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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 419-422页

作者：杨春梅黄丽王海伟于会彬李一经蔡雪辉于力唐丽杰翁长江东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(pcbp2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中pcbp2蛋白水平显著... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(pcbp2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中pcbp2蛋白水平显著降低。为鉴定FMDV 3Cpro是否具有切割pcbp2蛋白的功能,本研究采用免疫共沉淀试验和激光共聚焦检测显示,FMDV 3Cpro和pcbp2在细胞内存在相互作用,并且共定位于细胞质中。进一步研究显示,FMDV 3Cpro能够切割pcbp2,而且具有剂量依赖性。此外,FMDV 3Cpro活性位点突变(H46Y)试验结果表明,FMDV 3Cpro的蛋白酶活性是切割蛋白pcbp2所必需的。FMDV 3Cpro切割pcbp2靶位点序列的鉴定及FMDV 3Cpro切割pcbp2的生物学意义有待深入研究。

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶 pcbp2 切割

pcbp2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

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PCBP2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

作者：何敏诗桂林医学院

学位级别：硕士

目的:本研究在非小细胞肺癌进行pcbp2的表达检测及pcbp2蛋白表达与临床病理学特征和预后的关系,探讨pcbp2在非小细胞肺癌中作为预后评估和有效治疗靶点的潜能。方法:(1)收集经病理科确诊的非小细胞肺癌标本101例,包括肺鳞状细胞癌50例,... 详细信息

目的:本研究在非小细胞肺癌进行pcbp2的表达检测及pcbp2蛋白表达与临床病理学特征和预后的关系,探讨pcbp2在非小细胞肺癌中作为预后评估和有效治疗靶点的潜能。方法:(1)收集经病理科确诊的非小细胞肺癌标本101例,包括肺鳞状细胞癌50例,肺腺癌51例,应用免疫组织化学方法(IHC),对101例非小细胞肺癌标本中癌组织及癌旁组织进行检测pcbp2蛋白的表达情况,统计分析pcbp2蛋白的表达与临床病理学特征的相关性;Graphpad Prism软件分析pcbp2蛋白的表达与非小细胞肺癌患者术后五年生存率的关系。(2)留取4例经冰冻室确诊为非小细胞肺癌的新鲜手术切除标本,包括肺癌组织及癌旁组织,用Western Blot法检测pcbp2在非小细胞肺癌及癌旁肺组织中的蛋白表达。结果:(1)IHC及Western Blot结果显示,与癌旁肺组织相比,pcbp2蛋白在非小细胞肺癌组织中的高表达,且与组织学分型无关(P=0.613);(2)非小细胞肺癌中pcbp2蛋白的表达与患者性别(P=0.318)、年龄(P=0.413)、肿瘤分化程度(P=0.514)、TNM病理分期(P=0.124)之间无显著相关性(P>0.05);pcbp2蛋白的表达与患者肿瘤大小(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.031)之间存在相关性(Ppcbp2蛋白患者的五年生存率低于低表达pcbp2蛋白患者,Ppcbp2蛋白在非小细胞肺癌组织中高表达,且与组织学分型无关。(2)pcbp2蛋白的表达与肿瘤大小、淋巴结转移相关。(3)高表达pcbp2蛋白与患者的预后较差相关,pcbp2可作为评估非小细胞肺癌患者的预后指标之一。

关键词： pcbp2 非小细胞肺癌临床病理特征预后指标

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pcbp2调控结直肠癌细胞的分子机制研究

PCBP2调控结直肠癌细胞的分子机制研究

作者：朱忠诚安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在通过IHC分析pcbp2在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析pcbp2在结直肠癌组织中表达是否高于癌旁正常组织,明确pcbp2在结直肠癌细胞、癌组织中的表达及与临床参数之间的关系;进一步拟利用HCT-116和HCT-15两株... 详细信息

