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急性重症胰腺炎合并肝素诱导的血小板减少1例并文献复习

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中华急诊医学杂志 2023年第3期32卷 413-416页

作者：胡岚施晟懿孙涵文周磊陈金中李艳陆一鸣陈旭光上海交通大学医学院附属瑞金医院北院急诊科上海201800

肝素诱导的血小板减少症(heparin induced thrombocytopenia,HIT)是由识别多分子血小板因子4(pf4)/肝素复合物的血小板活化免疫球蛋白G(IgG)抗体引起的一种严重的肝素类药物治疗并发症,主要临床特征是血小板计数显著下降伴血栓形成(HIT ... 详细信息

肝素诱导的血小板减少症(heparin induced thrombocytopenia,HIT)是由识别多分子血小板因子4(pf4)/肝素复合物的血小板活化免疫球蛋白G(IgG)抗体引起的一种严重的肝素类药物治疗并发症,主要临床特征是血小板计数显著下降伴血栓形成(HIT with thrombosis,HITT)或不伴血栓形成(isolated HIT,孤立HIT)。

关键词：急性重症胰腺炎肝素诱导的血小板减少症血小板活化血栓形成肝素类药物血小板因子4 血小板计数 pf4

甲磺酸胺银杏内酯B抗血小板黏附和释放作用研究

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中药药理与临床 2009年第6期25卷 42-44页

作者：刘成鼎崔姣潘苏华许惠琴南京中医药大学药学院南京210046

目的:探讨银杏内酯B衍生物甲磺酸胺银杏内酯B(XQ)抗血小板黏附和释放作用。方法:通过血小板计数,测定XQ对胶原与家兔血小板接触引起的黏附的抑制作用。采用荧光分光光度法测定XQ对PAF诱导家兔血小板释放5-HT的影响,采用ELISA法测定XQ对... 详细信息

目的:探讨银杏内酯B衍生物甲磺酸胺银杏内酯B(XQ)抗血小板黏附和释放作用。方法:通过血小板计数,测定XQ对胶原与家兔血小板接触引起的黏附的抑制作用。采用荧光分光光度法测定XQ对PAF诱导家兔血小板释放5-HT的影响,采用ELISA法测定XQ对PAF诱导家兔血小板释放β-TG、pf4的作用。结果:XQ1.95、3.9、7.8mg/kg对胶原与家兔血小板接触引起的黏附有抑制作用;XQ3.9、7.8mg/kg能显著抑制PAF诱导家兔血小板释放5-HT;XQ3个剂量组对PAF诱导家兔血小板释放β-TG和pf4有抑制作用。结论:XQ能够抗血小板黏附,减少血小板释放产物的生成,鉴于XQ的水溶性以及对血小板的作用,XQ治疗血栓性疾病可能比GB具有更大的优势。

关键词：甲磺酸胺银杏内酯B(XQ) 血小板黏附 5-HT β-TG pf4

血小板因子-4与Neuropilin-1（NRP1）相互作用位点的鉴定

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血小板因子-4与Neuropilin-1（NRP1）相互作用位点的鉴定

作者：陈苗安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:Neuropilin-1 (NRP1)是细胞表面相对分子量(Mr)为102,000Da的Ⅰ型跨膜糖蛋白,通过杂交瘤技术在欧洲蟾蜍的神经系统内首次被发现。进一步研究证明NRP1通常表达在内皮细胞及一些肿瘤细胞,是Semaphorin3A(Sema3A)和血管内皮生长因子16... 详细信息

