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pex基因在肿瘤细胞中的表达及其体外对微血管生成的影响

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中国实验诊断学 2010年第1期14卷 14-16页

作者：许传杰刘林林王贵全何旭朱桂彬李玉林吉林大学第二医院病理科吉林长春130041 吉林大学第二医院放疗科吉林大学第二医院科教科吉林大学病理生物学教育部重点实验室

目的探讨pex基因在体外对微血管生成的影响。方法利用RT-PCR、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成实验及鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成实验,体外观察pex基因对血管生成的影响。结果稳定筛选的细胞株BpcDNA-spex经RT-PCR可扩增出spex带;bFGF... 详细信息

目的探讨pex基因在体外对微血管生成的影响。方法利用RT-PCR、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成实验及鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成实验,体外观察pex基因对血管生成的影响。结果稳定筛选的细胞株BpcDNA-spex经RT-PCR可扩增出spex带;bFGF+BpcDNA-spex组小管数明显少于bFGF+BpcDNA、bFGF+B16F10组(Ppex组血管分支点数明显少于bFGF+BpcDNA、bFGF+B16F10组(Ppex基因能够抑制由bFGF诱导的CAM血管的新生、pex基因能够阻抑bFGF对小管形成的促进作用。

关键词： pex基因 RT-PCR 微血管生成

pex基因修饰骨髓间质干细胞对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

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中国微侵袭神经外科杂志 2010年第4期15卷 175-178页

作者：高歌牛朝诗张俊董永飞李明武丁宛海安徽医科大学附属省立医院神经外科合肥230001 安徽省立体定向神经外科研究所

目的探讨pex基因修饰的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对C6胶质瘤细胞的作用及机制。方法分子克隆技术构建pex基因真核表达载体并转染MSC,G418筛选获取稳定表达pex基因的MSC(MSC-pex),将不同数量的MSC-pex细胞与C6胶质瘤... 详细信息

目的探讨pex基因修饰的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对C6胶质瘤细胞的作用及机制。方法分子克隆技术构建pex基因真核表达载体并转染MSC,G418筛选获取稳定表达pex基因的MSC(MSC-pex),将不同数量的MSC-pex细胞与C6胶质瘤细胞进行共培养试验,用水溶性四氮唑法(WST-1)观察MSC-pex对C6胶质瘤细胞增殖的影响,用Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染荧光观察C6胶质瘤细胞凋亡的形态学变化,并用Annexin-Ⅴ-FITC/PI双标记法通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞凋亡率。结果成功获得稳定表达pex基因的MSC-pex,MSC-pex抑制C6胶质瘤细胞的生长作用较明显,Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染荧光发现C6胶质瘤细胞发生凋亡形态改变;流式细胞仪检测显示:MSC-pex转染组和DMEM对照组的凋亡率分别为16.7%和1.3%,差异有统计学意义(Ppex基因修饰的骨髓间质干细胞抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡,为胶质瘤的治疗奠定理论基础。

关键词：神经胶质瘤 pex基因间质干细胞骨髓

pex基因对脑胶质瘤干细胞生物活性影响的实验研究

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PEX基因对脑胶质瘤干细胞生物活性影响的实验研究

作者：黄炜安徽医科大学

学位级别：硕士

目的从C6胶质瘤细胞系中分离培养胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSCs），并进行纯化鉴定从而获得可靠的GSCs细胞株;研究重组子pDsRed2-C1-pex对GSCs生物学活性及微环境的影响。方法（1）采用全贴壁培养法培养C6胶质瘤细... 详细信息