目的:本研究旨在通过IHC分析pcbp2在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析pcbp2在结直肠癌组织中表达是否高于癌旁正常组织,明确pcbp2在结直肠癌细胞、癌组织中的表达及与临床参数之间的关系;进一步拟利用HCT-116和HCT-15两株结直肠癌细胞通过细胞生物学和分子生物学实验来确认pcbp2是否参与结直肠癌细胞的生长、增殖、转移和凋亡,并分析其分子机制,为结直肠癌的诊断、预后和开发新的靶向药物提供理论依据,为临床结直肠癌治疗方案制定提供理论指导。方法:1、选取50例来自安徽医科大学第一附属医院的结直肠癌病人癌组织和癌旁的病理标本。2、通过免疫组化检测pcbp2在结直肠癌组织和癌旁的表达。3、通过RT-PCR检测转染sipcbp2后HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞中的pcbp2 mRNA的表达情况。4、通过WB检测HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞在转染sipcbp2后pcbp2的蛋白表达。5、利用软琼脂克隆形成实验检测HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞在sipcbp2后的增殖情况,计数细胞集落的形成数。6、通过CCK8试剂盒检测HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞在转染sipcbp2后的细胞活力。7、通过细胞小室Transwell实验检测HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞在转染sipcbp2后的细胞迁移和侵袭能力。8、利用Annexin V/PI试剂盒进行细胞凋亡检测标记HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞在转染sipcbp2后的凋亡细胞然后用荧光显微镜拍照记录。结果:1、免疫组化检测结果显示:在结直肠癌病人的癌组织中pcbp2的表达水平比癌旁的正常组织表达的pcbp2明显增高(P=0.001),且在结直肠癌病人中pcbp2的阳性率是72%,而在癌旁的正常组织中pcbp2的阳性率是40%,同时pcbp2与结直肠癌病人的淋巴结转移(P=0.031)和结直肠癌病人的临床分期(P=0.045)、术后复发(P=0.039)和总生存率(P=0.037)有关。2、蛋白印记结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中转染sipcbp2后,pcbp2的蛋白表达水平明显比NC对照组低,有明显的蛋白表达差异。3、RT-PCR检测结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中转染sipcbp2后pcbp2的m RNA表达水平明显降低,同时我们发现细胞周期相关蛋白Cyclin D1的m RNA表达水平也明显降低。4、CCK8检测结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中sipcbp2后,两结直肠癌细胞的细胞活力被明显的抑制,实验组转染sipcbp2后的细胞活力明显比NC组的细胞活力弱,同时OD值也表明实验组的细胞生长明显比NC组的细胞生长快。5、软琼脂克隆形成实验结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中sipcbp2后,实验组转染sipcbp2后的结直肠癌细胞集落克隆形成明显比NC组的细胞集落克隆形成少。6、细胞迁移实验结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中转染sipcbp2后,实验组转染sipcbp2后的结直肠癌细胞迁移数明显比NC组的细胞迁移数少。7、细胞侵袭实验结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中转染sipcbp2后,实验组转染sipcbp2后的结直肠癌细胞侵袭明显比NC组的细胞侵袭数少。8、细胞凋亡结果显示:在HCT-116和HCT-15两结直肠癌细胞株中转染sipcbp2后,实验组转染sipcbp2后的结直肠癌细胞凋亡明显比NC组的细胞数多。结论:1、pcbp2在结直肠癌病人组织中的表达水平明显比癌旁正常组织高,提示pcbp2与结直肠癌的发生,发展,淋巴结转移和无复发生存率和预后关系密切。2、转染sipcbp2后结直肠癌细胞活力、结直肠癌细胞生长、结直肠癌细胞克隆形成、结直肠癌细胞迁移和侵袭明显被抑制,HCT-116和HCT-15结直肠癌细胞凋亡增多,表明pcbp2促进结直肠癌细胞的发生发展和转移及细胞增殖。

关键词：结直肠癌 pcbp2 活力凋亡迁移侵袭

pcbp2在病毒诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中的作用

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PCBP2在病毒诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中的作用

