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CRISPR/Cas9 editing of the polygalacturonase Fapg1 gene improves strawberry fruit firmness

Horticulture Research 2023年第3期10卷 201-210页

作者： Gloria López-Casado Cristina Sánchez-Raya Pablo D.Ric-Varas Candelas Paniagua Rosario Blanco-Portales Juan Muñoz-Blanco Sara Pose Antonio J.Matas Jose A.Mercado Departamento de Botánica y Fisiología Vegetal Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea‘La Mayora’(IHSM-UMA-CSIC)Universidad de Málaga29071 MálagaSpain Departamento de Bioquímica y Biología Molecular Universidad de Córdoba14071CórdobaSpain

Firmness is one of the most important fruit quality traits in strawberries.The postharvest shelf life of this soft fruit is highly limited by the loss of firmness,where cell wall disassembly plays an important role.Previous studies demonstrated that the polygalacturonase Fapg1 has a key role in remodelling pectins during strawberry softening.In this study,Fapg1 knockout strawberry plants have been generated using the CRISPR/Cas9 system delivered via Agrobacterium tumefaciens.Ten independent lines,cv.“Chandler”,were obtained,and all of them were successfully edited as determined by PCR amplification and T7 endonuclease assay.The targeted mutagenesis insertion and deletion rates were analyzed using targeted deep sequencing.The percentage of edited sequences varied from 47%up to almost 100%,being higher than 95%for seven of the selected lines.Phenotypic analyses showed that 7 out of the eight lines analyzed produced fruits significantly firmer than the control,ranging from 33 to 70%increase in firmness.There was a positive relationship between the degree of Fapg1 editing and the rise in fruit firmness.Minor changes were observed in other fruit quality traits,such as colour,soluble solids,titratable acidity or anthocyanin content.Edited fruits showed a reduced softening rate during postharvest,displayed a reduced transpirational water loss,and were less damaged by Botrytis cinerea inoculation.The analysis of four potential off-target sites revealed no mutation events.In conclusion,editing the Fapg1 gene using the CRISPR/Cas9 system is an efficient method for improving strawberry fruit firmness and shelf life.

关键词： fir straw pg1

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丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 38-40页

作者：辛九庆李媛高玉龙王砚范钱爱东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoidessubsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat... 详细信息

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoidessubsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat都没有缺失8.84 kb片段;LppB全基因序列比较发现与pg1同源性达99%,而与Y-goat同源性很低;多位点基因序列类型(Multilocus sequence types,MST)分析显示与非洲澳大利亚群完全相同。以上证据显示中国CBPP流行株应归属于非洲澳大利亚群。

关键词： MmmSC pg1 特征

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白细胞介素23对胃癌发生发展及转移能力的影响及其分子机制的研究

白细胞介素23对胃癌发生发展及转移能力的影响及其分子机制的研究

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作者：孙鹏江苏大学

学位级别：硕士

【目的】研究白细胞介素23(Interlukin-23,IL-23)对胃癌发生发展及转移能力的影响,探讨其促进胃癌转移的潜在分子机制。【方法】(1)免疫组织化学染色法检测慢性浅表性胃炎(对照组),慢性萎缩性胃炎伴肠化生和胃癌患者组织中IL-23的表达;E... 详细信息

【目的】研究白细胞介素23(Interlukin-23,IL-23)对胃癌发生发展及转移能力的影响,探讨其促进胃癌转移的潜在分子机制。【方法】(1)免疫组织化学染色法检测慢性浅表性胃炎(对照组),慢性萎缩性胃炎伴肠化生和胃癌患者组织中IL-23的表达;ELISA法检测血清IL-23的水平,时间分辨免疫荧光分析法定量检测血清胃蛋白酶原1(Pepsinogen 1,pg1)的水平;Pearson相关分析验证慢性萎缩性胃炎伴肠化生及胃癌患者血清中IL-23与pg1的相关性。(2)免疫组织化学染色法检测未转移胃癌组(未转移组,n=9)和转移胃癌组(转移组,n=16)患者IL-23的表达;ELISA法检测这两组胃癌患者血清IL-23、VEGF、MMP9的表达水平,健康体检人群为对照组。(3)应用胃癌SGC-7901、BGC-823细胞株进行体外实验,均分为4组,即对照组、50 ng/m L IL-23处理组、LY294002处理组和LY294002+IL-23组。ELISA法检测每株细胞不同处理后各组细胞培养上清液中MMP9和VEGF的表达;划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞迁移能力的变化;Western blot和荧光定量PCR法检测转移相关蛋白的表达。【结果】(1)无论在组织样本或血清中,与对照组相比,慢性萎缩性胃炎伴肠化生组和胃癌组患者IL-23表达均明显升高,且呈递增趋势;而pg1浓度则在慢性萎缩性胃炎伴肠化生组和胃癌组患者血清中明显降低。Pearson相关性分析显示慢性萎缩性胃炎伴肠化生组和胃癌组患者中血清IL-23的表达水平与pg1呈负相关。(2)25例胃癌组织中,未转移组胃癌组织IL-23的表达高于配对癌旁组织(P1、BGC-823细胞,与对照组相比,IL-23处理组均引起细胞VEGF、MMP9 m RNA水平和蛋白水平的上调,E-cadherin m RNA水平和蛋白水平的下调;划痕实验和Transwell实验结果显示用IL-23处理后,两株胃癌细胞株的细胞迁移能力均增强。如果应用LY294002处理细胞株,IL-23不能引起两株细胞中VEGF和MMP9 m RNA水平和蛋白水平的上调、E-cadherin m RNA水平和蛋白水平下调的效应,划痕实验和Transwell实验结果也显示两株细胞迁移能力均减弱。【结论】(1)IL-23在慢性萎缩性胃炎伴肠化生和胃癌患者血清和组织中高表达,且血清IL-23与pg1的表达呈负相关。(2)IL-23在胃癌患者组织中高表达,且与胃癌转移相关。(3)胃癌患者血清VEGF、MMP9高表达,且与IL-23呈正相关。(4)IL-23提高胃癌SGC-7901、BGC-823细胞VEGF、MMP9的m RNA水平和蛋白表达水平,降低E-cadherin m RNA水平和蛋白水平,增强了细胞的迁移能力。(5)IL-23可能通过PI3K/Akt信号通路促进胃癌SGC-7901、BGC-823细胞的迁移能力。