背景:Neuropilin-1 (NRP1)是细胞表面相对分子量(Mr)为102,000Da的Ⅰ型跨膜糖蛋白,通过杂交瘤技术在欧洲蟾蜍的神经系统内首次被发现。进一步研究证明NRP1通常表达在内皮细胞及一些肿瘤细胞,是Semaphorin3A(Sema3A)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)的受体,在神经轴突的生长、血管的生成、发育和肿瘤转移中起着重要的作用[1]。最近有研究表明NRP1在原始T细胞与dendritic cell (DCs)稳定接触中起重要作用,是CD4+CD25+调节性T细胞持续的表面标志之一,不依赖于Treg细胞是否活化,在免疫反应的起始上扮演着重要角色[2]。本课题组的前期研究已显示血小板因子-4(Platelet Factor-4/pf4,又名CXCL4)可以刺激CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的增殖[3],并与NRP1结合[4],同时在pf4刺激Treg细胞增殖过程中NRP1表达量增加[5],故推测NRP1在pf4刺激Tr增殖过程中发挥受体或共受体的作用。本研究为了进一步确定NRP1与pf4作用的结合位点或功能域,为Tr细胞的功能及其调控提供分子依据,并具有应用于治疗自身免疫性疾病的前景。方法及结果:NRP1在脊椎动物中高度保守,由胞内区、跨膜区和胞外区三部分组成,其中胞外段包括860个氨基酸,由3个不同的结构域组成,分别称为a1/a2、b1/b2和c。其中a1/a2又称CUB结构域(complement-binding protein homology),b1/b2结构域与凝血因子Ⅴ和Ⅷ结构相似同源,在c结构域的中部含有MAM结构域(meprin, A5,μ)。NRP1的胞外段各个区能和不同的分子结合介导不同的信号传导,Sema3A通过a1/a2/b1区与NRP1结合,VEGF165能与NRP1的b1/b2区结合,Heparin亦通过b1/b2区与NRP1结合,所以NRP1具有多种功能[6]。根据NRP1的结构特点,本实验采用原核表达的方式分段表达NRP1的a1/a2(CUB)、b1/b2(F5/8C)、MAM三个结构域,分别得到融合蛋白后,免疫Balb/c鼠后,通过细胞融合制备单克隆抗体并对所制备抗体进行初步鉴定,鉴定后的抗体再与pf4做作用位点的筛选。首先,搜索NRP1的蛋白序列(Human Protein Reference Database, ***),分段截取NRP1的3个domain(CUB、F5/8C、MAM),从人单核细胞cDNA中扩增出3个片段基因。原核表达选择pGEX-5X-1载体作为表达载体,根据载体的酶切图谱设计引物,将NRP1的3个domain基因序列分别插入到pGEX-5X-1载体的EcoR I和Not I两个限制性酶切位点之间,PCR反应后,得到目的条带;将扩增的目的片段从胶上回收后,进行T载体的连接;转化、提取质粒后双酶切,再与同时双酶切的表达载体pGEX-5X-1载体进行连接,然后再转化,各挑取两个阳性克隆,摇菌后,进行测序鉴定。将测序鉴定正确的表达载体转化入BL21菌株后诱导表达,获得正确表达的目的蛋白并纯化。其次,将纯化的GST-CUB、GST-F5/8C、GST-MAM融合蛋白与等体积福氏完全佐剂进行充分乳化,对Balb/c小鼠进行多点皮下注射。首次免疫后4周加强免疫一次,免疫原用量减为首免的一半,并与福氏不完全佐剂充分乳化。两周后ELISA法检测效价,效价在1:8000以上的小鼠即可进行加强免疫,加强免疫四天后进行细胞融合,ELISA法筛选能够稳定分泌抗CUB、F5/8C、MAM mAb的阳性克隆,并亚克隆,分别获得能够稳定分泌CUB单克隆抗体的细胞系6株,分泌F5/8C单克隆抗体的细胞系5株,分泌MAM单克隆抗体的细胞系2株。第三,用GST标签蛋白通过Western blot对所获单克隆抗体进行鉴定,其中不识别GST标签蛋白而只识别融合蛋白的细胞株为识别目的蛋白的阳性株。结果显示,识别CUB蛋白的阳性株:UAH058、UDC114、UDG054、UBB067、UCB064,识别F5/8C的阳性株:OCA084、OEG082,无识别MAM的阳性株。用ELISA法分别检测pf4与CUB、F5/8C的相互作用[26],结果为:pf4与F5/8C存在特异的分子间相互作用。结论:成功获得的NRP1三个片段CUB、F5/8C、MAM的鼠抗人单克隆抗体的可应用于蛋白结构、定位、功能等常规的生命科学研究外,在临床诊断和治疗方面也具有重要的意义,初步证明了pf4可与NRP1的F5/8C区发生特异性的结合,将为今后N

