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微RNA-129-5p下调pak5表达并调控骨肉瘤细胞增殖和凋亡

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肿瘤 2019年第2期39卷 99-106,115页

作者：章慧孙星星周梅香韩坤田聪甘志华闵大六上海交通大学附属第六人民医院肿瘤内科上海200233 上海健康医学院附属第六人民医院东院上海201306

目的 :探讨微RNA-129-5p(microRNA-129-5p,miR-129-5p)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,以及其可能的分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤细胞MG63和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p表达的差异。将miR-129-5p模拟物转染至... 详细信息

目的 :探讨微RNA-129-5p(microRNA-129-5p,miR-129-5p)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响,以及其可能的分子作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤细胞MG63和成骨细胞hFOB1.19中miR-129-5p表达的差异。将miR-129-5p模拟物转染至骨肉瘤MG63细胞,并采用实时荧光定量PCR法验证转染效率后,CCK-8和平板克隆形成实验检测骨肉瘤细胞增殖;FCM法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-129-5p和靶基因p21活化激酶5(p21-activated kinase 5,pak 5)的相互作用;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测pak5 mRNA和蛋白水平的变化;蛋白质印迹法检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(phospho-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)和β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的变化。将siRNA-pak5、pak5重组质粒以及miR-129-5p mimics+pak5重组质粒分别转染骨肉瘤MG63细胞后,采用上述方法进一步验证miR-129-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的分子作用机制。结果 :miR-129-5p在骨肉瘤MG63细胞中低表达(P 5)。转染miR-129-5p模拟物后,骨肉瘤细胞的增殖和克隆形成能力降低(P 5)。mi R-129-5p负性调控pak5基因表达(P 5)。转染miR-129-5p模拟物或siRNA-pak5后,pak5mRNA和蛋白表达水平明显降低(P值均5,P pak5可以恢复miR-129-5p对骨肉瘤细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响(P值均5)。结论 :miR-129-5p通过下调pak5基因表达,抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡;其作用机制可能与调控p-GSK-3β和β-catenin蛋白表达相关。

关键词：骨肉瘤微RNAs p21活化激酶类基因表达调控 miR-129-5p pak5

牙周夹板联合正畸治疗对牙周炎所致前牙扇形移位患者咀嚼功能和龈沟液PGE2、s ICAM-1、pak5的影响

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现代生物医学进展 2022年第1期22卷 83-87页

作者：陶丽林江聂萍朱敏房兵首都医科大学附属北京同仁医院口腔科北京100005 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颅颌面科上海200125 上海交通大学医学院附属第九人民医院正畸科上海200125

目的:探讨牙周夹板联合正畸治疗对牙周炎所致前牙扇形移位患者咀嚼功能和龈沟液中前列素E2(PGE2)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、p2l活化激酶5(pak5)的影响。方法:采用随机数字表法,将我院2018年2月~2020年2月间接收的93例牙周炎... 详细信息

目的:探讨牙周夹板联合正畸治疗对牙周炎所致前牙扇形移位患者咀嚼功能和龈沟液中前列素E2(PGE2)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、p2l活化激酶5(pak5)的影响。方法:采用随机数字表法,将我院2018年2月~2020年2月间接收的93例牙周炎所致前牙扇形移位患者分为对照组(46例,牙周基础治疗、牙周夹板治疗)和研究组(47例,牙周基础治疗、牙周夹板治疗联合正畸治疗),观察两组疗效,对比两组治疗前后的牙周情况,咀嚼功能、美观度,龈沟液PGE2、s ICAM-1、pak5水平。结果:研究组的临床总有效率高于对照组(P5)。研究组治疗后牙周菌斑指数(PLI)、探诊深度(PD)、牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)、龈沟出血指数(SBI)低于对照组(P5)。研究组治疗后探诊出血率、前牙咬合低于对照组,咀嚼功能评分高于对照组(P5)。研究组治疗后牙周袋深度、前牙覆盖度、牙槽骨高度低于对照组(P5)。研究组治疗后龈沟液PGE2、s ICAM-1、pak5水平低于对照组(P5)。结论:牙周夹板联合正畸治疗可有效恢复牙周炎所致前牙扇形移位患者牙周功能和咀嚼功能,且美观效果好,还可减轻对龈沟液PGE2、s ICAM-1、pak5水平的影响。

关键词：牙周夹板正畸治疗牙周炎前牙扇形移位咀嚼功能 PGE2 s ICAM-1 pak5

pak5/β-catenin信号通路在乳腺癌细胞多药耐药中的作用及机制

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临床与实验病理学杂志 2021年第3期37卷 258-263页

