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Vitamin C induces periodontal ligament progenitor cell differentiation via activation of ERK pathway mediated by pelp1

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Protein & Cell 2013年第8期4卷 620-627页

作者： Yan Yan Wenfeng Zeng Shujun Song Fayun Zhang Wenxi He Wei Liang Zhongying Niu Department of Endodontics School of StomatologyFourth Military Medical UniversityXi’an710032China Protein and Peptide Pharmaceutical Laboratory Institute of BiophysicsChinese Academy of SciencesBeijing 100101China Treatment Center of Oral Diseases the 306th Hospital of People’s Liberation ArmyBeijing 100101China Department of Pathology and Experimental Medicine the 306th Hospital of People’s Liberation ArmyBeijing 100101China

The differentiation of periodontal ligament(PDL)progenitor cells is important for maintaining the homeostasis of PDL tissue and alveolar bone.Vitamin C(VC),a water-soluble nutrient that cannot be biosynthesized by humans,is vital for mesenchymal stem cells differentiation and plays an important role in bone remodeling.Therefore,the objective of this study was to determine the function and mechanism of VC in PDL progenitor cells osteogenic differentiation at the molecular level.We demonstrated that VC could induce the osteogenic differentiation and maturation of PDL progenitor cell without other osteogenic agents.During the process,VC preferentially activated ERK1/2 but did not affect JNK or p38.Co-treatment with ERK inhibitor effectively decreased the Vitamin C-induced expression of Runx2.ERK inhibitor also abrogated Vitamin C-induced the minimized nodules formation.pelp1,a nuclear receptor co-regulator,was up-regulated under VC treatment.pelp1 knockdown inhibited ERK phosphorylation.The overexpression of pelp1 had a positive relationship with Runx2 expression.Taken together,we could make a conclude that VC induces the osteogenic differentiation of PDL progenitor cells via pelp1-ERK axis.Our fi nding implies that VC may have a potential in the regeneration medicine and application to periodontitis treatment.

关键词： periodontal ligament progenitor cells Vitamin C pelp1 ERK signaling pathway osteogenic differentiation

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PARP1对pelp1、MYBBP1A的转录调控作用研究

PARP1对PELP1、MYBBP1A的转录调控作用研究

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作者：卢昱河北大学

学位级别：硕士

目的:中国是全球癌症新发病例和死亡人数最多的国家,癌症已经成为中国人的第一死亡原因,是我国当前严重的公共卫生问题。聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂是治疗同源重组修复缺陷(Homologous recombinati... 详细信息

