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高分子超/微滤膜的亲水化改性：从peg化到离子化

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功能材料 2011年第2期42卷 193-197页

作者：赵翌帆朱利平徐又一朱宝库浙江大学高分子科学与工程学系高分子合成与功能构造教育部重点实验室膜与水处理技术教育部工程研究中心浙江杭州310027

众多高分子超/微滤(UF/MF)膜材料存在疏水性强、抗污染能力低下、生物相容性不佳的缺点,限制了UF/MF膜的推广应用,膜材料的亲水化改性被认为是解决这一难题的有效方法,也是近年来膜材料领域的研究热点之一。高分子UF/MF膜的亲水化改性... 详细信息

众多高分子超/微滤(UF/MF)膜材料存在疏水性强、抗污染能力低下、生物相容性不佳的缺点,限制了UF/MF膜的推广应用,膜材料的亲水化改性被认为是解决这一难题的有效方法,也是近年来膜材料领域的研究热点之一。高分子UF/MF膜的亲水化改性方法可分为物理改性和化学改性两大类,在这些方法中,膜表面的聚乙二醇(peg)化和离子化占据了重要地位,近年来,UF/MF膜的亲水化改性研究重点呈现出从peg化向离子化转移的趋势。首先对UF/MF膜材料的各种改性方法进行了简要的综述,然后重点阐述了UF/MF膜亲水化改性中的peg化和离子化研究进展。

关键词：超/微滤膜抗污染 peg化离子化

peg化呋喃二烯固体脂质纳米粒的制备及体外巨噬细胞摄取研究

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中国新药杂志 2012年第21期21卷 2552-2556,2561页

作者：谢鑫鑫王俊腾秦利芳林东海烟台大学药学院烟台264005

目的:研究peg化呋喃二烯固体脂质纳米粒(peg-FDE-SLN)的制备方法,并考察其理化性质及细胞摄取性能。方法:实验采用乳化蒸发-低温固化法制备peg-FDE-SLN,以粒径、Zeta电位、多分散系数、包封率为评价指标,通过单因素考察选择制备peg-FDE-... 详细信息

目的:研究peg化呋喃二烯固体脂质纳米粒(peg-FDE-SLN)的制备方法,并考察其理化性质及细胞摄取性能。方法:实验采用乳化蒸发-低温固化法制备peg-FDE-SLN,以粒径、Zeta电位、多分散系数、包封率为评价指标,通过单因素考察选择制备peg-FDE-SLN的最佳处方。以小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)为模型做体外细胞摄取实验。结果:制备peg-FDE-SLN的最佳处方为固态脂质单硬脂酸甘油酯100 mg,液态脂质中碳链三酰甘油40 mg,乳化剂蛋黄卵磷脂13 mg,聚乙二醇硬脂酸酯150 mg,制备的样品粒径为(272.9±2.4)nm,多分散系数为(0.193±0.022),Zeta电位为(-19.82±0.52)mV。包封率为(90.0±1.0)%。体外细胞摄取实验证明,MPM对FDE-SLN的摄取随着聚乙二醇硬脂酸酯的加入以及peg相对分子质量的增加而逐渐减小,以peg5000-FDE-SLN摄取最少为(8.4±0.4)%。结论:本实验制备的peg-FDE-SLN,能够改善巨噬细胞对FDE-SLN的摄取作用,peg链长度影响MPM对FDE-SLN的摄取作用,peg链越长MPM摄取越少。

关键词：呋喃二烯固体脂质纳米粒 peg化小鼠腹腔巨噬细胞摄取

重组猪尿酸氧化酶peg化修饰的影响因素考察

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中国新药杂志 2013年第11期22卷 1263-1268页

作者：朱莹莹荣俊匡红艳孙中杰长江大学生命科学学院荆州434025 长江大学临床医学院荆州434025

目的:考察mpeg-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX peg化的影响。方法:用mpeg-SC对纯化rPUOX进行peg化修饰。通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电... 详细信息