作者：刘春艳湖南大学

学位级别：硕士

pcbp2是核不均一核糖核蛋白（hnRNP)家族成员之一，能特异性结合富含胞嘧啶RNA片段，在细胞生理过程中发挥着重要的作用，例如参与转录后的调控、与microRNA、蛋白相互作用。pcbp2也是宿主细胞分泌的细胞因子之一，近些年研究pcbp2与病... 详细信息

pcbp2是核不均一核糖核蛋白（hnRNP)家族成员之一，能特异性结合富含胞嘧啶RNA片段，在细胞生理过程中发挥着重要的作用，例如参与转录后的调控、与microRNA、蛋白相互作用。pcbp2也是宿主细胞分泌的细胞因子之一，近些年研究pcbp2与病毒之间的相互关系的报道越来越多，发现pcbp2能参与多种病毒RNA的复制过程，还能调控细胞的免疫应答反应。pcbp2影响丙型肝炎病毒（HCV)、新城疫病毒（NDV)病毒RNA的复制已有报道，但是pcbp2在病毒诱导肝细胞产生I型干扰素中的具体作用却未见报道。本文主要探讨了pcbp2在病毒诱导肝细胞产生I型干扰素中的作用，首先我们设计了沉默pcbp2基因的shRNA，将其插入到新型载体pSilencer后转染到肝细胞HLCZ01中，成功建立了对pcbp2基因沉默效果在60%-90%左右的稳定细胞系。以此为基础，我们使用了体外合成的的双链RNA试剂poly(I:C)刺激细胞，结果发现沉默pcbp2，细胞内IFNβ的表达量上调;使用单股负链RNA病毒NDV感染细胞，发现沉默pcbp2，细胞内NDV水平下调，但是IFNβ以及其下游四种干扰素刺激基因ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表达量明显上调;最后采用单股正链RNA病毒HCV感染细胞，发现沉默pcbp2可抑制HCV的复制水平，同时促进IFNβ以及ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表达水平。由此可见，沉默pcbp2，细胞内病毒量下调，IFNβ表达水平上调，pcbp2负调控病毒诱导肝细胞产生I型干扰素。全球约有1.7亿人因感染HCV而诱发各种肝脏类的疾病，但是目前临床上缺乏有效治疗HCV的药物，因此开发新型有效的抗HCV药物迫在眉睫。目前以pcbp2为靶点的抗病毒性疾病的治疗研究刚刚起步，但已显现出了广阔的前景。本研究表明pcbp2与干扰素抗病毒作用负相关，因此我们可以将pcbp2作为研究的靶点分子，尝试研发新型的抗HCV药物，这能为病毒性疾病的治疗提供一个新视野。

关键词： pcbp2 短发卡RNA 干扰素β 丙型肝炎病毒新城疫病毒 poly(I:C)

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pcbp2在乳腺癌发生和发展中的作用

PCBP2在乳腺癌发生和发展中的作用

作者：王浩安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:乳腺癌是指发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,且全球乳腺癌发病率近几十年一直呈上升趋势,在中国女性中乳腺癌是发病率最高的恶性肿瘤。但是近些年发病率上升的同时,乳腺癌患者的生存率也得到了延长。转录后基因调控(Post-transcrip... 详细信息

