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作者：付尚淼南昌大学

学位级别：硕士

急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是脓毒症患者的常见并发症之一,机械通气是治疗急性肺损伤的主要治疗策略,然而使肺组织暴露于高氧状态,会使细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)蓄积,加重脓毒症肺损伤。有关高氧加重脓毒症肺... 详细信息

急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)是脓毒症患者的常见并发症之一,机械通气是治疗急性肺损伤的主要治疗策略,然而使肺组织暴露于高氧状态,会使细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)蓄积,加重脓毒症肺损伤。有关高氧加重脓毒症肺损伤的具体机制及其防治策略尚未完全阐明。因此,本研究通过生物信息学分析和体外实验等方式,探索高氧加重脓毒症肺损伤的机制,并为防治脓毒症高氧肺损伤提供新靶点。第一部分脓毒症相关分子pebp1的筛选目的:筛出脓毒症相关分子pebp1。方法:1、通过GEO数据库下载脓毒症数据集GSE65682和高氧数据集GSE202458,获取本课题组前期脓毒症细胞模型高通量测序数据。2、对数据集GSE65682进行加权基因过表达网络(WGCNA)分析,获得与脓毒症最相关的模块特征基因。3、对数据集GSE65682、GSE202458和测序数据进行分析,分别筛选差异基因(DEGs)。4、使用Upset R包对上述差异基因和WGCNA中最相关的模块特征基因进行分析,获得交集基因。5、使用箱式图可视化pebp1在数据集GSE65682、GSE202458和测序数据中的表达趋势。6、运用q PCR技术验证pebp1在脓毒症细胞模型中的表达趋势。结果:1、与脓毒症最相关的模块是黄色模块,其相关性最高r=-0.57,P=1e-70。1912个黄色模块基因与脓毒症的相关性为cor=0.70,P=1e-200。2、数据集GSE65682得到的DEGs共376个,其中上调基因155个、下调基因221个;Ctl vs LPS＿2h的DEGs共1551个,其中上调基因655个、下调基因896个,Ctl vs LPS＿9h的DEGs共4105个,其中上调基因820个、下调基因3285。数据集GSE202458得到的DEGs共1475个,其中上调基因762个、下调基因712个。3、使用Upset R包获得的交集基因有两个,pebp1与BIRC3。其中,只有pebp1在脓毒症数据集和高氧数据集中的表达趋势一致。4、pebp1在数据集GSE65682、GSE202458和测序数据中均是下调的。5、qPCR结果显示在脓毒症细胞模型中pebp1 m RNA的表达是降低的。结论:筛选出脓毒症相关分子pebp1,LPS(1μg/ml)刺激NR8383细胞6h、12h、18h、24h后pebp1 m RNA表达量是降低的。第二部分基于生物信息学分析pebp1与脓毒症之间的关系目的:验证pebp1与脓毒症炎症反应和免疫细胞之间的相关性。方法:1、将数据集GSE65682按照pebp1表达量的高低重新分组。2、对重新分组后的数据集进行差异基因的筛选。3、将差异基因进行GO/KEGG分析。4、对重新分组后的数据集进行GSEA/GSVA分析。5、利用CIBERSORT处理基因表达矩阵数据,进行免疫细胞浸润评估分析及相关性分析。6、构建蛋白质互作(PPI)网络、随机森林(RF)模型和列线图模型。结果:1、GO/KEGG分析表明pebp1的表达与T细胞、免疫、炎症密切相关。2、GSEA分析表明主要富集的基因集也大多与炎症、氧化应激、免疫等相关。3、GSVA分析表明有显著差异的排名前六的上调基因集(Top 6)和下调基因集(Bottom 6),同样与炎症、免疫、糖酵解等通路有关。4、免疫相关分析显示共有16种免疫细胞与pebp1存在显著相关,pebp1的表达水平会影响免疫细胞的免疫活性。5、根据pebp1的表达量重新分组后筛选出的前五位关键基因(Hubgene)可以用来预测脓毒症的患病率。结论:pebp1与脓毒症的炎症反应密切相关,pebp1的表达水平会影响免疫细胞的免疫活性。第三部分过表达pebp1抑制高氧加重LPS诱导的肺泡巨噬细胞焦亡目的:1、探索高氧加重脓毒症肺损伤的机制。2、探索pebp1对高氧加重LPS诱导的肺泡巨噬细胞焦亡的影响。方法:1、采用LPS(1μg/ml)预处理30min后高氧培养盒(37℃,95%O,5%CO)培养大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383的方法,构建脓毒症高氧损伤细胞模型。2、使用Western Blot、q PCR和流式细胞术等方法,明确高氧加重LPS诱导的肺泡巨噬细胞焦亡。3、使用NLRP3抑制剂MCC950进一步验证高氧是通过诱导焦亡来加重LPS诱导的肺泡巨噬细胞损伤。4、运用慢病毒载体技术构建过表达pebp1的NR8383细胞株。5、使用Western Blot、q PCR和细胞活力检测等方法,明确过表达pebp1抑制高氧加重LPS诱导的肺泡巨噬细胞焦亡。结果:1、在脓毒症高氧损伤细胞模型中,pebp1 m RNA的表达量在6h、12h、18h时是降低的,而ROS含量均是升高的。最终选择18h为后续研究的时间点。2、与单纯LPS组或单纯O组相比,LPS+O组细胞内ROS水平更高,焦亡通路