目的:考察mpeg-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX peg化的影响。方法:用mpeg-SC对纯化rPUOX进行peg化修饰。通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对修饰效果进行评估。结果:随着mpeg-SC/rPUOX摩尔比值的提高,修饰程度也提高。在pH 10.1及其以下的碳酸缓冲液中rPUOX修饰不充分,pH 10.5修饰效果最好,pH 11.6效果下降。碳酸缓冲液为0.02 mol.L-1时,rPUOX溶解不完全,0.06和0.1mol.L-1的溶解和修饰均比较理想,0.1 mol.L-1溶液中rPUOX残余活力较高。摩尔比值相同的条件下,随着酶浓度的提高修饰效果也提高,5 ***-1的酶浓度更加适合修饰反应。结论:优化的rPUOX peg化的条件是:mpeg-SC/rPUOX摩尔比值为18.6倍;碳酸缓冲液的pH值为10.5,浓度为0.1 mol.L-1;酶质量浓度为5 ***-1。

关键词：重组猪尿酸氧化酶 peg化摩尔比值 pH 缓冲液浓度酶浓度

peg化新藤黄酸脂质体加速血液清除现象的考察及其初步机制探讨

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PEG化新藤黄酸脂质体加速血液清除现象的考察及其初步机制探讨

作者：叶茜安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:(1)制备研究ABC现象的模型制剂peg-GNA-Liposomes,选出最优工艺与处方,并对其进行表征;(2)证明模型制剂peg-GNA-Liposomes二次注射具有ABC现象,并考察前后两次注射间隔时间及剂量对该现象强弱的影响,与此同时考察各组肝、脾组织药... 详细信息