关键词： NRP1 单克隆抗体 pf4

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血小板及凝血功能改变与子痫前期的关系研究

血小板及凝血功能改变与子痫前期的关系研究

作者：郭灿红福建医科大学

学位级别：硕士

目的观察子痫前期(preeclampsia)患者血小板参数血小板总数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板容积比(PCT)和血小板分布宽度(PDW),凝血指标D-二聚体(D-D)、凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间... 详细信息

目的观察子痫前期(preeclampsia)患者血小板参数血小板总数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板容积比(PCT)和血小板分布宽度(PDW),凝血指标D-二聚体(D-D)、凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)以及血小板活化指标P-选择素(P-S)、血小板第4因子(pf4)的变化,初步探讨凝血指标及血小板活化指标在子痫前期临床诊断中的意义。方法血小板参数(PLT、MPV、PCT、PDW)用SYSMEX公司提供的全自动血细胞分析仪检测血常规;凝血指标(D-二聚体、PT、APTT、FBI、TT)用ACLTOP全自动血凝仪检测;P-选择素水平及pf4水平用ELISA方法检测。结果(1)重度子痫前期组血小板平均体积(MPV)值、血小板分布宽度(PDW)值和血小板容积值(PCT)均明显高于正常妊娠组,差异有统计学极显著性( P0.05)。(2)重度子痫前期组D-二聚体水平和部分活化凝血活酶时间(APTT)水平显著高于正常妊娠组,差异有统计学意义( P 0.05)。(3)重度子痫前期组P-选择素水平、pf4水平高于轻度子痫前期组及正常妊娠组,差异均有显著性( Ppf4水平与正常妊娠组比较,差异无显著性( P > 0.05)。结论(1)重度子痫前期组MPV值、PDW值明显升高,提示重度子痫前期时外周血血小板破坏加速。(2)重度子痫前期组PT水平降低提示重度子痫前期患者凝血功能亢进;D-二聚体水平升高提示子痫前期患者纤溶活性下降。(3)子痫前期组血清P-选择素、pf4水平升高,提示子痫前期血小板活性增强,且与病情的严重程度成正比。

关键词：子痫前期血小板参数 D-二聚体 P-选择素 pf4

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非小细胞肺癌血管生成及血小板活化研究

非小细胞肺癌血管生成及血小板活化研究

作者：张华昆明医学院

学位级别：硕士

[目的]研究血小板活化、血小板第四因子(platelet factor 4 pf4)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)在初治非小细胞肺癌患者、肺良性疾病患者及健康体检者外周血的表达。探讨肿瘤血管生成相关因素与肿瘤血管... 详细信息