背景:乳腺癌是指发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,且全球乳腺癌发病率近几十年一直呈上升趋势,在中国女性中乳腺癌是发病率最高的恶性肿瘤。但是近些年发病率上升的同时,乳腺癌患者的生存率也得到了延长。转录后基因调控(Post-transcriptional gene regulation,PTGR)对于维持细胞代谢,协调各种RNA的成熟,转运,稳定性和降解至关重要。这些事件中的每一个过程都受不同的核糖核蛋白(Ribonucleoprotein,RNP)复合物的调控,这些复合物在其核心处具有RNA结合蛋白(RNA Binding Proteins,RBPs)。目前为止,综合文献报道,人类RNA结合蛋白的种类约为1900个。Poly(r C)结合蛋白(Poly(r C)binding protein 2,pcbp2)是一种RBP,它与多胞嘧啶具有序列特异性的结合作用,且在m RNA稳定,翻译增强中起着关键作用,从而促进人类癌症的发展和进展。pcbp2蛋白有多种功能,且与pcbp1和hn RNPK形成稳定的复合体发挥作用,是主要的细胞poly(r C)结合蛋白之一。其包含可能参与RNA结合的三个K同源(KH)域,并在与α-珠蛋白m RNA稳定性相关的序列特异性α-珠蛋白m RNP复合物的形成中发挥作用。但是,目前pcbp2在乳腺癌的发生和发展进程中所起的作用仍然不清楚。目的:探讨pcbp2在人乳腺癌发生和发展过程中作用。方法:1)应用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌组织及癌旁组织中pcbp2的蛋白表达水平;应用免疫印迹试验(Western Blot)检测pcbp2在乳腺正常上皮细胞系以及乳腺癌细胞系中的表达水平;2)通过收集127例乳腺癌患者的临床数据,探讨pcbp2的蛋白表达与临床病理特征的相关性;通过随访,制作Kaplan-Meier生存曲线分析pcbp2的表达与乳腺癌患者的疾病进展和预后相关性;3)选用两株乳腺癌细胞系建立稳转,进行细胞实验,分别是pcbp2高表达的MDA-MB-231细胞系建立敲低稳转,pcbp2低表达的SUM159细胞系建立过表达稳转;稳转细胞系建成后,通过细胞活力实验、克隆形成实验、迁移与侵袭实验观察细胞活力、增殖和迁移侵袭能力的变化。结果:1)IHC结果显示与癌旁组织相比,乳腺癌组织中pcbp2的蛋白表达水平上调(Ppcbp2在乳腺癌细胞系中的蛋白表达水平上调;2)pcbp2蛋白的表达与肿瘤大小、肿瘤的淋巴结转移和晚期临床分期呈显著正相关性;pcbp2的表达可能与乳腺癌患者的疾病进展和不良预后显著相关(Ppcbp2的乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞活力、增殖、迁移和侵袭能力下降(Ppcbp2的乳腺癌细胞SUM159的细胞活力、增殖、迁移和侵袭能力上升(Ppcbp2可能参与了乳腺癌的发生和发展过程,可以作为乳腺癌诊断和治疗的潜在生物学标记物。

关键词： pcbp2 RNA结合蛋白乳腺癌肿瘤发生肿瘤发展

pcbp2通过结合PARP1 mRNA稳定PARP1并参与Olaparib耐药过程

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PCBP2通过结合PARP1 mRNA稳定PARP1并参与Olaparib耐药过程

作者：许泽美汕头大学

学位级别：硕士

【背景】2020年全球最新癌症负担数据显示乳腺癌已经成为全球新诊断人数最多的癌症。三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌15%,因其缺乏内分泌及抗HER2治疗的靶点,目前尚无针对性的标准治疗方案。因此,找到与三阴性乳腺癌发生发展相关的基因并研... 详细信息