目的从C6胶质瘤细胞系中分离培养胶质瘤干细胞（glioma stem cells,GSCs），并进行纯化鉴定从而获得可靠的GSCs细胞株;研究重组子pDsRed2-C1-pex对GSCs生物学活性及微环境的影响。方法（1）采用全贴壁培养法培养C6胶质瘤细胞，无血清悬浮分离及单克隆培养纯化扩增GSCs，细胞免疫荧光化学染色鉴定GSCs。（2）脂质体介导pDsRed2-C1-pex转染大鼠C6胶质瘤干细胞及荧光显微镜下观察转染荧光，RT-PCR鉴定pex在GSCs的表达及检测pex对血管生成相关因子（MMP-2mRNA、VEGFmRNA）表达的影响。（3） MTT法测定GSCs生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期。结果（1）成功分离并培养出GSCs，单克隆培养GSCs呈球状生长，不易吹散，折光性较强，细胞免疫荧光染色鉴定出肿瘤球表达CD133，其分化的子代细胞表达NSE或GFAP，分化细胞为与神经元或胶质细胞相似的肿瘤细胞。（2）成功瞬时转染，pex在GSCs中高表达并且其对体外培养的GSCs的增殖有明显抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期显示：GSCs-pex转染组细胞周期G0/G1期细胞百分数明显升高为81.10%，S期细胞百分数明显降低为12.04%，差异有统计学意义（P＜0.05）。（3） pex在GSCs可高表达，转染组pex的表达为空白组的2.0倍，为空载体组的1.8倍。转染组与其余两组比较差异有统计学意义（P ＜0.05），MMP-2和VEGFmRNA的表达则恰好相反，均是转染组表达减少，与空白组、空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论（1） C6胶质瘤细胞系中可分离培养出GSCs，pex基因可在GSCs中表达，并对GSCs的生长增殖有明显抑制作用。（2） pex基因对GSCs中MMP-2及VEGF的表达有明显的下调作用，可以推测pex基因可能是通过抑制GSCs分泌MMPs的途径或者是抑制血管源性的GSCs增殖途径而影响其生长。从而将基因治疗与GSCs这个靶点结合起来，精确靶向GSCs为抗脑胶质瘤治疗提供有效的手段。

关键词： pex基因增殖胶质瘤干细胞抑制真核表达载体基质金属蛋白酶血管内皮生长因子

声诺维联合超声辐照介导pex基因转染鼠胶质瘤C6细胞的实验研究

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中华超声影像学杂志 2016年第8期25卷 727-730页

作者：张瑞芳张秀婷孙璐璐刘海艳雷留彬郭海燕郑州大学第一附属医院超声科河南省高等学校临床医学重点研究开放实验室 450052

目的探讨声诺维联合超声辐照介导pEGFP-C1-pex转染鼠胶质瘤C6细胞的可行性，以及pex基因对鼠胶质瘤C6的细胞影响。方法将体外培养的细胞分为空白对照组、超声＋微泡组、质粒组、质粒＋微泡组、质粒＋超声组、质粒＋超声＋微泡组。分别... 详细信息

目的探讨声诺维联合超声辐照介导pEGFP-C1-pex转染鼠胶质瘤C6细胞的可行性，以及pex基因对鼠胶质瘤C6的细胞影响。方法将体外培养的细胞分为空白对照组、超声＋微泡组、质粒组、质粒＋微泡组、质粒＋超声组、质粒＋超声＋微泡组。分别处理后继续培养24h，应用荧光显微镜评估细胞转染率，RT—PCR检测pexmRNA表达，流式细胞仪分析细胞周期。结果质粒＋超声＋微泡组基因转染率最高，可见特异性pex电泳条带高表达，流式细胞仪分析细胞周期G0／G1期百分数明显升高为（75．09±2．46）％，S期百分数明显降低为（17．91±2．63）％，与其他组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论声诺维联合超声辐照可促进pex基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染；在体外pex基因可以通过影响细胞周期来抑制鼠胶质瘤C6细胞的增殖。

关键词：超声检查微气泡神经胶质瘤 pex基因

pex基因转染人脐带间充质干细胞的体外培养及鉴定

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医学信息 2023年第10期36卷 88-92+97页

作者：谢炯戚继北京丰台医院神经外科

目的构建pex基因真核表达载体并成功转染人脐带间充质干细胞（HuMSCs），探讨pex基因修饰HuMSCs的可行性。方法采用全贴壁细胞分离法培养HuMSCs，流式细胞技术鉴定其表面标记物；分子克隆技术构建pex基因真核表达载体[pex-pcDNA3.1（+... 详细信息