[目的]研究血小板活化、血小板第四因子(platelet factor 4 pf4)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)在初治非小细胞肺癌患者、肺良性疾病患者及健康体检者外周血的表达。探讨肿瘤血管生成相关因素与肿瘤血管生成抑制因素与肺癌、肺癌分期、组织学类型的关系及其化疗对它们的影响。 [方法] 1:pf4、SVEGF的检测实验组：初治非小细胞肺癌患者49例,其中Ⅰ、Ⅱ期患者21例,腺癌8例,鳞癌13例;Ⅲ、Ⅳ期患者28例,腺癌16例,鳞癌12例。对照组：1：肺部良性疾病患者20例。2：健康体检者20例。采集患者清晨空腹外周静脉血,应用酶联免疫吸附法(enzymelinked immunnosorbent ELISA)检测pf4及VEGF的浓度,pf4浓度结果用μg/L表示,VEGF浓度结果用ng/L表示。结果应用SPSS统计软件包11.5进行统计学处理。 2：血小板活化功能检测实验组：初治非小细胞肺癌患者49例,其中Ⅰ、Ⅱ期患者21例,腺癌8例,鳞癌13例;Ⅲ、Ⅳ期患者28例,腺癌16例,鳞癌12例。对照组：1：肺部良性疾病患者20例。2：健康体检者20例。采集患者清晨空腹外周静脉血,应用流式细胞术(Flow cytometry FCM)检测外周血CD62P的含量,其中CD62P含量作为检测血小板活化状态的指标,最后结果用%表示。结果应用SPSS统计软件包11.5进行统计学处理。结果： pf4、SVEGF的检测结果1、血小板pf4、SVEGF在所有患者外周血中均有表达,在初治非小细胞肺癌患者外周血pf4、SVEGF的含量高于肺部良性疾病及健康体检者(Ppf4浓度高于Ⅰ、Ⅱ期(早期),(Ppf4、SVEGF的浓度相似(P>0.05);3、经两个周期化疗后,初治非小细胞肺癌患者外周血pf4、SVEGF的浓度较前明显下降(P0.05);3、经两个周期化疗后,初治非小细胞肺癌患者外周血CD62P浓度较前明显下降(P<0.05)。结果：1、血小板活化及SVEGF在非小细胞肺癌患者肿瘤血管生成以及肿瘤的浸润和转移中起到重要作用。 2、化疗能有效抑制非小细胞肺癌患者的血管生成。

关键词：非小细胞肺癌初治 CD62P pf4 SVEGF ELISA FCM

rhBMP-2m在造血损伤治疗中作用机制的研究

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rhBMP-2m在造血损伤治疗中作用机制的研究

作者：刘水冰第四军医大学

学位级别：硕士

pf4是CXC趋化因子家族成员,一个丰富的血小板α-颗粒。pf4属于CXC趋化因子非ELR基序的亚型,具有ELR基序的有血管新生刺激活性,而pf4无此基序,故没有促进血管新生的作用,反而抑制血管的生成。pf4是造血负性调控因子,它是血细胞生成的抑制... 详细信息

pf4是CXC趋化因子家族成员,一个丰富的血小板α-颗粒。pf4属于CXC趋化因子非ELR基序的亚型,具有ELR基序的有血管新生刺激活性,而pf4无此基序,故没有促进血管新生的作用,反而抑制血管的生成。pf4是造血负性调控因子,它是血细胞生成的抑制剂,特别是对巨核细胞的生成。骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)是转化生长因子β(transforming growth factor-β)超家族的成员。它最初在骨缺损的修复中被作为骨的诱导蛋白,后来发现BMP还对胚胎发育,神经系统、造血系统分化具有重要的作用。BMP在造血作用中是不可缺少的因子。在肿瘤的治疗中,造血系统的损伤是一个主要的并发症,同时血液疾病也是造血系统重要的危害因素。已经证实:BMP与造血干细胞和骨髓基质细胞有着密切的关系。 pf4属于造血负性调控因子,它抑制造血细胞增殖,但是它的这种作用是可逆的。BMP-2m属于造血正性调控因子,调控造血细胞增殖和分化。在我们以往的研究中它们在Co-γ辐射所致造血损伤和环磷酰胺所致造血损伤的修复方面,都有促进造血修复的作用,但是它们的作用机理完全不同:前者起预防作用,后者起治疗作用。实验1 pf4与rhBMP-2m在γ-射线照射后造血损伤治疗中作用的比较目的:比较pf4、rhBMP-2m及二者联用对大剂量γ射线照射后造血损伤的作用,拟观察、比较二者的作用效果,及有无协同作用。方法:二级BALB/c

关键词： pf4 BMP 造血功能辐射损伤 60Co-γ射线 SRY基因探针

痛风患者血清中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）水平与血小板活化相关性研究

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痛风患者血清中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）水平与血小板活化相关...