【背景】2020年全球最新癌症负担数据显示乳腺癌已经成为全球新诊断人数最多的癌症。三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌15%,因其缺乏内分泌及抗HER2治疗的靶点,目前尚无针对性的标准治疗方案。因此,找到与三阴性乳腺癌发生发展相关的基因并研制出治疗靶点药物将有可能为乳腺癌患者提供新的治疗方案。PARP1是DNA修复过程中的关键酶,BRCA1基因缺陷的TNBC细胞对PARP1抑制剂敏感。目前PARP1抑制剂被广泛用于BRCA基因缺陷的卵巢癌患者的治疗,但是在对乳腺癌的治疗中仍处于三期临床试验阶段。pcbp2,作为RNA结合蛋白家族的成员,能够对目的转录本进行特异性结合并发挥转录后调控的功能。我们前期通过对331例乳腺癌患者进行免疫组化分析发现pcbp2在乳腺癌组织细胞的胞核中呈现出高表达状态,并与患者的不良预后相关,而PARP1与pcbp2的核表达水平呈正相关关系。我们推测这可能与pcbp2发挥转录后调控功能相关。【目的】1.探究pcbp2对PARP1的调控关系网络;2.研究pcbp2是否影响PARP1抑制剂耐药的过程【方法】(1)在47例乳腺癌患者的连续切片组织中检测pcbp2与PARP1的表达情况,根据染色评分和运用卡方检验分析方法判断两者之间是否相关;(2)进行pcbp2的蛋白质免疫沉淀反应,将沉淀下来的互作蛋白银染送质谱鉴定;(3)构建pcbp2敲除细胞系pcbp2SUM149PT;(4)在敲除pcbp2前后的细胞系中检测PARP1的RNA与蛋白表达情况;(5)运用RNA免疫荧光和RNA核质分离技术鉴定敲除pcbp2前后PARP1m RNA在细胞中的定位与表达情况;(6)RIP实验用来鉴定pcbp2能否结合PARP1的m RNA;(7)利用转录抑制剂作用于敲除pcbp2前后的细胞中不同时间,RT-qPCR检测PARP1 RNA的降解速率;(8)通过共转染含有PARP1 3’UTR全长的双荧光素酶报告基因质粒和含pcbp2可能结合位点序列的质粒,找出PARP1与pcbp2相互作用的序列;(9)在敲除pcbp2前后的细胞系中加入Olaparib测定细胞对药物的敏感性;(10)浓度递增诱导方法成功诱导出两株对Olaparib耐药的细胞:HCC1937 OR(RI=4.69±0.67)、SUM149PT OR(RI=10.45±1.02);(11)FISH与Western Blot检测PARP1、pcbp2在耐药株与亲本株表达情况。【结果】(1)在乳腺癌患者组织中,PARP1与pcbp2表达呈正相关(χ=7.875,P=0.005)且高表达PARP1的患者无病生存期(P=0.047)与总生存期(P=0.01)比低表达的患者短;(2)我们将沉淀下来的蛋白质进行质谱分析找出518个与pcbp2相互作用的蛋白,进行GO分析后发现这些蛋白主要参与RNA代谢跟翻译;(3)Western Blot、q RT-PCR、RNA FISH、RIP表明pcbp2能通过结合PARP1的m RNA影响其蛋白、RNA表达,但不影响RNA定位;(4)将DNA的转录过程抑制后发现敲除pcbp2后PARP1的降解速率加快;(5)报告基因结果显示pcbp2能够与PARP1 3’UTR上富含CU序列相结合发挥稳定RNA降解的作用;(6)CCK8检测敲除pcbp2后乳腺癌细胞失去了对Olaparib的敏感性;(7)FISH与Western Blot显示细胞对Olaparib耐药后,PARP1蛋白表达上升,定位仍在核内;而胞内的DNA损伤减少,pcbp2降低,说明耐药细胞对DNA损伤修复功能恢复,pcbp2参与了这个过程。【结论】(1)pcbp2通过结合PARP1 3’UTR上富含CU序列发挥稳定RNA降解的作用;(2)敲除pcbp2后细胞对Olaparib耐受增高;(3)乳腺癌细胞对Olaparib耐药后DNA损伤修复功能恢复

关键词：三阴性乳腺癌 pcbp2 PARP1 耐药

pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用及其机制研究

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PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用及其机制研究

作者：张韫佼上海交通大学

学位级别：硕士

目的:探讨pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用及其参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制。方法:对小鼠行主动脉缩窄手术,构建压力负荷诱导小鼠心肌肥厚模型,观察pcbp2与心肌标志物Nppa、β-MHC在小鼠心肌肥厚模型中的表达情... 详细信息