关键词：脓毒症高氧焦亡肺损伤 pebp1

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pebp1在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及作用机制的实验研究

PEBP1在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及作用机制的实验研究

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作者：卜计源苏州大学

学位级别：硕士

第一部分pebp1与脑缺血再灌注损伤的相关性研究目的:研究大鼠脑缺血再灌注(MACO/R)后脑组织中以及体外氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(pebp1)及磷酸化磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(p-pebp1)在I/R后不同时间点的变化。方法:... 详细信息

第一部分pebp1与脑缺血再灌注损伤的相关性研究目的:研究大鼠脑缺血再灌注(MACO/R)后脑组织中以及体外氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(pebp1)及磷酸化磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(p-pebp1)在I/R后不同时间点的变化。方法:体内实验部分,随机任选36只大鼠分为假手术组和MACO/R后2h、6h、12h、24h、48h共6组,每组6只。所有的大鼠在脑缺血再灌注后相应的时间点被处死。每只大鼠取“半暗带”范围内脑组织,利用Western blot和双重免疫荧光技术检测pebp1及p-pebp1的表达。在体外实验中取大鼠神经元依据体内实验部分分为6组,检测神经元中pebp1及p-pebp1的表达水平。结果:1、体内实验结果表明,大鼠脑缺血再灌注后脑组织中pebp1表达呈先上升后下降的趋势,以MACO/R后6h组pebp1表达上升最显著(P1);脑组织中p-pebp1/pebp1的比值上升以MACO/R后6h组最显著;2、体外神经元实验结果pebp1表达先上升后下降,OGD/R后6h上升最明显(P1);p-pebp1/pebp1的比值呈先上升后恢复的趋势,以OGD/R后6h组p-pebp1/pebp1的比值上升最显著(P1)。结论:体内与体外实验结果均表明脑缺血再灌注损伤后pebp1表达水平上升,在6小时最为显著;pebp1磷酸化水平同样上升,并且在6小时达到峰值。第二部分pebp1对脑缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究目的:研究pebp1对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:1、筛选干扰效果最佳的Si RNA进行干扰pebp1的表达。2、在体内实验中,通过免疫共沉淀分析野生型、突变体、Si RNA和人重组pebp1对pebp1的影响;通过TTC染色评估脑组织损伤程度。3、通过评估行为学评分检验大鼠行为学方面变化;4、在体外实验中,通过Hoechst33258染色,Sulforhodamine B(SRB)技术和检测LDH水平来检验神经元损伤情况。结果:1、体内实验结果表明,在假手术组和MCAO/R组中野生型和突变体对内源性pebp1水平的影响没有统计学意义;在假手术组(p=0.381)和MCAO/R组(p=0.408)中野生型和突变体促进的外源性pebp1水平没有统计学差异;野生型在MCAO/R组中提高pebp1磷酸化水平;Si RNA在MCAO/R组中降低pebp1表达(p1)并降低pebp1磷酸化水平(p1);人重组pebp1在MCAO/R组中提高pebp1表达(p1)并提高pebp1磷酸化水平(p1);2、体内实验TTC染色结果,野生型和人重组pebp1在MCAO/R组中加重脑梗死程度,突变体和Si RNA在MCAO/R组中降低脑梗死程度(p1);3、行为学评分在MACO/R组较假手术组明显上升(p1),野生型行为学评分明显上升(p1),突变体行为学评分明显降低(p1),Si RNA行为学评分降低(p1),人重组pebp1行为学评分上升(p1);4、体外实验结果,OGD/R组较对照组神经元死亡率上升,细胞活性下降,野生型进一步提高死亡率,降低细胞活性,突变体和Si RNA较OGD/R组降低了神经元死亡率,提高了细胞活性。结论:1、pebp1在大鼠脑缺血再灌注诱发脑损伤中对神经元具有保护作用;2、pebp1的磷酸化加重脑缺血再灌注诱发的脑损伤。第三部分pebp1保护作用机制的实验研究目的:研究pebp1的神经保护作用机制。方法:1、在体外实验中,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检验pebp1对炎症水平的影响。2、在体内实验中,通过Western blot分析和fluoro-jade B(FJB)染色检验pebp1对神经元凋亡的影响。3、通过免疫共沉淀和Western blot分析Raf-1/MEK/ERK/NF-k B信号通路变化。4、通过PC-PLC试剂盒检验PC-PLC活性水平。5、通过Western blot分析LC3 II/LC3 I水平检验pebp1对神经元自噬的影响。结果:1、体外实验结果提示,pebp1抑制炎症反应水平,而pebp1磷酸化加重了炎症反应;2、体内实验结果,MACO/R组较假手术组神经元凋亡水平上升,野生型和人重组pebp1进一步促进神经元凋亡,而突变体和Si RNA则抑制神经元的凋亡;3、pebp1磷酸化抑制pebp1与Raf-1之间的相互作用;pebp1抑制Raf-1/MEK/ERK/NF-k B信号通路,而pebp1磷酸化则促进Raf-1/MEK/ERK/NF-k B信号通路;4、PC-PLC活性在OGD/R组较对照组上升(p1),野生型水平明显上升(p1),突变体水平降低(p1),Si RNA水平明显降低(p1),人重