目的:中国是全球癌症新发病例和死亡人数最多的国家,癌症已经成为中国人的第一死亡原因,是我国当前严重的公共卫生问题。聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂是治疗同源重组修复缺陷(Homologous recombination deficiency,HRD)肿瘤最令人兴奋的靶向药物之一。PARP1能够将带负电荷的聚(二磷酸腺苷-核糖)(Poly(ADP-Ribosyl),PAR)链添加到各种受体蛋白上(包括DNA修复蛋白、组蛋白、转录因子),以协调染色质结构的变化。我们前期研究筛选得到一组包含8个基因的基因集合是PARP抑制剂的预测标志物;提高该基因集合基因的转录表达可以使PARP抑制剂抵抗细胞系对PARP抑制剂敏感,这代表了一种独立于HRD的新型协同致死机制。我们发现该基因小组的所有产物都位于染色体17p13.1～17p13.3区域,虽然它们的启动子不同,但高度共同表达。我们推测,PARP1可能通过介导聚二磷酸腺苷核糖基化修饰(Poly(ADP-ribosyl)ation,PARylation)促进该区域染色质结构的松解,以调控该基因集合基因的共表达。本研究随机挑选该基因集合中的脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白 1(Proline,glutamate and leucine rich protein 1,pelp1)和 MYB 结合蛋白 1A(MYB binding protein 1A,MYBBP1A)两个基因,研究PARP1对它们潜在的转录调控及分子机制。本研究通过加深对PARP1转录调控机制的了解,为拓展PARP抑制剂的临床应用范围提供了新思路,并为更多类型疾病提供新型预防和靶向治疗策略,具有重大公共卫生意义。方法:基于前期研究成果,我们拟采用人源结直肠癌细胞株中该基因集合中基因低表达细胞系HT-29,及高表达细胞系HCT116,对二者分别进行PARP1过表达和敲低表达,验证PARP1对pelp1、MYBBP1A的潜在调控作用。1、采用蛋白质免疫印迹实验(Westen blotting,WB)方法考察肿瘤细胞中PARP1过表达或敲低后,PARP1蛋白水平的改变。2、外源性过表达PARP1,采用逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)方法考察 PARP 1 过表达对 pelp1、MYBBP1A转录的影响。3、利用小干扰RNA(Small-interfering RNA,siRNA)转染技术敲低PARP1的基因表达,通过qRT-PCR技术检测肿瘤细胞中PARP1敲低对pelp1、MYBBP1A的转录调控作用。4、构建pelp1、MYBBP1A启动子区域的质粒,使PARP1蛋白高表达之后,采用双荧光素酶报告基因法(Dual-luciferase reporter assay,Luciferase)考察PARP1是否通过启动子结合方式调节pelp1、MYBBP1A的转录表达。5、采用染色体靶向切割和标签化(Cleavage under targets and tagmentation,CUT&Tag)实验方法,通过观察PARP1 C端与MYBBP1A、pelp1基因所在染色体附近区域的结合情况,考察PARP1是否可能通过置换组蛋白调控二者转录表达。结果:1、在HT-29细胞系中过表达PARP1,WB结果证实PARP1的蛋白表达水平明显增加,qRT-PCR结果显示PARP1过表达后pelp1、MYBBP1A转录水平显著上升。2、在HCT116细胞系中敲低PARP1,WB结果证实PARP1蛋白表达水平明显减少,qRT-PCR结果显示敲低PARP1并未显著下调pelp1、MYBBP1A的转录水平。3、在293T细胞中过表达PARP1,将pelp1启动子区域重组质粒和MYBBP1A启动区域重组质粒分别转染到细胞中,采用双荧光素酶报告基因法考察PARP1是否通过启动子结合方式调节pelp1、MYBBP1A的转录表达。实验结果表明,与pGL3-空载质粒相比,pelp1、MYBBP1A基因启动子区域具有荧光素酶活性。过表达PARP1时,pelp1、MYBBP1A的启动子转录活性下降。4、在HT-29细胞系中,采用CUT&Tag的实验方法,结果显示PARP1 C端在MYBBP1A、pelp1所在染色体区域存在结合。结论:1、在结直肠癌细胞系中,PARP1过表达促进pelp1、MYBBP1A的基因表达。2、进一步研究发现,PARP1对pelp1、MYBBP1A的转录调控存在两种相反的作用机制:(1)与pelp1、MYBBP1A启动子区域直接结合可以抑制二者转录水平;(2)通过其PARylation置换组蛋白打开染色质结构,可以增强处于相同染色体片段内的pelp1、MYBBP1A转录

关键词： PARP1 MYBBP1A pelp1 PARylation 转录调控

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ERα-pelp1信号轴对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

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北京口腔医学 2022年第4期30卷 234-237页

作者：张笑雨严妍首都医科大学口腔医学院儿童口腔科北京100050 首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科北京100050

目的初步探讨ERα-pelp1信号通路对牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨向分化能力的影响。方法将人牙周膜干细胞以2×10^(5)/孔的密度接种于6孔板,将ERαsiRNA转染至牙周膜干细胞胞内48h后,收集细胞,分别提取细胞的总RNA和总蛋白。运用qRT-PCR... 详细信息

