亡。试验三氧化豆油水溶物对草鱼原代肝细胞相关基因表达活性的影响以原代培养24h的草鱼肝细胞为研究对象，添加0.22656g氧化豆油所含水溶物，分别作用1、1.5、2、2.5和3h，收集草鱼肝细胞样品，探讨氧化豆油水溶物对肝细胞的损伤作用。采用实时定量反转录聚合酶链式反应(qPCR)方法，检测草鱼肝细胞IGF、PPAR-α、PPAR-γ、FAS、pgc1-α、SCD1、UCP2的mRNA表达量。各试验组的IGF-Ⅰ、UCP2、pgc1-α、PPAR-α基因表达量与对照组相比，均呈现显著性下调(P1、PPAR-γ的基因表达量与对照组相比，均呈现显著性上调(P1h相比有显著变化。可能是由于添加的氧化豆油水溶性成分如FFA、MDA使FAS基因表达上调，而pgc1-α、PPAR-α的表达量都下调，细胞脂质代谢受阻，细胞出于自我修复，PPAR-γ和SCD1基因表达上调，这种抑制与修复的相互作用致使试验组各基因表达量在不同时间出现下调或上调的变化。

关键词：草鱼肝细胞原代培养氧化豆油 IGF PPAR-α PPAR-γ FAS pgc1-α SCD1 UCP2

瘦素对缺血再灌注脑损伤的神经保护作用及机制研究

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瘦素对缺血再灌注脑损伤的神经保护作用及机制研究

作者：李小梅滨州医学院

学位级别：硕士

背景急性脑卒中的定义为由于脑血管突然破裂或因血栓的形成、栓塞等原因出现脑供血不足而导致脑组织轻度或严重损伤的一组中枢神经系统性疾病,包括出血性和缺血性卒中,其中脑梗死占约4/5。高发病率、高致残率、高病死率是脑卒中三大特点... 详细信息

背景急性脑卒中的定义为由于脑血管突然破裂或因血栓的形成、栓塞等原因出现脑供血不足而导致脑组织轻度或严重损伤的一组中枢神经系统性疾病,包括出血性和缺血性卒中,其中脑梗死占约4/5。高发病率、高致残率、高病死率是脑卒中三大特点,它是导致人类死亡的主要病因之一。急性脑卒中的高复发率和高死亡率亟需快速高效的治疗方法。到目前为止,三代溶栓剂的早期应用是唯一经过循证医学证实有效的治疗方法,主要包括第一代:尿激酶(UK),第二代:组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和重组组织型纤镕酶原激活剂(rt-PA),第三代:单链尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(SCUPA)和乙酰化纤溶酶原-链激酶激活剂复合物(APSAC)为代表。除此之外,尚无有效治疗策略。近年来相关研究学者在探索快速有效的溶栓治疗方案的同时,也开展了大量关于神经保护剂的临床试验,但结果不容乐观。脑卒中生理病理过程非常复杂,主要是与自由基的形成、钙的超载、氨基酸的毒性、炎性反应等多种细胞机制有关,而目前研究的药物均针对于单一靶点。因此,研究人员目前的任务就是不断寻找脑缺血再灌注病理生理过程的复杂机制并探索出快速有效的,可进行多靶位治疗的神经保护药物。瘦素是由脂肪类细胞分泌的具有调控食物摄入、维持能量稳态的肽类激素。目前已经发现有6种瘦素的受体同分异构体,即长型受体Ob-Rb,短型受体Ob-Ra、Ob-Rc、Ob-Rd、Ob-Re和Rf。其中长型瘦素受体Ob-Rb被认为是功能性受体,瘦素能够通过Ob-Rb激活脂肪细胞内多种信号转导通路,发挥多种神经调节作用。目前研究表明,脑缺血再灌注损伤与瘦素有着非常密切的关联,在脑缺血再灌注模型中发现血清瘦素明显升高。而关于瘦素对缺血再灌注脑损伤的作用机制仍不清楚。本课题目的在于研究瘦素对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制,为瘦素成为治疗缺血再灌注脑细胞损伤的一个可能新靶点提供依据。方法取40只6-7w的SPF级C57BL/6雄性鼠,按照随机数表分成5组,即假手术(SHAM)组、盐水对照(MCAO+NS)组、侧脑室注射给予瘦素(MCAO+Leptin)组(该组包括3组,分别给予3种瘦素剂量,为0.5μg/10g、1.0μg/10g、2.Oμg/10g),每组8只,实验应用Loga线栓法制作短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型,脑缺血1h后再灌注24h,手术结束后迅速取脑进行冰冻切片染色,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法计算脑梗体积,得到瘦素的最有效浓度。再将72只同样品系的雄性鼠,随机分成3组,每组24只,分别为:假手术组(SHAM组),盐水对照组(MCAO+NS组),瘦素干预组(MCAO+Leptin组)。术前30min采用侧脑室(i.c.v)注射进行给药,瘦素剂量为前期测定的最有效浓度。实验通过神经行为学方法测试缺血再灌注脑损伤后小鼠神经运动功能的恢复,包括转轴测试、粘附物移除实验、平衡木测试。实验采用尼氏(Nissl)染色法检测脑组织各个区神经元细胞尼氏小体的状况,分析神经元的损伤情况;利用TUNEL染色法检测神经细胞的细胞凋亡情况,主要通过标记dUTP缺口末端(脱氧核苷酸转移酶的介导)来实现;运用免疫荧光技术检测脑内Cleaved Caspase-3的产生状况;采用免疫印迹(Western Blot)方法评测小鼠脑组织凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达及参与线粒体合成的pgc1-α蛋白的表达。结果***染色及Nissl染色结果显示:与正常组比较,tMCAO模型组小鼠脑组织各区域神经元有明显死亡,出现明显梗死区;与模型组相比,瘦素注射治疗组小鼠脑内神经细胞死亡减少,梗死体积明显减小,中剂量(1.0μg/10g)瘦素改善最明显。2.神经运动功能检测结果表明:在转轴、粘附物移除和平衡木测试,tMCAO术后第3天、4天瘦素治疗显著改善tMCAO术后小鼠运动、感觉障碍、共济失调(P1h再灌注24h后脑组织切片的半暗带缺血区,TUNEL染色显示为阳性的凋亡神经元显著增多,cleaved caspase-3蛋白显著上升,小鼠皮质Bcl-2/Bax的相对表达量明显下降(P1),瘦素治疗(MCAO+Leptin)组凋亡明显神经元显较少,Cleaved caspase-3表达量减少,Bcl-2/Bax的相对表达量上调(P1)。表明瘦素可抑制缺血再灌注脑损伤的细胞凋亡。4.与正常组相比,模型(MCAO+NS)组pgc1-α蛋白表达明显减低;瘦素治疗(MCAO+Leptin)组较模型组pgc1-α表达明显升高(P1)。表明瘦素可能通过增加pgc1-α表达水平减少线粒体的凋亡,从而减轻脑缺血再灌注

关键词：脑卒中瘦素细胞凋亡 Bcl-2 Cleaved caspase-3 pgc1-α