目的:探讨pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用及其参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制。方法:对小鼠行主动脉缩窄手术,构建压力负荷诱导小鼠心肌肥厚模型,观察pcbp2与心肌标志物Nppa、β-MHC在小鼠心肌肥厚模型中的表达情况,评估pcbp2在压力负荷诱导小鼠心肌肥厚发生中的作用。在体外用血管紧张素II诱导使心肌细胞发生肥大,察看敲低和过表达pcbp2对血管紧张素II诱导心肌细胞肥大的影响,探讨pcbp2参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制。结果:对小鼠行主动脉缩窄手术,成功构建出压力负荷诱导小鼠心肌肥厚模型。心肌肥厚模型小鼠的pcbp2 m RNA水平及蛋白水平却明显低于对照组小鼠(Ppcbp2可通过增加GPR56的表达来促进血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大;而过表达pcbp2则可通过减低GPR56的表达来抑制血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大。结论:pcbp2在压力负荷诱导小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用。pcbp2参与压力负荷小鼠心肌肥厚的发生与对GPR56蛋白调控相关。第一部分pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用目的:探讨pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用。方法:选用80周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重238 g;随机分2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术(TAC组)和假手术(Sham组)。术后4周采用超声心动图评价小鼠的心脏功能,心脏重量和体重之比(HW/BW)来定量评价心肌肥厚的程度。用Real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC(Myh7)的m RNA水平,同时检测pcbp2 m RNA水平。用Western blot方法检测Nppa、β-MHC及pcbp2的蛋白水平。比较分析两组之间的差异。结果:与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度显著增加(TAC组vs Sham组=8.23±1.88 mg/g vs 4.89±0.68 mg/g),左心室射血分数(TAC组vs Sham组=59.24±5.23%vs 74.15±5.68%)及短轴收缩率(TAC组vs Sham组=33.61±0.92%vs 43.87±1.37%)显著降低(Ppcbp2m RNA水平和蛋白水平却显著低于Sham组(Ppcbp2在压力负荷诱导小鼠心肌肥厚的发生过程中起着负性调节作用。第二部分研究pcbp2参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制目的:探讨pcbp2参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制。方法:原代乳鼠心肌细胞分离、培养;在体外用血管紧张素II诱导使得心肌细胞发生肥大,计算心肌细胞表面积。察看敲低和过表达pcbp2对血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大的影响;观察心肌细胞肥大过程中pcbp2与GPR56变化情况,及其与心肌细胞肥大的关系。结果:血管紧张素II可以诱导心肌细胞肥大,使心肌细胞面积增加。敲低心肌细胞pcbp2后,血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大的程度更大,使心肌细胞表面积明显增大;而过表达心肌细胞pcbp2后,可有效抑制血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积明显缩小。敲低pcbp2可以通过增加GPR56的表达促进血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大;而过表达pcbp2可通过减低GPR56的表达抑制血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大。结论:pcbp2参与压力负荷小鼠心肌肥厚的作用机制是pcbp2通过调控GPR56的表达来调节心肌细胞肥大。pcbp2是抑制病理条件下心肌细胞肥大的负性调节因子。

关键词： pcbp2 心肌肥厚细胞肥大血管紧张素Ⅱ G蛋白偶联受体56 Nppa β-MHC

pcbp2在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖的影响

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PCBP2在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖的影响

作者：雷俊安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:采用免疫组织化学方法来检测pcbp2蛋白在胃癌组织中和在癌旁正常组织中的表达情况;将人胃癌细胞株HGC-27和MKN-45进行细胞培养,采用RNA干扰技术进行shpcbp2#1和shpcbp2#2转染以沉默pcbp2基因表达,采用MTT法、平板克隆形成实验和流... 详细信息