目的:(1)制备研究ABC现象的模型制剂peg-GNA-Liposomes,选出最优工艺与处方,并对其进行表征;(2)证明模型制剂peg-GNA-Liposomes二次注射具有ABC现象,并考察前后两次注射间隔时间及剂量对该现象强弱的影响,与此同时考察各组肝、脾组织药物蓄积量;(3)从血液学与组织学水平分别对ABC现象的产生机制进行初步探讨。旨在为最终消除peg化纳米载体二次注射产生的ABC现象提供解决思路。方法:(1)参考实验室前期研究,并以包封率为主要考察指标,结合单因素考察与正交试验,最终确定用溶剂注入法制备peg-GNA-Liposomes的最优处方,并通过扫描电镜、粒径、Zeta电位、体外释放等对最优处方下的peg-GNA-Liposomes进行表征;(2)确定以HPLC法检测血浆与肝、脾组织中GNA的方法。通过将首次注射peg-GNA-Liposomes与二次注射后药时曲线下降的速度作比较,证明该制剂二次注射是否具有ABC现象。将两次注射间隔时间分为3天、5天和7天三组,比较三组药时曲线下降速度,判断ABC现象是否具有时间依赖性。将注射剂量分为高、中、低三组,通过药时曲线下降快慢判断ABC现象是否具有剂量依赖性。在研究该现象的剂量因素时,由于临床实际应用时多数纳米载体多次给药剂量相等,因此课题组设计了前后两次给药剂量相同的高、中、低组,结果显示高剂量ABC现象最强,中剂量最弱,考虑到原因可能是由于当前后两次注射剂量相等时,高、中、低剂量三组之间的二次注射剂量不同,导致对最终结果的分析判断不够平行。因而在此基础上进一步设计了首次给药分高、中、低剂量,第二次给药均为中剂量的三组实验,将二次给药后的药时曲线与只给一次中剂量的药时曲线分别作对比,考察首次注射剂量不同对二次注射后ABC现象的影响。在考察各组大鼠血药浓度的同时,同步设计了与以上各组给药方式相同的肝、脾组织药物蓄积实验,在注射后30 min取出肝、脾组织,以HPLC法检测各组织中药物浓度,并进行对比考察;(3)针对上一步中血液药物清除加快,用ELISA法对应地考察了不同间隔天数与不同剂量下血液中抗peg-Ig M量的变化情况。针对上一步中组织药物蓄积增多,用Western blotting法考察了GNA原料药组、空白peg-Liposomes组与peg-GNA-Liposomes组的肝组织中ABCA1、MDR1、ABCG1转运体在注射三天后的表达量变化情况。结果:(1)确定以溶剂注入法制备peg-GNA-Liposomes的最优工艺与处方:GNA:6 mg,HSPC:135 mg,胆固醇:11.3 mg,m peg-PE:11.3 mg,有机溶剂乙醇:2m L,四氢呋喃:1ml,蒸馏水:24 m L,制备温度为60℃,搅拌速度1400 rpm/min,搅拌时间为3 h。最优处方下的peg-GNA-Liposomes的制备的peg-GNALiposomes呈类球形,边缘无粘连,平均粒径为124.4 nm,Zeta电位值为(-29.6±0.35)m V,制剂在4℃条件下30天内较稳定,其体外释放符合Higuchi方程,具备一定缓释效应。(2)peg-GNA-Liposomes在SD大鼠体内二次注射具有ABC现象,且该现象随两次给药时间间隔的增加而递减。考察剂量对ABC现象的影响时,当前后两次给药相等,高剂量组ABC现象最强,中剂量组最弱;当将首次剂量分组,第二次给相同剂量时,ABC现象随首次给药剂量的减少而递减。(3)Ig M检测结果显示:首次注射peg-GNA-Liposomes后,大鼠血清中抗peg-Ig M的含量随两次给药时间间隔的递增而递减,首次注射高、中、低剂量的peg-GNA-Liposomes时,五天后血清中抗peg-Ig M含量随剂量的增加而增加,即抗peg-Ig M的产生具有时间与剂量依赖性。WB结果显示,注射三天之后的肝组织中GNA原料药组、空白peg-Liposomes组与peg-GNA-Liposomes组的ABCA1相较于空白组均上调,其中peg-GNA-Liposomes组上调程度最高,空白peg-Liposomes次之;空白peg-Liposomes组与peg-GNA-Liposomes组能引起MDR1表达的上调,GNA原料药组MDR1表达量无明显变化;peg-GNA-Liposomes组亦能引起ABCG1表达量的明显上调,而GNA原料药组与空白peg-Liposomes组ABCG1表达量无明显变化。结论:作为peg化纳米载体的peg-GNA-Liposomes二次注射时可产生ABC现象,且该现象具有剂量和时间依赖性——在首次注射高剂量(1.825 mg/kg)与注射间隔天数为三天时表现出最强的ABC现象,即药物在血液中清除最快且肝脾蓄

关键词：加速血液清除现象 peg化药代动力学新藤黄酸脂质体

peg化脂质纳米粒促进非诺贝特口服吸收的研究

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PEG化脂质纳米粒促进非诺贝特口服吸收的研究

作者：陈桂江暨南大学

学位级别：硕士

脂质纳米粒(Lipid nanoparticles)是在脂质体、微乳等纳米载体基础上逐渐发展起来的一种新型药物递送载体。因其载药量高、载体材料生物相容性好、粒径小及相对表面积大、能增加制剂在肠系黏膜的黏附性等多方面优势,从而能够显著提高药... 详细信息