作者：巩婵婵李艳青展瑞汤颖陆夏良苏州市第九人民医院病理科苏州215200

目的探讨pak5是否通过β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的耐药。方法采用药物浓度递增法构建耐药细胞模型。CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力。Western blot法检测pak5蛋白表达。罗丹明染色观察细胞荧光表达强弱。免疫荧光及免疫... 详细信息

目的探讨pak5是否通过β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的耐药。方法采用药物浓度递增法构建耐药细胞模型。CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力。Western blot法检测pak5蛋白表达。罗丹明染色观察细胞荧光表达强弱。免疫荧光及免疫共沉淀实验检测pak5与β-catenin的相互关系。结果与亲本细胞相比,耐药细胞增殖能力增强;罗丹明染色显示耐药株细胞荧光强度减弱。Western blot实验结果表明耐药细胞中pak5表达增加。pak5过表达细胞增殖能力增强。与对照组细胞相比,pak5过表达组细胞IC50值明显增加,而pak5干扰组的IC50值则明显降低。细胞免疫荧光定位实验显示,pak5过表达后,β-catenin表达增加。免疫共沉淀实验表明,pak5可与β-catenin结合并影响其表达。结论pak5促进乳腺癌细胞产生耐药,且可能是通过β-catenin信号通路,因此pak5可能成为治疗乳腺癌患者的新靶点。

关键词：乳腺肿瘤细胞耐药 pak5 β-catenin

pak5与乳腺癌分子分型及临床病理特征的相关性分析

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临床与实验病理学杂志 2021年第4期37卷 420-424页

作者：巩婵婵李艳青钱振华展瑞汤颖陆夏良江苏省苏州市第九人民医院病理科苏州215200

目的探讨pak5表达与乳腺癌分子分型及临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化法检测乳腺癌组织中pak5、ER、PR、HER2、Ki-67表达并评分,应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)进一步检测免疫组化HER22+的乳腺癌... 详细信息

目的探讨pak5表达与乳腺癌分子分型及临床病理特征的相关性。方法采用免疫组化法检测乳腺癌组织中pak5、ER、PR、HER2、Ki-67表达并评分,应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)进一步检测免疫组化HER22+的乳腺癌组织中HER2基因扩增情况,分析pak5表达与乳腺癌分子分型、TNM分期、肿块大小、淋巴结转移等的关系。结果根据HER2基因有无扩增分别纳入HER2阳性组和阴性组。与癌旁组织相比,pak5在乳腺癌组织中的表达增加;pak5高表达与患者肿块较大、淋巴结转移、TNM高分期等呈正相关(P5);pak5高表达与患者生存率低相关(P5);pak5表达与ER、PR表达呈负相关,与Ki-67表达呈正相关(P5);与非三阴型乳腺癌相比,pak5在三阴型乳腺癌中的表达增加,差异有统计学意义(P5)。结论pak5在乳腺癌组织中的表达增加,且与乳腺癌分子分型、TNM分期及不良预后密切相关,pak5有望成为临床治疗乳腺癌的新靶点。

关键词：乳腺肿瘤 pak5 分子分型免疫组织化学

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pak5对大肠癌细胞黏附及迁移的影响

广东医学 2010年第7期31卷 820-822页

作者：龚伟姜泊张宏权南方医科大学南方医院消化内科广州510515

目的研究pak5对大肠癌细胞黏附以及迁移的影响。方法采用基因转染上调pak5在LST细胞中的表达水平,以及RNA干扰下调pak5在SW480细胞中的表达水平,采用细胞黏附以及迁徙实验检测pak5的黏附、迁徙能力;结果采用基因转染上调pak5在LST细胞... 详细信息

目的研究pak5对大肠癌细胞黏附以及迁移的影响。方法采用基因转染上调pak5在LST细胞中的表达水平,以及RNA干扰下调pak5在SW480细胞中的表达水平,采用细胞黏附以及迁徙实验检测pak5的黏附、迁徙能力;结果采用基因转染上调pak5在LST细胞株中的表达水平后,细胞-基质黏附能力减弱,迁徙能力增强;相反,采用RNA干扰敲低pak5在SW480细胞株中的表达水平后,细胞-基质黏附能力增强,迁徙能力减弱。结论pak5通过减弱细胞-基质黏附,增强大肠癌细胞的迁徙能力。