关键词：脑缺血再灌注 pebp1 磷酸化 TTC染色 Hoechst33258染色细胞活性 LDH水平行为学评分炎症凋亡自噬

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抗磷脂酰乙醇胺结合蛋白1（pebp1）的鼠单克隆抗体的制备及应用

抗磷脂酰乙醇胺结合蛋白1（PEBP1）的鼠单克隆抗体的制备及应用

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作者：王双双南京医科大学

学位级别：硕士

磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(phosphatidylethanolamine binding protein 1)即pebp1,也称Raf激酶抑制蛋白(raf kinase inhibitor protein, RKIP),属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族,广泛存在于各种不同的生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路... 详细信息

磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(phosphatidylethanolamine binding protein 1)即pebp1,也称Raf激酶抑制蛋白(raf kinase inhibitor protein, RKIP),属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族,广泛存在于各种不同的生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。pebp1可以与Raf-1结合从而抑制MAPK信号转导通路,并参与了对G蛋白偶联受体信号通路和NF-κB信号通路的调控。pebp1在膜的生物合成,精子发生,神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用。2003年Fu et al发现pebp1可以抑制肿瘤细胞转移,使其成为抗肿瘤领域一个新的热点。目前一致被认为在前列腺癌,乳腺癌,结直肠癌,胃肠道间质瘤,黑色素瘤,卵巢上皮癌中具有抑制肿瘤转移的作用,并且是预后的标志。但是在胰腺癌中的表达以及作用还没有报道。本实验室在前期工作中已经获得大量高纯度的pebp1蛋白标准品。本课题主要在于抗pebp1的鼠单克隆抗体的制备及鉴定,双抗体夹心ELISA方法的建立及研究其在胰腺癌组织中的应用。本课题的主要内容及设计如下:1.抗pebp1抗体的制备及初步鉴定。2.双抗体夹心ELISA方法的建立3.抗pebp1抗体在胰腺癌组织中的应用。材料与方法1.抗pebp1抗体的制备及初步鉴定:以纯化的pebp1蛋白免疫BALB/c小鼠,之后取脾细胞使之与骨髓瘤细胞OUR-1融合。随后通过ELISA筛选阳性杂交瘤,经过三轮的亚克隆,选择4个OD值最高,并且有不同活性的克隆,使用Protein G HP纯化获得抗体。获得抗体之后,进行抗体的初步鉴定,选择高表达和低表达该蛋白的人胰腺癌细胞系,通过Western Blot鉴定该组抗体识别该蛋白的特异性。将GFP-pebp1转染到NIH3T3细胞中,将其固定,用所制备的抗体进行免疫荧光实验。2.双抗体夹心ELISA方法的建立通过ForteBio’s Octet系统选择1对与该蛋白结合力高的抗体做Sandwich ELISA,可以用于进一步快速早期检测和诊断胰腺癌。