脂质纳米粒(Lipid nanoparticles)是在脂质体、微乳等纳米载体基础上逐渐发展起来的一种新型药物递送载体。因其载药量高、载体材料生物相容性好、粒径小及相对表面积大、能增加制剂在肠系黏膜的黏附性等多方面优势,从而能够显著提高药物的口服生物利用度,在难溶性药物口服给药方面受到广泛的关注。普通脂质纳米载体(非peg化)口服后易被胰脂肪酶降解,使包载于其中的药物快速析出或暴露在胃肠道环境中受到酶降解,因而影响药物的口服吸收,导致生物利用度差异性较大。对药物结构进行peg化改造或使用peg化材料制备药物载体被证实也能够增加药物的生物利用度。但是,peg化脂质纳米载体如何影响荷载药物的口服吸收机制尚不十分清晰。在本研究中,我们采用不同方法制备载非诺贝特(Fenofibrate,FN)的peg化脂质纳米载体(pegylated lipid nanocarriers,PLNs)和普通脂质纳米载体(Conventional lipid nanocarriers,CLNs),通过比较两者在体外含胰脂肪酶和不含胰脂肪酶的介质中的释放、脂解情况,验证并解释了peg化对脂质纳米载体的保护作用;并研究PLNs和CLNs经口服后在大鼠胃肠道中的吸收情况,从而阐述脂质纳米载体的peg化对模型药物非诺贝特的吸收影响。第一章,建立非诺贝特的分析方法,结合所制备脂质纳米载体的特点,采用离心超滤法测定其包封率。并且对含量测定进行方法学验证,为下一步脂质纳米载体制备的处方筛选和工艺研究奠定了良好的基础。含量测定试验结果表明:建立的实验方法能满足研究的需要,FN液相图谱峰形良好,辅料对药物测定无干扰。第二章,以BCSII类药物FN为模型药物,采用溶剂扩散法制备载FN的PLNs(FN-PLNs)。以载体的粒径和多分散系数(PDI)为指标,考察了处方各组分比例对制剂的影响,并通过形态特征、傅立叶红外光谱学和体外释放情况对制剂进行表征研究。结果表明:FN-PLNs粒径为186.7 nm(PDI=0.207),包封率>95%。处方中各组分比例显著影响PLNs的粒径、稳定性和包封率。FN-PLNs通过透射电镜观察显示为球形或类球形结构,大部分粒子小于342 nm,分散均匀,无特别大的粒子存在。以0.5%SDS溶液为释放介质,采用逆相平衡透析法考察体外释药情况,结果显示FN-PLNs与FN-CLNs的体外释药并无显著区别,两者相似性因子f2值为58,说明两者具有相似的释放行为。第三章,通过脂质纳米载体胃肠道转运行为研究,考察了FN-PLNs和FN-CLNs在胃肠道转运中的命运。脂质纳米载体与大鼠小肠提取液经37°C孵育后,观察载体粒径的变化;通过在释放介质中加胰脂肪酶,计算体外释放过程中药物累积释放率;通过体外模拟体内肠液环境进行胰脂肪酶脂解实验,进一步验证脂质纳米粒的peg化对脂解的阻滞作用。结果表明:相对于普通脂质纳米载体,在大鼠小肠液中孵育后,FN-PLNs粒径改变明显小于FN-CLNs;在体外含有胰脂肪酶的释放体系中,1 h后总累积释放率两者没有显著的区别,但在前20min中,FN-CLNs的药物释放率明显高于FN-PLNs,两者相似性因子f2值为33,说明两者的释放有明显的区别;体外脂解实验结果显示FN-PLNs粒径改变明显小于FN-CLNs;说明了peg化的脂质纳米粒能够减少粘蛋白的黏附和抑制胰脂肪酶对脂质材料的降解。第四章,采用大鼠灌胃法观察制剂在大鼠体内的药动学情况。以市售Lipanthyl 胶囊内容物作为参比制剂,考察FN-PLNs和FN-CLNs的相对生物利用度。结果表明:与市售微粉化制剂的生物利用度做对比,FN-PLNs和FN-CLNs的相对利用度分别为157.0%和123.9%。FN-PLNs的血药浓度-时间曲线下面积(AUC0–t=51.04μg?h/m L)比FN-CLNs(AUC0–t=41.19μg?h/m L)和市售Lipanthyl 胶囊内容物(AUC0–t=32.52μg?h/m L)的均显著提高,说明通过peg化的脂质纳米载体递送药物,能显著地增加非诺贝特的生物利用度。根据前面的研究结果,分析了脂质载体的体外释放和体内吸收之间的体内外相关性(IVIVC),初步阐释脂质纳米载体的peg化如何减少粘蛋白的黏附和抑制胰脂肪酶对脂质材料的脂解速率,从而进一步改善BCSII类药物的口服生物利用度。通过本研究,能较好的理解脂质纳米载体在体内的处置过程,当载药脂质纳米粒经peg脂质材料修饰后,能减少胃肠道游离粘蛋白对纳米粒的黏附和延缓脂肪酶对脂质的降解作用,因而能有效的提高口服药物的生物利用度。本文对脂质纳米粒的体内行为进行了探索性观察,结合药动学研究初步了解到脂质纳米粒的peg化能够改善难溶性药物的口服吸收,本研究可为BCS II类药物口服