关键词： pak5 大肠癌细胞黏附与迁移

pak5与肺结核患者外周血单核细胞活化的相关性研究

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PAK5与肺结核患者外周血单核细胞活化的相关性研究

作者：金育娇杭州师范大学

学位级别：硕士

目的:比较结核组和对照组中外周血单核细胞的百分比、单核细胞中人白细胞DR抗原(HLA-DR)的表达以及P21-活化激酶5(pak5)的水平,评估pak5与肺结核患者外周血单核细胞活化是否相关。方法:收集39例活动性肺结核患者和39例按性别和年龄±2... 详细信息

目的:比较结核组和对照组中外周血单核细胞的百分比、单核细胞中人白细胞DR抗原(HLA-DR)的表达以及P21-活化激酶5(pak5)的水平,评估pak5与肺结核患者外周血单核细胞活化是否相关。方法:收集39例活动性肺结核患者和39例按性别和年龄±2岁配对的健康体检者的外周血标本,进行外周血细胞计数、细胞染色和流式细胞术分析以及RT-FQ-PCR检测pak5基因转录水平,统计分析比较两组间单核细胞百分比、单核淋巴细胞比、单核细胞中HLA-DR表达及pak5 mRNA水平,以及评估pak5与单核细胞活化的相关性。结果:结核组外周血中单核细胞的比例(11.1±2.3%)较对照组(5.3±1.4%)显著增高。此外,结核组中单核细胞与淋巴细胞的比值(0.49±0.20)比对照组(0.16±0.06)中更高,差异具有统计学意义。结核组中单核细胞活化的百分比(20.6±5.9%)相较与对照组(8.3±2.6%)显著增高。而且,结核组的活化单核细胞数(19.4±6.8 10/L)也高于对照组(5.7±3.0 10/L),差异具有统计学意义。相比于对照组(0.53±0.13;n=7),结核组(n=5)患者的单核细胞中的pak5 mRNA(0.94±0.28)显著增高。此外,pak5 mRNA与单核细胞中HLA-DR表达存在着正相关并具有统计学意义(r=0.81,P=0.001;n=12)。结论:肺结核患者外周血单核细胞比例、活化单核细胞比例及pak5表达均显著增高,同时pak5与外周血单核细胞活化显著相关。

关键词：肺结核单核细胞 pak5 HLA-DR

pak5在肺腺癌中的表达及对A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

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PAK5在肺腺癌中的表达及对A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

作者：王雅玲青岛大学

学位级别：硕士

目的:肺癌是我国最普遍的恶性肿瘤之一,其致死率居首位。肺癌分为两大亚型:小细胞肺癌(small cell lung cancer)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中NSCLC约占原发性肺癌的85%,NSCLC主要包括鳞状上皮细胞癌、腺癌和... 详细信息

目的:肺癌是我国最普遍的恶性肿瘤之一,其致死率居首位。肺癌分为两大亚型:小细胞肺癌(small cell lung cancer)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),其中NSCLC约占原发性肺癌的85%,NSCLC主要包括鳞状上皮细胞癌、腺癌和大细胞癌,肺腺癌是NSCLC最常见的亚型,由于缺乏特异敏感的早期诊断方法和有效的治疗方法,肺癌5年生存率较低。据估计,如果所有分期的肺癌患者合并统计,肺腺癌生存率只有18%。因而,需要筛选新的肺腺癌相关基因来提供有效的治疗靶点。P21活化激酶5(pak5)于2002年首次被克隆,并被鉴定为一种脑特异性激酶,参与了神经细胞中纤维蛋白的形成。pak5是P21活化激酶(paks)家族最新发现的成员,定位于线粒体和细胞核内,pak5基因位于人类染色体20p12上,编码相对分子质量80kDa蛋白。自从在脑神经元细胞中发现pak5以来,越来越多的证据表明pak5是肿瘤进展的重要介质。pak5目前已被证实在多种肿瘤中高表达,调节肿瘤细胞骨架改变、抗凋亡、促进肿瘤细胞侵袭、迁移和增殖等。目前pak5在肺腺癌中的表达罕见研究。本实验探究pak5在肺腺癌组织中的表达情况,并评估其对肺腺癌患者预后及对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测75例肺腺癌组织和20例癌旁组织中pak5蛋白的表达情况,分析pak5与患者临床病理特征之间的关系,使用Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验分析pak5蛋白的表达水平对患者预后的影响。体外培养人肺腺癌A549细胞,构建和包装针对pak5的2个不同靶点序列RNA干扰慢病毒载体和1个阴性对照RNA干扰慢病毒,通过慢病毒感染A549细胞,荧光激发显微镜观察细胞内GFP表达的绿色荧光情况,利用Western Blot验证转染细胞pak5蛋白的表达情况并筛选出干扰效率最高的靶点序列。采用CCK8增殖实验观察pak5基因沉默对A549细胞增殖能力的影响,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验观察pak5基因沉默对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:75例肺腺癌组织标本中有41例(54.67%)pak5蛋白高表达,34例(45.3%)低表达,20例癌旁组织中有5例(25%)pak5蛋白高表达,15例(75%)低表达,经统计学分析,肺腺癌组织中pak5表达水平显著高于癌旁组织(P5),pak5的表达水平与患者的淋巴结有无转移、分化程度及TNM分期显著相关(P5),与患者的年龄、性别及有没有吸烟无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示pak5高表达组患者的3年生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P5)。慢病毒转染后的A549细胞中可见绿色荧光,表明目的载体转染并表达于A549细胞中。Western Blot结果显示实验组(Lv-shpak5-1组)A549细胞中pak5干扰效率最显著(P5),A549细胞pak5沉默株成功构建。CCK8增殖实验结果显示,Lv-shCon组在48h,72h的OD值(450nm)均高于Lv-shpak5-1组,差异有统计学意义(P5);划痕愈合实验结果显示,Lv-shpak5-1组A549细胞划痕愈合率低于Lv-shCon组,差异有统计学意义(P5),Transwell侵袭实验结果显示,Lv-shpak5-1组侵袭细胞数少于Lv-shCon组,差异有统计学意义(P5)。结论:pak5在肺腺癌组织中表达水平显著高于癌旁组织,其表达水平与淋巴结有无转移、分化程度及TNM分期显著相关;pak5高表达与肺腺癌患者的不良预后有关;干扰pak5表达可导致肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力降低;提示pak5可能在肺腺癌的发生、发展中起促进作用,使pak5有望成为肺腺癌患者潜在的治疗靶点。