目的初步探讨ERα-pelp1信号通路对牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨向分化能力的影响。方法将人牙周膜干细胞以2×10^(5)/孔的密度接种于6孔板,将ERαsiRNA转染至牙周膜干细胞胞内48h后,收集细胞,分别提取细胞的总RNA和总蛋白。运用qRT-PCR的方法检测胞内pelp1,ERα以及成骨相关指标Runx2,ALP和OCN的基因水平的表达,运用western blot的方法检测胞内pelp1蛋白的表达。最后将牙周膜干细胞以3×10^(4)/皿的密度接种于6 cm培养皿,用成骨诱导液+1μmol/L的ERα特异性抑制剂MPP处理牙周膜干细胞,以成骨诱导液组为阳性对照,以DMEM组为阴性对照。连续培养牙周膜干细胞14 d后,进行茜素红染色,最后用乙酸将矿化结节溶解后,用酶标仪进行定量检测。结果牙周膜干细胞胞内ERα的表达被抑制后,牙周膜干细胞胞内pelp1的基因以及蛋白的表达均被抑制。同时,牙周膜干细胞胞内成骨相关指标Runx2,ALP和OCN的表达均被抑制。在牙周膜干细胞成骨诱导过程中,ERα的特异性抑制剂能够抑制矿化结节的产生。结果均具有统计学差异(Ppelp1蛋白调控牙周膜干细胞的成骨向分化。

关键词：牙周膜干细胞雌激素受体α pelp1 成骨分化

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pelp1在肝癌中的作用及分子机制研究

PELP1在肝癌中的作用及分子机制研究

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作者：刘星吟湖北科技学院

学位级别：硕士

目的:雌激素受体共调节因子pelp1与多种癌症的发生和发展密切相关,但其在肝癌中的作用尚不清楚,利用siRNA沉默肝癌中的pelp1,观察pelp1对肝癌细胞的增殖、平板克隆形成、迁移、侵袭等的影响,进一步探索其对肝癌的分子作用机制。方法:选... 详细信息

目的:雌激素受体共调节因子pelp1与多种癌症的发生和发展密切相关,但其在肝癌中的作用尚不清楚,利用siRNA沉默肝癌中的pelp1,观察pelp1对肝癌细胞的增殖、平板克隆形成、迁移、侵袭等的影响,进一步探索其对肝癌的分子作用机制。方法:选用肝癌细胞Hep G2为研究对象,使用三组沉默pelp1基因序列pelp1-homo-1、pelp1-homo-2、pelp1-homo-3和阴性对照NC沉默肝癌中的pelp1。Western blot检测沉默效率。从三组中选取一组沉默效果最佳的沉默基因序列进行实验。采用Lipofectamine 2000瞬时转染的方法将pelp1-homo-3转入肝癌细胞Hep G2中,接下来通过CCK8、平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验、Transwell小室迁移实验、Western blot实验对肿瘤细胞的生长增殖、侵袭迁移等生物学特性进行研究,然后通过Western blot实验探索pelp1在肝癌中发挥作用的分子机制。结果:通过Western blot实验筛选得出pelp1-homo-3的沉默效果最佳,达85%以上,故接下来的实验用pelp1-homo-3对pelp1进行沉默,通过CCK8实验发现,pelp1-homo-3实验组与NC阴性对照组对比,pelp1-homo-3转染后的肝癌细胞增殖能力明显受到抑制。通过平板克隆实验得出,转染后的肝癌细胞平板克隆形成能力明显低于阴性对照,通过细胞划痕实验,Transwell小室侵袭实验和迁移实验得知,沉默后pelp1和对照组NC相比可知,pelp1-homo-3转染后的肝癌细胞横向和纵向的迁移能力,侵袭能力均明显受到抑制。最后使用Western blot实验探索pelp1在肝癌中的分子机制,发现pelp1可以上调STAT3信号通路相关基因的表达,即pelp1-homo-3转染后的肝癌细胞和阴性对照相比,pelp1蛋白表达量下调,STAT3与磷酸化STAT3的蛋白表达量均下调。结论:pelp1在肝癌中起致瘤性作用,沉默pelp1可以通过下调STAT3相关信号通路抑制肝癌细胞的恶性生物学行为。