关键词：非诺贝特脂质纳米载体 peg化体外释放脂解实验口服生物利用度吸收机制

美沙拉嗪peg化前药在不同种属血浆中蛋白结合率的测定

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中国医院药学杂志 2016年第12期36卷 964-967页

作者：牛青梅周庆颂孙若飞周婧婧江西科技师范大学药学院江西南昌330013

目的:测定美沙拉嗪peg化前药在不同种属血浆中的蛋白结合率,考察peg化对药物蛋白结合率的影响。方法:采用血浆平衡透析法,以紫外分光光度法对透析内液与外液中的药物含量进行测定,计算药物与小鼠血浆、犬血浆、兔血浆及牛血浆的蛋白结... 详细信息

目的:测定美沙拉嗪peg化前药在不同种属血浆中的蛋白结合率,考察peg化对药物蛋白结合率的影响。方法:采用血浆平衡透析法,以紫外分光光度法对透析内液与外液中的药物含量进行测定,计算药物与小鼠血浆、犬血浆、兔血浆及牛血浆的蛋白结合率。结果:美沙拉嗪peg化物的低、中、高(1.08,1.35,1.62 mg·mL-1)3种质量浓度的小鼠血浆蛋白结合率分别为(22.31±5.28)%,(17.15±3.21)%,(16.11±4.55)%;犬血浆为(25.16±5.87)%,(22.47±4.14)%,(23.14±3.46)%;兔血浆为(17.13±8.26)%,(13.87±6.32)%,(15.93±2.31)%;牛血浆为(14.41±6.21)%,(18.84±7.80)%,(14.18±5.23)%。结论:美沙拉嗪peg化物血浆蛋白结合程度较低,种属间存在一定差异。与原型药物相比,药物经peg化后,血浆蛋白结合呈下降趋势。

关键词：美沙拉嗪 peg化蛋白结合率平衡透析法种属差异

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抗HIV多肽的定点peg化及糖基化修饰

抗HIV多肽的定点PEG化及糖基化修饰

作者：王丹丹长春理工大学

学位级别：硕士

T-20（商品名：Fuzeon）是瑞士Roche和美国Trimeris公司共同研制的、目前已应用于临床治疗的抗HIV多肽,同其它多肽药物一样,T-20也存在体内半衰期短、稳定性差等缺陷。本论文以获得药效长、稳定性高的抗艾滋多肽为目标,通过化学合成在... 详细信息

T-20（商品名：Fuzeon）是瑞士Roche和美国Trimeris公司共同研制的、目前已应用于临床治疗的抗HIV多肽,同其它多肽药物一样,T-20也存在体内半衰期短、稳定性差等缺陷。本论文以获得药效长、稳定性高的抗艾滋多肽为目标,通过化学合成在多肽的非活性域引入可被选择性修饰的氨基酸位点（Cys-SH）,结合有机合成与酶促合成技术,对多肽药物T-20进行定点peg（聚乙二醇）化和糖基化修饰,为后续T-20 peg化及糖基化修饰物的活性研究奠定基础。本论文用三种不同分子量的peg,分别以79%,82%,80%的产率得到了三种对应的peg化修饰多肽,此外,本论文还设计合成了四种糖基修饰基,并在温和的反应条件（buffer NaH2PO4/Na2HP04 pH=7.2）下,将其中两种糖基修饰剂分别以80%和85%的产率成功偶合到多肽上,首次获得了两种糖基化T-20多肽,以上样品可用于后续活性及作用机制、药代动力学行为研究。本论文的实验方法解决了多肽药物化学修饰过程中（1）多点随机修饰导致的产物活性降低、成分复杂、纯化困难;（2）修饰反应条件剧烈导致的多肽构象变化以致失活等瓶颈问题。