目的:采用免疫组织化学方法来检测pcbp2蛋白在胃癌组织中和在癌旁正常组织中的表达情况;将人胃癌细胞株HGC-27和MKN-45进行细胞培养,采用RNA干扰技术进行shpcbp2#1和shpcbp2#2转染以沉默pcbp2基因表达,采用MTT法、平板克隆形成实验和流式细胞仪检测pcbp2对人胃癌细胞株HGC-27和MKN-45的增殖能力、克隆形成、细胞周期的影响。旨在阐明pcbp2对胃癌的发生、发展的影响,探讨pcbp2作为肿瘤基因标记物对胃癌诊断的价值,为胃癌的早期诊断、早期治疗提供理论依据。方法:1、选取的100例标本,均来自于安徽医科大学第一附属医院存档的胃癌组织和癌旁正常组织。2、利用免疫组织化学方法来检测pcbp2蛋白在胃癌组织中以及在癌旁正常组织中的表达情况。3、选取美国种质保藏中心提供的胃癌细胞株HGC-27和MKN-45进行细胞培养。4、将HGC-27和MKN-45细胞进行shpcbp2#1和shpcbp2#2转染,设实验组(转染shpcbp2#1和shpcbp2#2组)和阴性对照组(negative control,NC)。5、采用Western Blot(蛋白印迹法)法检测转染了shpcbp2#1和shpcbp2#2后HGC-27和MKN-45细胞的中pcbp2蛋白的表达情况。6、采用qRT-PCR法检测转染了shpcbp2#1和shpcbp2#2后HGC-27和MKN-45细胞的中pcbp2 mRNA的表达情况。7、采用MTT法来观察转染了转染了shpcbp2#1和shpcbp2#2后HGC-27和MKN-45细胞的增殖情况。8、利用平板克隆形成实验来观察HGC-27和MKN-45细胞被shpcbp2#1和shpcbp2#2转染后的集落形成情况。9、通过流式细胞仪来观察HGC-27和MKN-45细胞被shpcbp2#1和shpcbp2#2转染后的细胞周期情况。10、使用SPSS22.0统计软件包对所获得的实验数据实施统计学处理,计量资料以均数±标准差来表示,两组间差异的比较采用独立样本非配对t检验;计数资料以百分比表示,组间比较采用卡方检验,结果以Ppcbp2的阳性率达(92/100)92%明显高于癌旁组织(31/100)31%,有统计学差异(Ppcbp2#1、shpcbp2#2组胃癌细胞中pcbp2蛋白表达水平与阴性对照shControl组比较明显降低HGC-27:0.573±0.062(P=0.023),0.624±0.071(P=0.027)vs 1.252±0.140;MKN-45:0.525±0.052(P=0.021),0.592±0.064(P=0.025)vs 1.323±0.165,有统计学差异(Ppcbp2#1、shpcbp2#2组胃癌细胞中pcbp2 mRNA表达水平与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:0.232±0.063(P=0.017),0.344±0.075(P=0.020)vs 0.622±0.090;MKN-45:0.512±0.084(P=0.030),0.633±0.096(P=0.035)vs 0.955±0.123,有统计学差异(Ppcbp2#1、shpcbp2#2组胃癌细胞增殖能力与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:0.721±0.110(P=0.004),0.633±0.092(P=0.002)vs 1.546±0.182;MKN-45:1.152±0.225(P=0.007),0.966±0.234(P=0.005)vs1.934±0.272),有统计学差异(Ppcbp2#1、shpcbp2#2组胃癌细胞克隆形成数量与阴性对照shControl组比较明显降低(HGC-27:256.534±45.216(P=0.006),224.655±42.186(P=0.005)vs 448.573±62.245;MKN-45:15.122±6.044(P=0.002),10.154±5.036(P=0.001)vs 43.264±7.067),有统计学差异(Ppcbp2#1、shpcbp2#2组中的胃癌细胞G1期的比例与阴性对照shControl组比较,其比例明显增加(HGC-27:69.542±8.321(P=0.023),72.631±8.143(P=0.026)vs 52.471±6.252;MKN-45:79.333±10.

关键词： pcbp2 胃癌表达增殖

pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用

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中国心血管病研究 2016年第10期14卷 944-947页

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目的探讨pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用.方法选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g,随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术（TAC组）和假手术（Sham组）.术后4周应用超声心动图评价小鼠的心... 详细信息

目的探讨pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用.方法选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g,随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术（TAC组）和假手术（Sham组）.术后4周应用超声心动图评价小鼠的心脏功能,应用心脏重量与体重之比（HW/BW）定量评价心肌肥厚程度.Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC （Myh7）的mRNA水平,同时检测pcbp2 mRNA水平.Western blot方法检测Nppa、β-MHC及pcbp2的蛋白水平.比较分析两组之间的差异.结果与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度明显增加[TAC组（8.23±1.88）mg/g比Sham组（4.89±0.68）mg/g],左心室射血分数[TAC组（41.38±2.22）％比Sham组（59.15±3.58）％]及短轴收缩率[TAC组（33.61±0.92）％比Sham组（43.87±1.37）％]明显降低（P＜0.05）.TAC组的心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC的mRNA水平及蛋白水平均明显高于Sham组（P＜0.05）.然而,TAC组pcbp2mRNA水平及蛋白水平却明显低于Sham组（P＜0.05）,与心肌标志物Nppa、β-MHC的变化趋势相反.结论 pcbp2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调pcbp2表达可能会抑制心肌肥厚的发展.

关键词： pcbp2 心肌肥厚 Nppa β—MHC