3.抗pebp1抗体在胰腺癌组织中的应用pebp1被认为是抑制肿瘤转移的基因,我们在此将抗体用于组织芯片,研究pebp1在胰腺癌病人和正常人中的表达是否不同。研究结果1.成功获得四株单克隆抗体,分别有不同的活性。7F12在Western Blot中可以识别正常的293细胞和部分胰腺癌细胞中的pebp1.2.由ForteBio’s Octet系统筛选出一对抗体:4F10和8E2,可以识别pebp1蛋白的不同的表位,因此这一对抗体可以用于Sandwich ELISA,它们可以检测出pebp1在ng/ml的水平,经过优化之后可以用于临床实践中测定病人血清,可以进一步快速早期检测和诊断胰腺癌。3.单克隆抗体4A11在组织芯片中可以检测到在正常的胰腺组织中的pebp1。而在胰腺癌组织中,pebp1的表达很低甚至没有。结论我们的结果显示pebp1在正常的胰腺中高表达,而在胰腺癌组织中的表达明显降低或者消失。抗pebp1的单克隆抗体4A11, 4F10, 7F12和8E2是潜在的临床诊断胰腺癌的试剂。

关键词： pebp1 单克隆抗体胰腺癌 Sandwich ELISA 组织芯片

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吸烟小鼠睾丸蛋白组差异研究：pebp1对吸烟后小鼠睾丸精子发生功能影响的可能机制

吸烟小鼠睾丸蛋白组差异研究：PEBP1对吸烟后小鼠睾丸精子发生功...

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作者：黄礼元上海交通大学

学位级别：硕士

吸烟被认为是影响精子可育性的重要危险因素,目前尚不清楚吸烟对精子可育性的影响机制。蛋白质组学是研究人员认识细胞功能最直接的工具,特定蛋白分子的鉴定能够帮助我们认识吸烟对精子不育影响的分子机制。本研究首先通过睾丸的HE染... 详细信息

吸烟被认为是影响精子可育性的重要危险因素,目前尚不清楚吸烟对精子可育性的影响机制。蛋白质组学是研究人员认识细胞功能最直接的工具,特定蛋白分子的鉴定能够帮助我们认识吸烟对精子不育影响的分子机制。本研究首先通过睾丸的HE染色和精子数量、精子运动等参数的统计研究,发现吸烟后小鼠睾丸中精子数目明显减少,生精小管之间的支持细胞数量较正常小鼠也明显减少;附睾中分离的精子数量在吸烟后小鼠中明显减少,精子的运动能力受吸烟的影响较大。这说明了吸烟可能影响精子发生的功能,从而影响精子质量。为了进一步探究吸烟对睾丸精子发生等功能影响的分子机制,我们通过比较蛋白质组学技术,发现了吸烟小鼠睾丸和正常小鼠睾丸之间差异表达的蛋白。我们用双向凝胶电泳(2 - DE)和质谱(MALDI - TOF - MS)技术鉴定吸烟小鼠睾丸和正常小鼠睾丸中差异表达的蛋白,发现了35种在吸烟小鼠睾丸中差异表达的蛋白,其中7种蛋白表达上调,其他的28种蛋白表达下调。为了分析鉴定这35种蛋白,我们选择了DAVID服务器对他们聚类分析。这35种蛋白主要参与代谢,信号转导,细胞骨架组织和细胞运动维持等生物学过程。其中,在吸烟小鼠睾丸中表达下调的pebp1可能与精子发生相关。我们分别用Western-Blot和qRT– PCR对pebp1做了进一步分析。pebp1蛋白和mRNA表达量在吸烟小鼠睾丸中均有所下降,这与前面的双向电泳结果一致。pebp1是丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK )信号转导通路的生理性抑制蛋白,吸烟小鼠睾丸中pebp1表达的下降,导致MAPK信号途径的活跃。pebp1可能成为临床上评估吸烟对生殖不良影响的分子标记,并提供吸烟对精子不育性的影响机制。