作者：李秀青青海大学

学位级别：硕士

目的:通过检测急性痛风组、无症状高尿酸血症组及健康对照组血清中NETs水平、血小板活化标志物等指标,并进行相关性分析,从而进一步探讨血清中NETs水平与血小板活化对痛风分期的意义、疾病活动性评判、诊断价值及提供新的研究方向。方法... 详细信息

目的:通过检测急性痛风组、无症状高尿酸血症组及健康对照组血清中NETs水平、血小板活化标志物等指标,并进行相关性分析,从而进一步探讨血清中NETs水平与血小板活化对痛风分期的意义、疾病活动性评判、诊断价值及提供新的研究方向。方法:研究对象来自2022年1月至2023年1月于青海大学附属医院就诊的男性患者,其中急性痛风患者24例,无症状高尿酸血症患者22例,健康对照组16例。采用流式细胞术检测血小板活化标志物CD62p的阳性率,使用Elisa方法检测血清中NETs、pf4水平,使用SPSS25.0统计软件分析血清NETs水平与各指标的相关性,以Ppf4水平及pf4/PLT的比值在三组间无差异,差异不具有统计学意义(P>0.05)。4.急性期痛风组PLT、NE、CRP、TC、TG、D-D水平高于无症状高尿酸血症组(Ppf4、pf4/PLT比值无明显相关性(P>0.05)。结论:1.急性痛风患者及无症状高尿酸血症患者的NETs、PLT、D-D均高于健康对照组。2.急性痛风患者的NETs水平及CD62p阳性表达率显著高于健康对照组,且两者相关性分析提示呈正相关,在痛风的发生及发展中发挥了重要作用,有望作为评估痛风疾病活动度的指标。

关键词：痛风 PLT NETs CD62p pf4

芒果甙对血小板4因子，血浆β球蛋白释放以及血小板聚集率的影响

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芒果甙对血小板4因子，血浆β球蛋白释放以及血小板聚集率的影响

作者：梁颜广西医科大学

学位级别：硕士

目的:通过体外实验,研究芒果甙对血小板释放血小板4因子(pf4)和血浆β球蛋白(β-TG)的影响。以及芒果甙对血小板聚集率的影响。并初步探讨芒果甙影响血小板聚集和释放功能的作用机制。方法:收集健康志愿者的外周全血约10ml,再加入待测... 详细信息

目的:通过体外实验,研究芒果甙对血小板释放血小板4因子(pf4)和血浆β球蛋白(β-TG)的影响。以及芒果甙对血小板聚集率的影响。并初步探讨芒果甙影响血小板聚集和释放功能的作用机制。方法:收集健康志愿者的外周全血约10ml,再加入待测不同浓度的芒果甙以及阿司匹林,用胶原作为诱导剂,采用全血电阻法Chrono-Log血小板聚集分析仪测定血小板聚集率,同样方法再抽取4ml全血,用ELISA方法,检测外周血血浆中pf4、β-TG的含量。结果:1 .ELISA实验法检测血小板4因子和血浆β球蛋白:阿司匹林组β-TG含量增加(Ppf-4含量增加(Ppf-4也含量增加(P46以及0,均4。低浓度芒果甙组与中浓度组间并无统计学意义,P值0.244.>0.05,但与高浓度芒果甙间有统计学意义,P为0。中浓度芒果甙组与高浓度组间P值0.024,46。结论:芒果甙可以抑制血小板的释放,呈浓度依赖性(随着浓度增高,呈递增趋势),但不能降低血小板释放pf4和β-TG的表达率。同时,芒果甙也可以抑制血小板的聚集,并呈浓度依赖性。

关键词：芒果甙血小板释放 pf4 β-TG 血小板聚集率

西红柿水溶性提取物新络素对血小板功能的影响及分子机制研究

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西红柿水溶性提取物新络素对血小板功能的影响及分子机制研究

作者：陈会莲卫生部北京老年医学研究所

学位级别：硕士

目的探讨西红柿水溶性提取物新络素对血小板功能的影响及其分子机制。材料和方法体外实验(in vitro study),采集健康捐赠者的血液,离心,分离上清制备富血小板血浆(Plasma-rich platelets,PRP)。新络素孵育PRP后,用ADP或Collagen刺激血... 详细信息