关键词：慢性萎缩性胃炎胃癌 IL-23 pg1 PI3K/Akt 迁移

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猪感染PRRSV后Cathelicidins抗菌肽基因的表达情况

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江苏农业科学 2018年第2期46卷 24-27页

作者：卢艳敏衡水学院生命科学系河北衡水053000

猪源抗菌肽主要包括防御素(defensins)和cathelicidins两大家族,cathelicidins是一类在结构上存在很大差异,含有保守cathelin区域的抗菌肽。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪的一种高度传染性疾病,对养猪业造成了巨大的经济损失,PRRSV已成... 详细信息

猪源抗菌肽主要包括防御素(defensins)和cathelicidins两大家族,cathelicidins是一类在结构上存在很大差异,含有保守cathelin区域的抗菌肽。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪的一种高度传染性疾病,对养猪业造成了巨大的经济损失,PRRSV已成为严重威胁我国养猪业发展的重要传染病之一。主要研究猪感染PRRSV后体内cathelicidins抗菌肽的表达情况,以期为PRRSV新药物的开发提供思路。结果表明,PR39、pg1、pg1-5、PMAP23的表达受到PRRSV的影响,猪在感染PRRSV后,脾脏、肺、肺门淋巴结中的PR39、pg1、pg1-5、PMAP23表达量均上调,其中PRRSV对PR39与pg1-5表达的影响较大。

关键词：猪 PRRSV Cathelicidins 抗菌肽 PR39 pg1 pg1-5 PMAP23

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丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征

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第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：辛九庆李媛高玉龙王砚范钱爱东吉林农业大学动物科技学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoides subsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat... 详细信息

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoides subsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat都没有缺失8.84kb片段;LppB全基因序列比较发现与pg1同源性达99%,而与Y-goat同源性很低;多位点基因序列类型(Multilocus sequence types,MST)分析显示与非洲澳大利亚组完全相同。以上证据显示中国CBPP流行株来自于澳大利亚。

关键词： MmmSC pg1 特征

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丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征

丝状支原体丝状亚种SC型中国分离株分子流行特征

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会...

作者：辛九庆李媛高玉龙王砚范钱爱东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家牛传染性胸膜肺炎参考实验室吉林农业大学动物科技学院

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoides subsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat... 详细信息

收集了6个来自不同地方中国历史流行的丝状支原体丝状亚种SC型(Mycoplasma mycoides subsp.MycoidesSC,MmmSC)毒株与pg1、Y-goat进行分子特征比较。全菌体蛋白电泳与pg1完全相同,而与Y-goat不同;PCR结果显示6个中国分离株与pg1、Y-goat都没有缺失8.84kb片段;LppB全基因序列比较发现与pg1同源性达99%,而与Y-goat同源性很低;多位点基因序列类型(Multilocus sequence types,MST)分析显示与非洲澳大利亚组完全相同。以上证据显示中国CBPP流行株来自于澳大利亚。

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血竭胶囊外敷治疗溃疡性结肠炎合并坏疽性脓皮病

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苏州医学 2007年第2期30卷 108-109页

作者：郑家驹苏州市立医院（北区）消化科 215008

坏疽性脓皮病（pyodemm gangrenousm，pg）临床上并不多见，但往往可发生于炎症性肠病（1BD）患者中。本病治疗较困难，长期皮损不愈，给患者带来极大痛苦。本文介绍1例青年女性“溃疡性结肠炎”（溃结）患者，合并右下肢pg1．5年，最... 详细信息

坏疽性脓皮病（pyodemm gangrenousm，pg）临床上并不多见，但往往可发生于炎症性肠病（1BD）患者中。本病治疗较困难，长期皮损不愈，给患者带来极大痛苦。本文介绍1例青年女性“溃疡性结肠炎”（溃结）患者，合并右下肢pg1．5年，最后在中药血竭胶囊外敷作用下，皮损治愈，特报道如下：

关键词：坏疽性脓皮病溃疡性结肠炎外敷治疗血竭胶囊炎症性肠病青年女性 pg1 右下肢

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