关键词：抗HIV多肽糖基化定点修饰 peg化长效药物

转运siRNA的peg化EGFR靶向免疫脂质体的制备及抗肝癌作用的研究

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转运siRNA的PEG化EGFR靶向免疫脂质体的制备及抗肝癌作用的研究

作者：张莹莹第二军医大学

学位级别：硕士

小干扰RNA（siRNA）能通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术在mRNA水平通过抑制靶基因的表达从而下调蛋白的表达。siRNA因其高特异性的基因沉默效率和低毒性等特点被认为是最具潜力的抗肿瘤药物。然而由于血液中存在的核酸酶及带... 详细信息

小干扰RNA（siRNA）能通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术在mRNA水平通过抑制靶基因的表达从而下调蛋白的表达。siRNA因其高特异性的基因沉默效率和低毒性等特点被认为是最具潜力的抗肿瘤药物。然而由于血液中存在的核酸酶及带正电荷的一些蛋白的存在使siRNA在血液中不稳定，这就使得将siRNA传递到肿瘤细胞成为一个非常具有挑战性的任务。为了解决这个问题，许多siRNA传递系统发展起来。在这些系统中，主要包括：脂质依赖的系统、聚合物依赖的系统、肽结合系统、不同抗体单链片段融合蛋白系统。在这些不同载体系统中，阳离子脂质体因具有可自然降解、生物相容性好;可以将siRNA浓缩为带正电荷的磷脂复合物，免受核酸酶的降解等优点，使其成为自20世纪八十年代受到研究者的重视和应用最广泛的载体。为了进一步沉默靶基因，配体修饰的免疫脂质体成为当前的研究热点。目前，Huang等发明的茴香酰胺靶向的LPD(Liposome-Polycation-DNA)载体系统能将siRNA有效地传递到σ受体过表达的肿瘤细胞。为了使LPD成为使用更广泛的载体系统，我们首次将抗体（anti-EGFR的Fab’）应用在LPD上，制得高peg含量的TLPD-FCC。研究结果显示TLPD-FCC能有效的将siRNA传递到EGFR高表达的乳腺癌细胞，并具有良好的体内外基因沉默效率。然而，TLPD-FCC在EGFR高表达的肝癌细胞中并没有显示较好的基因沉默活性。因此，为了提高TLPD-FCC在肝癌细胞的基因沉默活性，本研究在我们之前的研究基础上对TLPD-FCC进行了一些改造，包括降低peg化程度和增加抗体连接效率等来优化处方，然后对该处方进行深入的体内外抗肿瘤活性的研究。首先，我们通过薄膜分散法制备DOTAP/Chol脂质体，然后将脂质体与鱼精蛋白、小牛胸腺DNA、siRNA混合制的裸的LPD，然后将peg和抗体通过一定方式插入LPD中得到EGFR靶向的免疫脂质体。由于peg化程度和抗体连接方式是影响脂质体靶向效率的两个主要因素，因此我们制备了不同peg化程度（含peg分别为5mol%、7.5mol%、10mol%）和不同抗体连接方式（传统方法和后插入方法）的免疫脂质体TLPD，然后以粒径、zeta电位、抗体连接效率、siRNA基因沉默效率为指标进行处方优化，最后得到通过后插入方法制备的含7.5mol%peg的免疫脂质体TLPD-FP75为最佳处方。然后我们考察了靶向与非靶向免疫脂质体（TLPD-FP75和NTLPD-FP75）对siRNA的结合能力、包封率、siRNA的血清稳定性、细胞内吞、转染效率和基因沉默效率。凝胶阻滞实验表明NTLPD-FP75和TLPD-FP75对siRNA均具有较强的结合能力，这与高包封率（>85%）的结果一致。体外血清稳定性实验表明该载体能明显的延长siRNA在血清中的时间至144h。通过共聚焦显微镜观察细胞内吞情况，发现转染TLPD-FP75的细胞中CFPE和Cy5-siRNA标记显著高于含NTLPD-FP75细胞，说明TLPD-FP75可以通过配体-受体介导的方式将siRNA内吞到细胞内。TLPD-FP75在不同EGFR表达的肝癌细胞（SMMC-7721/Hep3B/LM3）中转染效率和基因沉默效率的结果表明：TLPD-FP75的转染效率和基因沉默效率明显高于NTLPD-FP75，且具有一定的抗原特异性。在抗RhoA-siRNA实验中，TLPD-FP75能有效的下调RhoA的表达并抑制细胞的迁移。在体内实验中，我们建立了SMMC-7721裸鼠的肝脏原位癌模型，探讨了转运siRNA脂质体的体内分布情况、细胞吸收及其基因沉默活性。体内组织分布结果表明，同NTLPD-FP75组相比，TLPD-FP75组能显著增加siRNA在肿瘤部位的聚集;另外体内细胞吸收结果显示，TLPD-FP75主要通过受体介导的内吞方式有效的聚集在肿瘤细胞。更为重要的是TLPD-FP75的体内基因沉默效率是要明显高于其它形式的脂质体。综上，本研究通过后插入方法制备的含7.5mol%peg的的免疫脂质体能特异性的将siRNA传递到EGFR过表达的肝癌细胞内，并具有良好的抗肿瘤活性。因此该载体可以作为潜在的基因治疗手段用于肝癌的临床治疗。