目的探讨西红柿水溶性提取物新络素对血小板功能的影响及其分子机制。材料和方法体外实验(in vitro study),采集健康捐赠者的血液,离心,分离上清制备富血小板血浆(Plasma-rich platelets,PRP)。新络素孵育PRP后,用ADP或Collagen刺激血小板活化。体内实验(in vivo study),招募50岁以上健康或者亚健康受试者作为研究对象,符合纳入标准的受试者随机分为:安慰剂组,新络素组,阿司匹林组和新络素与阿司匹林合用组,干预7天。1.体外实验评价新络素对血小板功能影响(1)血小板聚集率的测定:用不同剂量新络素孵育PRP,用ADP或Collagen刺激血小板聚集。用Chrono-Log血小板聚集仪测定血小板聚集率。(2)用流式细胞技术检测血小板P-选择素(P-selectin,CD62P)的表达:使用荧光标记的CD61和CD62P抗体标记纯化的血小板,使用流式细胞仪分析新络素处理对血小板P-selectin表达的影响。(3)ELISA检测:使用ELISA试剂盒,测定各组血小板血浆血栓素B2(thromboxane B,TXB)、6-keto-PGF和血小板因子4(platelet factor 4,pf4)水平。(4)血小板spreading的检测:用免疫荧光法检测新络素对血小板spreading的影响。(5)用Western blot方法:使用特异性抗体分析Collagen刺激血小板的Akt、GSK-3β和p38 MAPK磷酸化水平。2.在体试验评价新络素干预对血小板功能的影响(1)一般情况检查:分别在干预前、后检查受试者的生化指标、血常规、凝血四项和大便潜血。(2)In vivo实验评价新络素对血小板聚集的影响:分别在受试者接受干预前后采血,制备富血小板血浆,用ADP或Collagen刺激血小板聚集,用Chrono-Log聚集仪测定血小板聚集率。(3)ELISA检测:用ELISA试剂盒检测受试者接受干预前后血浆TXB、6-keto-PGF和pf4水平。结果*** vitro实验结果:对血小板聚集分析结果显示ADP和Collagen刺激血小板活化,用不同浓度的新络素孵育血小板,新络素以剂量依赖的方式降低ADP和Collagen刺激的血小板聚集率。新络素(100μg/ml)对ADP刺激血小板聚集抑制率88.6%,新络素(100μg/ml)对Collagen刺激血小板聚集抑制率89.5%。流式细胞仪分析结果显示,与对照组比较,Collagen刺激血小板后,P-selectin的表达增加1.9倍(P4.2倍,而新络素(100μg/ml)降低了ADP刺激的TXB产生,差异具有统计学意义(P48.7%,差异具有统计学意义(P46.3%,差异具有统计学意义(Ppf4的分析显示,与对照组比较,ADP刺激血小板pf4分泌增加了1.8倍,新络素有效降低了ADP刺激产生的pf4,差异具有统计学意义(Ppf4增加了2.2倍,新络素有效降低了Collagen刺激的pf4释放,差异具有统计学意义(P<0.01)。血小板spreading实验显示血小板活化过程中的形态变化,结果显示对照组血小板较少出现spreading,Collagen(1μg/ml)刺激的血小板出现明显的spreading,而新络素(100μg/ml)处理组血小板较少出现spreading。这表明新络素(100μg/ml)处理有效地抑制了血小板的spreading。对分子机制的研究表明,Collagen刺激血小板Akt磷酸化增加2.7倍(P<0.001),GSK-3β磷酸化增加3.2倍(P<0.01),p38 MAPK磷酸化增加3.0倍(P<0.001),而新络素以剂量依赖的方式降低了Collagen诱导的Akt、GSK-3β和p38 MAPK磷酸化水平。这些结果提示,新络素抑制血小板功能的作用可能与抑制这些蛋白激酶的磷酸化是相关的。*** vivo试验分析新络素对血小板功能的影响

关键词：新络素血小板 ADP Collagen TXB2 6-keto-PGF1α pf4 P-selectin spreading Akt GSK-3β p38MAPK