关键词：肝癌 pelp1 siRNA 转染 STAT3

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pelp1激活Ras-Raf-MEK-ERK信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化

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中华老年口腔医学杂志 2019年第5期17卷 275-278页

作者：孙琼严妍刘彦解放军第306医院口腔科北京100101

目的:探讨Ras-Raf-MEK-ERK信号通路在pelp1调控牙周膜干细胞(h PDLSCs)成骨分化过程中的变化。方法:通过单克隆法获得人源的牙周膜干细胞,分别将PEPL1过表达质粒pIRES2-EGFP-pelp1、pelp1 siRNA转染至牙周膜干细胞胞内48 h后,收集细胞,... 详细信息

目的:探讨Ras-Raf-MEK-ERK信号通路在pelp1调控牙周膜干细胞(h PDLSCs)成骨分化过程中的变化。方法:通过单克隆法获得人源的牙周膜干细胞,分别将PEPL1过表达质粒pIRES2-EGFP-pelp1、pelp1 siRNA转染至牙周膜干细胞胞内48 h后,收集细胞,分别提取细胞的总RNA和总蛋白,运用qRT-PCR的方法检测胞内pelp1以及成骨相关指标Runx2、ALP和OCN的基因水平变化,运用western blot的方法检测Ras、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK、MEK、p-ERK、ERK蛋白水平的变化。结果:与转染空载的对照组相比,转入pelp1过表达质粒的牙周膜干细胞胞内pelp1基因的表达量为对照组的3202倍,成骨相关基因Runx2、ALP和OCN的表达分别上调4. 69、2. 27和2. 28倍,其差异具有统计学差异(P1)。同样,与对照组相比,转入pelp1 siRNA后,牙周膜干细胞胞内pelp1的基因表达水平为对照组的0. 33倍,成骨相关基因Runx2、ALP和OCN的表达量分分别为对照组的0. 24、0. 44和0. 57倍,其差异具有显著统计学差异(P1)。蛋白印迹的结果显示,当牙周膜干细胞胞内pelp1基因过表达时,Ras表达水平升高的同时,Raf、MEK以及ERK被激活。抑制牙周膜干细胞胞内pelp1基因的表达时,Ras表达水平下降的同时Raf、MEK以及ERK被抑制。结论:pelp1激活Ras-Raf-MEK-ERK信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化。

关键词： pelp1 牙周膜干细胞 Ras-Raf-MEK-ERK信号通路成骨分化

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pelp1和Ki67在子宫内膜癌中的表达及临床意义

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妇产与遗传（电子版） 2016年第4期6卷 41-45页

作者：王倩李从铸朱彦聊城市人民医院放疗科聊城252000 汕头大学医学院附属肿瘤医院肿瘤妇科

目的探讨pelp1和Ki67在子宫内膜癌中的表达及与临床病理特征之间的关系,分析pelp1与Ki67之间的相关性及其与子宫内膜癌预后之间的关系。方法采用免疫组织化学Envision二步法,检测76例子宫内膜癌标本中pelp1和Ki67蛋白的表达情况。结果PE... 详细信息

目的探讨pelp1和Ki67在子宫内膜癌中的表达及与临床病理特征之间的关系,分析pelp1与Ki67之间的相关性及其与子宫内膜癌预后之间的关系。方法采用免疫组织化学Envision二步法,检测76例子宫内膜癌标本中pelp1和Ki67蛋白的表达情况。结果pelp1和Ki67蛋白均定位于子宫内膜癌组织的细胞核中。子宫内膜癌细胞中,pelp1的表达随分化程度的降低而增强(P1),随手术-病理分期的进展而增强(P1)。Ki67的表达随分化程度的降低而增强(P1),随手术-病理分期的进展而增强(Ppelp1与Ki67表达具有相关性(Ppelp1、Ki67均为高表达,二者呈正相关,在子宫内膜癌的发生、发展中可能起促进作用。