关键词：靶向LPD siRNA peg化肝癌 EGFR 基因沉默体内和体外

重组人干扰素-α2b的纯化以及位点特异性peg化研究

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重组人干扰素-α2b的纯化以及位点特异性PEG化研究

作者：陆泳旭天津大学

学位级别：硕士

干扰素是细胞因子的一种,具有免疫调节的作用。当人体遭遇细菌、病毒的侵袭时,机体会释放干扰素抑制病原体对人体的破坏。基于干扰素对免疫系统的调节作用,许多医药公司利用基因工程技术以及生物化学技术将干扰素开发成一种抗病毒药物... 详细信息

干扰素是细胞因子的一种,具有免疫调节的作用。当人体遭遇细菌、病毒的侵袭时,机体会释放干扰素抑制病原体对人体的破坏。基于干扰素对免疫系统的调节作用,许多医药公司利用基因工程技术以及生物化学技术将干扰素开发成一种抗病毒药物。随着药物的应用,干扰素类的蛋白药物出现了许多缺点,其中最重要的是其较短的半衰期。由于人体消化系统内的胰蛋白酶对蛋白质的破坏,蛋白类药物只能通过皮下注射的方式直接注入到血液循环系统中发挥作用,但血液循化系统中也存在蛋白质水解酶。此外,注入到体内的蛋白质还要面对肾小球的滤过作用。因此,干扰素药物在体内的半衰期很短,需要病人经常性地进行皮下注射给药。本实验为了解决干扰素类药物半衰期短的特性,综合了近年来提高半衰期的方法,选择了位点特异性peg化来提高干扰素的半衰期。本实验通过基因重组技术在干扰素-α2b结构中构建了第五个半胱氨酸,从而在其表面引入了一个自由巯基。通过自由巯基与马来酰亚化peg的反应,达到位点特异性的peg化。这一反应避免了多位点修饰以及同分异构体的产生,使提纯过程得到了简化,最终的蛋白纯度得到了提高。分离提纯过程中,选择了离子交换层析进行粗提取蛋白,应用疏水层析分离不同结构的重组人干扰素-α2b,最后使用羟基磷灰石层析进行进一步的纯化。获得纯度较高(分离度>1.5)的重组人干扰素-α2b后,进行了peg化反应的研究,其反应效率达到75%。

关键词：干扰素-α2b 半衰期 peg化纯化