关键词：吸烟精子发生蛋白质谱 pebp1 MAPK

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pebp1在大鼠脊髓损伤后的表达和意义

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四川解剖学杂志 2015年第4期23卷 1-6页

作者：钟占琼马鹏云曾茜张婷杨拯王廷华张晓成都医学院基础医学院机能实验中心成都610500 四川大学基础医学与法医学院神经疾病研究室成都610041 昆明医科大学神经科学研究所昆明650504

目的探究大鼠脊髓损伤后磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(pebp1)的表达和意义。方法本研究采用105只Sprague-Dawley雌性大鼠,随机分为假手术组和实验组。采用Allen’s法制备大鼠脊髓损伤模型,应用免疫组织化学方法检测pebp1在脊髓中的定位变达,... 详细信息

目的探究大鼠脊髓损伤后磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(pebp1)的表达和意义。方法本研究采用105只Sprague-Dawley雌性大鼠,随机分为假手术组和实验组。采用Allen’s法制备大鼠脊髓损伤模型,应用免疫组织化学方法检测pebp1在脊髓中的定位变达,采用实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测pebp1的mRNA和蛋白在脊髓中的表达变化。结果免疫组织化学结果显示pebp1在正常脊髓后角的神经胶质细胞的胞浆和胞核中表达,在脊髓损伤后与sham组相比pebp1免疫阳性细胞数明显减少。此外,实时定量PCR显示pebp1的mRNA在大鼠脊髓损伤后12h,1d,3d,7d,14d和28d的表达量明显降低,与sham组相比差异具有统计学意义(P1);免疫印迹实验显示,与sham组相比,pebp1蛋白在大鼠脊髓损伤后的7d,14d和28d表达量降低,差异具有统计学意义(Ppebp1的mRNA和蛋白表达水平均降低,在脊髓后角的表达明显减少。提示脊髓损伤后pebp1可能参与调控神经胶质细胞的存活和凋亡,进一步影响脊髓损伤后的感觉功能。

关键词：脊髓损伤 pebp1

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pebp1在先天性肾积水患儿尿液中表达的研究

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国际儿科学杂志 2019年第3期46卷 219-223页

作者：马福江赵琦杨屹中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004

目的通过磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(recombinant human phosphatidylethanolamine binding protein 1,pebp1)在先天性肾积水患儿尿液中表达水平的研究,探讨pebp1作为先天性肾积水的生物学标记物的可行性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)... 详细信息

目的通过磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(recombinant human phosphatidylethanolamine binding protein 1,pebp1)在先天性肾积水患儿尿液中表达水平的研究,探讨pebp1作为先天性肾积水的生物学标记物的可行性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定30例重度肾积水患儿、30例轻度肾积水患儿及正常儿童膀胱内尿液样本中pebp1的表达情况,并将pebp1的表达水平与肾核素动态显像测定的患肾的分肾功能做相关性分析。结果与正常对照组相比,pebp1在先天性肾积水患儿尿液中的表达明显下调,积水程度越重,表达越低(Ppebp1的表达上调,术后1个月pebp1的表达仍低于正常对照组(Ppebp1的表达与分肾功能呈正相关性(r=0.818,Ppebp1≤0.521ng/mgcr.时,患肾的分肾功能下降至30%及以下,接受者操作特征(ROC)曲线下面积0.89,诊断灵敏度80%,特异度90%。结论pebp1蛋白在先天性肾积水患儿的尿液中的表达明显下调,术后1个月表达上调。pebp1值越低,患肾的分肾功能越低,肾脏功能损害越重,有较高的诊断灵敏度,有可能成为辅助诊断患儿先天性肾积水的生物学标记物,并可评估病情的严重程度、治疗效果。

关键词： pebp1 先天性肾积水尿液标记物

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pebp1在肝癌切除肝缺血再灌注损伤中的作用

PEBP1在肝癌切除肝缺血再灌注损伤中的作用

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第十届全国免疫学学术大会

作者：黄传钟林科灿王斌刘景丰黄爱民叶韵斌福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建省肿瘤转化医学重点实验室福建医科大学附属第一医院肝病中心福建医科大学病理学系