关键词： pelp1 Ki67 子宫内膜肿瘤免疫组织化学

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pelp1在炎性牙周膜细胞中的表达及与细胞增殖和成骨分化的相关性研究

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临床口腔医学杂志 2017年第11期33卷 643-647页

作者：王婧祝强李学盛庞恋苏王燕一解放军总医院海南分院口腔科海南三亚572000 解放军总医院泌尿外科北京100853

目的:探讨pelp1与牙周膜细胞骨向分化的相关性。方法:通过对正常人牙周膜细胞与炎症人牙周膜细胞的分离、培养、鉴定,采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光化学及Western blot技术,分别从基因和蛋白水平检测pelp1在两组细胞中的表达及其... 详细信息

目的:探讨pelp1与牙周膜细胞骨向分化的相关性。方法:通过对正常人牙周膜细胞与炎症人牙周膜细胞的分离、培养、鉴定,采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光化学及Western blot技术,分别从基因和蛋白水平检测pelp1在两组细胞中的表达及其在细胞增殖和骨向分化过程中的表达变化。结果:在H-hPDLCs和I-hPDLCs中均存在pelp1 mRNA及蛋白的表达。pelp1参与调节hPDLCs的生长与增殖,在H-hPDLCs中与细胞增殖呈正相关,在I-hPDLCs中与细胞增殖呈负相关。pelp1的表达水平在两组hPDLCs骨向分化中亦表现出不同的变化趋势,在H-hPDLCs骨向诱导分化后升高,在I-hPDLCs骨向诱导分化后降低。结论:pelp1在炎症人牙周膜细胞中表达并参与调节细胞的生长增殖及骨向分化。

关键词：牙周膜细胞 pelp1 成骨分化增殖

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SD大鼠睾丸中pelp1表达的激素相关性研究

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河北医学 2016年第6期22卷 986-988页

作者：祝强董隽王春扬单立松孙帧朱大庆洪宝发中国人民解放军总医院泌尿外科北京海淀区100853

目的:探讨pelp1在睾丸组织中的表达。方法:将21只8周龄SD大鼠随机分为对照组、去势组、去势并补充雌激素组。通过RT-PCR与免疫组织化学的方法进行检测,当雌激素水平不同时,pelp1在睾丸组织中的表达如下。结果:pelp1在大鼠睾丸组织中表达... 详细信息

目的:探讨pelp1在睾丸组织中的表达。方法:将21只8周龄SD大鼠随机分为对照组、去势组、去势并补充雌激素组。通过RT-PCR与免疫组织化学的方法进行检测,当雌激素水平不同时,pelp1在睾丸组织中的表达如下。结果:pelp1在大鼠睾丸组织中表达,并且随着雌激素水平的增高而增高。结论:pelp1在大鼠睾丸组织中的表达与雌激素水平正相关。

关键词：雌激素 pelp1 SD去势大鼠睾丸

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核受体辅助调节因子pelp1与肿瘤关系的研究进展

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解剖科学进展 2017年第4期23卷 420-422页

作者：潘昱张冬梅张艳枝王麟哈尔滨医科大学大庆校区病理生理学教研室大庆163319

类固醇激素发挥生物学活性需要核受体辅助调节因子(NRC)的参与。脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(pelp1)是新近发现的一种NRC,具有独特的分子结构和生物学功能。作为一种支架蛋白,pelpl既参与类固醇激素调控靶基因转录的基因组作用,又参... 详细信息

类固醇激素发挥生物学活性需要核受体辅助调节因子(NRC)的参与。脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(pelp1)是新近发现的一种NRC,具有独特的分子结构和生物学功能。作为一种支架蛋白,pelpl既参与类固醇激素调控靶基因转录的基因组作用,又参与类固醇激素激活激酶信号系统的非基因组作用。pelp1在多种肿瘤组织中高表达,加快细胞周期、抑制细胞凋亡、诱导上皮-间质转化(EMT)、增强肿瘤细胞迁移侵袭能力和促进肿瘤细胞耐药,具有癌基因的特征,可能成为判断肿瘤预后的标志物和肿瘤治疗的作用靶点。