目的构建pex基因真核表达载体并成功转染人脐带间充质干细胞（HuMSCs），探讨pex基因修饰HuMSCs的可行性。方法采用全贴壁细胞分离法培养HuMSCs，流式细胞技术鉴定其表面标记物；分子克隆技术构建pex基因真核表达载体[pex-pcDNA3.1（+）]，重组质粒pex-pcDNA3.1（+）转染HuMSCs，验证真核表达载体在HuMSCs中的表达。结果(1)P5代HuCMSCs表面分子标志物结果显示各代均表达间充质干细胞标志CD73、CD90和CD105，而不表达造血干细胞标志CD11b、CD19、CD34、CD45和组织相容抗原HLA-DR；(2)RT-PCR检测显示，目的基因pex位于DNA Maker 500～750 bp的特异性条带；抽提质粒后双酶切鉴定显示，重组质粒pex-pcDNA3.1（+）位于DNA Maker 5000 bp的特异性条带，且重组质粒pex-pcDNA3.1（+）双酶切后位于DNA Maker 500～750 bp和5000 bp两条特异性条带；菌液测序结果证实，质粒载体pex-pcDNA3.1（+）构建成功；重组质粒pex-pcDNA3.1（+）在HuMSCs中高表达。结论构建的pex-pcDNA3.1（+）真核表达载体可用于转染HuMSCs，为进一步探讨其在胶质瘤治疗中的作用奠定了基础。

关键词：人脐带间充质干细胞胶质瘤 pex基因

超声靶向微泡破坏对pex基因转染鼠胶质瘤C6细胞影响的实验研究

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超声靶向微泡破坏对PEX基因转染鼠胶质瘤C6细胞影响的实验研究

作者：张秀婷郑州大学

学位级别：硕士

目的(1)采用声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导pex基因转染鼠胶质瘤C6细胞,旨在探讨其可行性以及pex基因对鼠胶质瘤C6细胞的影响。(2)将超声靶向微泡破坏与脂质体联合来增强pex基因在鼠胶质瘤C6细胞的转染,旨在探讨超声靶向微泡破坏增强... 详细信息

目的(1)采用声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导pex基因转染鼠胶质瘤C6细胞,旨在探讨其可行性以及pex基因对鼠胶质瘤C6细胞的影响。(2)将超声靶向微泡破坏与脂质体联合来增强pex基因在鼠胶质瘤C6细胞的转染,旨在探讨超声靶向微泡破坏增强脂质体转染的可行性及优势所在。方法(1)体外生长良好的鼠胶质瘤C6细胞经0.25%胰酶消化计数后,按照2×105/孔的密度接种于6孔板,分为空白对照组、超声+微泡组、质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+超声+微泡组。超声辐照参数为频率1MHz、辐照功率1.0W/cm2、持续时间30s、占空比20%。各组分别相应处理后继续培养24h,应用荧光显微镜观察各组细胞增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达情况、流式细胞仪检测各组荧光细胞比例以此来评估基因转染率、逆转录PCR检测细胞中pex mRNA的表达量、流式细胞仪分析细胞周期的分布。(2)体外培养的鼠胶质瘤C6细胞按照实验要求可分为对照组、微泡组、超声组、超声+微泡组、脂质体组、超声+微泡+脂质体组。经过相应的处理,24 h后应用荧光显微镜观察EGFP的表达、流式细胞仪检测基因转染率。结果(1)质粒+超声+微泡组:荧光显微镜下表达绿色荧光的细胞最多,流式细胞仪检测基因转染率最高,逆转录PCR可见特异性pex电泳条带高表达,流式细胞仪分析细胞周期分布G0/G1期百分数明显升高,与其他各组细胞相比,上述差异均有统计学意义(P均pex基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染;体外实验中,pex基因可通过影响细胞周期来抑制鼠胶质瘤C6细胞的增殖。(2)超声靶向微泡破坏可增强脂质体介导pex基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染。