目的 :研究肝癌手术过程中肝门阻断缺血再灌注损伤对肝癌患者复发转移的影响。方法 :应用等点聚焦双向电泳研究20例原发性肝细胞癌手术患者的癌与非癌组织,以及肝缺血再灌注前后癌组织的蛋白质表达变化;同时对肝门阻断时间不患者的复发... 详细信息

目的 :研究肝癌手术过程中肝门阻断缺血再灌注损伤对肝癌患者复发转移的影响。方法 :应用等点聚焦双向电泳研究20例原发性肝细胞癌手术患者的癌与非癌组织,以及肝缺血再灌注前后癌组织的蛋白质表达变化;同时对肝门阻断时间不患者的复发转移情况进行随访分析。结果 :通过双向电泳的差异蛋白进行分析,发现磷脂酰乙醇胺结合蛋白pebp1在肝癌组织中低表达,同时在缺血再灌注损伤后pebp1表达也显著降低;同时对肝癌患者术后近期转移复发时间进行研究,发现肝门阻断时间小于15min的患者6个月内复发转移概率为32.5%,阻断时间大于15min的患者复发转移概率为57.6%。结论 :pebp1作为肿瘤转移抑制因子,在肝缺血再灌注损伤中表达降低,有可能因此增加术后患者复发转移的风险。

关键词：肝癌肝缺血再灌注 pebp1 双向电泳

来源： cnki会议评论

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circMTO1表达与miR-3200/pebp1轴的关系及其预测内镜黏膜下剥离术后复发的价值

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中国内镜杂志 2021年第5期27卷 7-13页

作者：李本杰周倩彭志红贵黔国际医院消化内科贵州贵阳550018 陆军军医大学第一附属医院(西南医院)消化内科重庆400038

目的研究circMTO1表达与miR-3200/磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(pebp1)轴的关系及其预测内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的价值。方法选择2015年1月-2018年7月在陆军军医大学第一附属医院(西南医院)接受ESD治疗的早期胃癌患者作为研究对象(早期... 详细信息

目的研究circMTO1表达与miR-3200/磷脂酰乙醇胺结合蛋白1(pebp1)轴的关系及其预测内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的价值。方法选择2015年1月-2018年7月在陆军军医大学第一附属医院(西南医院)接受ESD治疗的早期胃癌患者作为研究对象(早期胃癌组),另取同期经胃黏膜活检明确为正常胃黏膜的受试者作为对照组。检测两组circMTO1、miR-3200和pebp1的表达水平,随访早期胃癌患者的无复发生存情况,并采用Kaplan-Meier曲线分析无复发生存率的差异。结果早期胃癌组circMTO1和pebp1表达水平明显低于对照组,miR-3200表达水平明显高于对照组(P1与miR-3200呈负相关、与pebp1呈正相关,miR-3200与pebp1呈负相关;早期胃癌组中不同肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移情况和脉管癌栓情况的circMTO1、miR-3200和pebp1表达水平比较,差异均有统计学意义(P1高表达的早期胃癌患者无复发生存率高于circMTO1低表达患者,miR-3200高表达的早期胃癌患者无复发生存率低于miR-3200低表达患者,pebp1高表达的早期胃癌患者无复发生存率高于pebp1低表达患者。结论早期胃癌中circMTO1低表达与病情恶化和ESD术后无复发生存时间缩短有关,靶向miR-3200/pebp1轴可能是circMTO1参与早期胃癌发生发展的分子机制。

关键词：早期胃癌内镜黏膜下剥离术 circMTO1 miR-3200 pebp1 预后

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Development and optimization of an antibody array method for potential cancer biomarker detection

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The Journal of Biomedical Research 2011年第1期25卷 63-70页

作者： Shuangshuang Wang Ping Zhao Brian Cao Key Laboratory of Antibody Technology of Ministry of Health Nanjing Medical University Nanjing Jiangsu Province 210029 China Antibody Technology Laboratory Van Andel Research Institute Grand Rapids MI 49503 USA