关键词： pelp1 支架蛋白乳腺癌细胞靶基因转录类固醇激素临床肿瘤治疗细胞凋亡癌基因雌激素受体卵巢癌细胞系

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黄腐酚对皮肤鳞癌A431的抑制作用及机制研究

黄腐酚对皮肤鳞癌A431的抑制作用及机制研究

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作者：王攀琦湖北科技学院

学位级别：硕士

目的:探讨黄腐酚（Xanthohumol）对人皮肤鳞癌细胞A431细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响和作用机制。方法:给予不同浓度梯度的黄腐酚（0、20、40、60、80、100μmol/L）分别处理A431细胞24 h、48 h和72 h,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色... 详细信息

目的:探讨黄腐酚（Xanthohumol）对人皮肤鳞癌细胞A431细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响和作用机制。方法:给予不同浓度梯度的黄腐酚（0、20、40、60、80、100μmol/L）分别处理A431细胞24 h、48 h和72 h,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测A431细胞增殖活性;利用细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验、Transwell小室侵袭实验检测黄腐酚处理后A431细胞的迁移能力和侵袭能力;利用荧光染色实验检测黄腐酚处理后A431细胞的凋亡与坏死情况;利用MDC染色实验检测黄腐酚处理后A431的自噬情况;用β-半乳糖染色试剂盒检测黄腐酚处理后A431细胞的自噬情况;利用Western Blot检测A431细胞中JAK2、STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase 9和Caspase 3蛋白的表达;利用分子对接软件预测黄腐酚与pelp1的结合能力;利用瞬时转染si RNA-pelp1的方法将下调A431细胞中pelp1蛋白的表达,随后利用Western Blot检测A431细胞中pelp1、SRC和STAT 3蛋白的表达。结果:通过MTT实验发现,与空白对照组相比,经不同浓度的黄腐酚处理后,A431细胞增殖活力受到抑制,且随着浓度和时间的延长抑制率也随之上升,具有剂量时间依赖性;细胞划痕实验发现,随着药物浓度的加大,A431伤口愈合面积不断减少;Transwell迁移和侵袭实验发现,经不同浓度的黄腐酚处理后,随着药物浓度的加大,A431细胞纵向迁移和侵袭细胞数量不断减少;荧光结果显示,经不同浓度的黄腐酚处理后,随着药物浓度的加大,A431细胞凋亡与坏死的细胞不断增多;MDC染色与β-半乳糖试剂盒仍然色结果显示,经不同浓度的黄腐酚处理后,随着药物浓度的加大,A431细胞未呈现自噬与衰老特征;WB实验发现经不同浓度的黄腐酚处理后,随着药物浓度的加大,A431细胞中JAK2、STAT3和Bcl-2有下调趋势,而Bax、Caspase 9和Casepase 3具有上调趋势;分子对接实验发现,黄腐酚可以与pelp1蛋白进行结合;转染si RNA-pelp1后的WB实验发现,A431细胞中pelp1、SRC、STAT3均具有下调趋势。结论:黄腐酚可呈剂量依赖性的抑制A431细胞的增殖、侵袭、横向及纵向迁移,并可以通过调控JAK2、STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase 9和Caspase 3蛋白促进A431细胞的凋亡;分子对接实验发现黄腐酚可与pelp1进行结合;利用si RNA-pelp1下调pelp1的表达同样可以下调SRC、STAT3蛋白的表达,我们推测黄腐酚可能可以通过调控pelp1下调SRC、STAT3通路促进A431细胞的凋亡。

关键词：皮肤鳞癌黄腐酚 pelp1 STAT3 凋亡

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