关键词：超声辐照微气泡脂质体 pex基因细胞周期神经胶质瘤基因治疗

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pex基因对肿瘤细胞生物学性状的影响

中国实验诊断学 2005年第2期9卷 178-181页

作者：许传杰王贵全张立红朱桂彬王英李玉林吉林大学第二医院病理科吉林长春130041 吉林大学第二医院信息中心吉林大学病理生物学教育部重点实验室

目的　探讨pex基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响。方法　利用脂质体介导转染法,经G4 18稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察pex基因对B16F10细胞生物学性状的影响。结果... 详细信息

目的　探讨pex基因在体外对鼠黑色素瘤细胞B16F10生物学性状的影响。方法　利用脂质体介导转染法,经G4 18稳定筛选后,应用MTT、流式细胞术、软琼脂克隆形成实验及Boyden小室侵袭实验,体外观察pex基因对B16F10细胞生物学性状的影响。结果　BpcDNA spex、BpcDNA、B16F10三组细胞生长速度、细胞周期各时相均无明显差异(P >0 . 0 5 ) ;BpcDNA spex组细胞集落与BpcDNA组和B16F10组相比统计学上存在显著性差异(P pex组细胞集落比BpcDNA组和B16F10组少,且单个集落中细胞数目少;BpcDNA spex组细胞穿透Matrigel胶能力比BpcDNA和B16F10组细胞弱,统计学上存在显著差异(P pex基因转染对体外单纯培养的B16F10细胞生长、增殖无影响;pex基因可抑制B16F10细胞在软琼脂中形成集落的能力及体外侵袭能力。

关键词： pex基因真核表达载体鼠黑色素瘤细胞细胞外基质

pex基因对C6胶质瘤干细胞增殖作用影响的研究

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临床神经外科杂志 2014年第5期11卷 326-329,334页

作者：黄炜张云峰高歌海军安庆医院神经外科 246003 安徽省立医院神经外科

目的探讨pex基因对大鼠C6胶质瘤干细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用传统的血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养。采用免疫荧光染色分离鉴定脑肿瘤干细胞(BTSCs),应用本实验室成功构建的... 详细信息

目的探讨pex基因对大鼠C6胶质瘤干细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用传统的血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养。采用免疫荧光染色分离鉴定脑肿瘤干细胞(BTSCs),应用本实验室成功构建的重组子pDsRed2-C1-pex以脂质体为介导转染体外培养的***-PCR验证真核表达载体在BTSCs中的表达。MTT法观察pex对BTSCs增殖活性的影响,并用流式细胞仪检测胶质瘤干细胞的细胞周期变化。结果成功培养出BTSCs并成功转染,pex在BTSCs中高表达并且其对体外培养的BTSCs的增殖有明显抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期显示:BTSCspex转染组细胞周期G0/G1期细胞百分数明显升高为81.10%,S期细胞百分数明显降低为12.04%,差异有统计学意义(Ppex基因可以在BTSCs中表达,并且能直接抑制体外培养的BTSCs的生长增殖。

关键词： pex基因胶质瘤干细胞真核表达载体

pex基因对C6胶质瘤干细胞MMP-2和VEGF表达的影响

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中华神经外科疾病研究杂志 2012年第1期11卷 37-41页

作者：黄炜牛朝诗贺虎汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽合肥230001

目的探讨pex基因对C6胶质瘤干细胞(GSCs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养。采用单细胞克隆和免疫荧光染色分离... 详细信息

目的探讨pex基因对C6胶质瘤干细胞(GSCs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用血清培养基培养C6胶质瘤细胞系,再取其单细胞悬液悬浮培养于无血清培养基中传代培养。采用单细胞克隆和免疫荧光染色分离鉴定GSCs,运用本实验室成功构建的重组子pDsRed2-C1-pex,以脂质体为介导转染体外培养的GSCs,逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检验真核表达载体在GSCs中的表达及pex基因对GSCs表达MMP-2mRNA、VEGFmNA的影响。结果成功培养出GSCs并成功转染,pex在GSCs中高表达并且体外对MMP-2、VEGF的表达有明显抑制作用,差异有统计学意义(Ppex基因可以在GSCs中表达,并且体外可以抑制MMP-2和VEGFmRNA在GSCs中的表达,为胶质瘤的治疗奠定理论基础。

关键词： pex基因胶质瘤干细胞基质金属蛋白酶血管内皮生长因子