Biomarkers play an important role in the detection at an early stage of pancreatic cancer. The aim of the present study was to optimize the conditions of antibody arrays for detecting Hippocalcin-like 1 （HPCAL1）, phosphatidylethanolamine binding protein 1 （pebp1）, lectin galactoside-binding soluble 7 （LGALS7）, and serpin peptidase inhibitor clade E member 2 （SERPINE2） as biomarkers for pancreatic cancer detection in a single assay and to investigate antibodies’ specificity and cross-reactivity. Capture antibodies against HPCAL1, pebp1, LGALS7 and SERPINE2 were printed on nitrocellulose coated glass slides. HPCAL1, pebp1, LGALS7 and SERPINE2 proteins with different concentrations were incubated with the capture antibodies at different temperatures for different time periods. Biotinylated detection antibodies recognizing a different epitope on the captured proteins and a secondary detection molecule （Streptavidin-PE） were used to detect fluorescent signals. The arrays showed the strongest signals when the concentration of the capture antibodies was at 500 μg/mL in PBST0.05 （PBS with 0.05% Tween-20）, and the slides were incubated overnight at 4°C. The lowest protein concentration for detection was 2 ng/mL. Each antibody demonstrated high specificity to the corresponding antigen in detecting a mixture of 4 proteins without significant cross-reactivity. The fluorescence and biomarker concentration displayed a linear correlation. The antibody microarray system could be a useful tool for potential biomarker detection for pancreatic cancer.

关键词： cancer biomarker HPCAL1 pebp1 LGALS7 SERPINE2 antibody microarray

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SerpinA3和pebpl在胃癌组织中的表达及意义

SerpinA3和Pebpl在胃癌组织中的表达及意义

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作者：蒋倩南华大学

学位级别：硕士

目的：选取近期蛋白质组学筛查出的胃癌相关差异表达蛋白质SerpinA3和pebp1，检测它们在不同胃组织中表达情况，分析其临床意义，为胃癌的早期诊断提供有价值的实验依据。方法：收集正常胃粘膜、胃癌及癌旁组织新鲜标本，提取组织总... 详细信息

目的：选取近期蛋白质组学筛查出的胃癌相关差异表达蛋白质SerpinA3和pebp1，检测它们在不同胃组织中表达情况，分析其临床意义，为胃癌的早期诊断提供有价值的实验依据。方法：收集正常胃粘膜、胃癌及癌旁组织新鲜标本，提取组织总蛋白质及RNA，运用Western-blot和RT-PCR检测SerpinA3和pebp1蛋白在上述组织中的表达情况;采用免疫组织化学染色观察SerpinA3和pebp1蛋白在组织芯片（包括正常胃粘膜、非典型增生及胃癌组织）中的表达情况，分析两者表达与胃癌发生、发展的关系及临床意义。结果： 1、Western-blot结果显示，SerpinA3蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达高于正常胃粘膜组织（P1）;pebp1蛋白在胃癌组织中的表达较正常胃粘膜和癌旁组织高（P1）。 2、RT-PCR显示，SerpinA3和pebp1基因在胃癌组织中的表达高于癌旁组织和正常胃粘膜组织（P1）。 3、免疫组织化学染色结果显示，SerpinA3蛋白在正常胃粘膜、非典型增生、胃癌及伴淋巴结转移癌组织中的阳性表达率分别为4.16%（1/24）、18.75%（3/16）、62.96%（34/54）和73.52%（25/34），其在胃高、中、低分化腺癌中的阳性表达率分别为50.00%（3/6）64.28%（9/14）和79.41%（27/34）;pebp1蛋白在正常胃粘膜、非典型增生、胃癌及伴淋巴结转移癌组织中的阳性表达率分别为5.00%（1/20）、22.22%（4/20）、70.37%%（36/52）和66.66%（22/33），其在胃高、中、低分化腺癌中的阳性表达率分别为60.00%（3/5）、66.66%（6/9）和81.57%（31/38）;SerpinA3和pebp1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率比正常胃粘膜和非典型增生组织高（P1）;两者在伴有淋巴结转移的癌组织中的阳性表达率比非转移癌组织高（P1、SerpinA3和pebp1蛋白在胃癌组织中的表达较正常胃粘膜和非典型增生组织高，两者在伴淋巴结转移胃癌组织中的表达较非转移者高。 2、SerpinA3和pebp1蛋白的表达上调可能与胃癌的发生和侵袭转移有关。

关键词：胃癌 SerpinA3 pebp1 临床意义

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