关键词： pak5 肺腺癌增殖侵袭转移

miR-489通过打靶pak5抑制黑色素瘤的迁移

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中国医科大学学报 2018年第4期47卷 355-357,363页

作者：郭冰玉回蔷常鹏陶凯沈阳军区总医院整形外科沈阳110840

目的探讨miR-489对黑色素瘤迁移的抑制作用。方法通过Transwell实验检测miR-489对黑色素瘤迁移的影响;荧光素酶报告基因实验检测A375细胞中miR-489对pak5的靶向作用;进一步通过Western blotting以及实时PCR检测miR-489对于A375细胞... 详细信息

目的探讨miR-489对黑色素瘤迁移的抑制作用。方法通过Transwell实验检测miR-489对黑色素瘤迁移的影响;荧光素酶报告基因实验检测A375细胞中miR-489对pak5的靶向作用;进一步通过Western blotting以及实时PCR检测miR-489对于A375细胞中pak5的影响。结果 Transwell实验发现miR-489过表达后可以显著抑制A375细胞的迁移,当miR-489受到抑制后,A375细胞的迁移受到促进。荧光素酶报告基因实验证明,miR-489可以直接作用于pak5。Western blotting和实时PCR检测发现,过表达miR-489可以抑制A375细胞中pak5蛋白的表达;当miR-489受到抑制后蛋白表达有所增加。结论 miR-489可以通过打靶pak5抑制黑色素瘤细胞的迁移。

关键词： miR-489 黑色素瘤 A375 迁移 pak5

pak5在骨肉瘤侵袭转移及耐药相关机制中的研究

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PAK5在骨肉瘤侵袭转移及耐药相关机制中的研究

作者：王雅灵上海交通大学

学位级别：硕士

研究背景:骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤,年发病率约为0.2.3/10万。骨肉瘤好发于青少年,发病年龄多为5-20岁。好发部位为长骨,一般为股骨远端或胫骨近端,其次为肱骨近端,其他部位较少见。其血行转移发生早且发生率高,进展迅速,转移... 详细信息

研究背景:骨肉瘤是最常见的骨原发性恶性肿瘤,年发病率约为0.2.3/10万。骨肉瘤好发于青少年,发病年龄多为5-20岁。好发部位为长骨,一般为股骨远端或胫骨近端,其次为肱骨近端,其他部位较少见。其血行转移发生早且发生率高,进展迅速,转移部位多位于肺部。1970年以前,对于无转移的肢体骨肉瘤一般采取截肢手术治疗,其五年生存率不足20%,患者死亡的主要原因是肺转移。化疗药物的应用使得骨肉瘤患者肺转移率得到明显控制,5年生存率达到60%-80%。但是仍有一部分患者对化疗药产生耐药而导致复发或转移,最终治疗失败而死亡。骨肉瘤的发生和发展是多因素参与、多步骤发展的生物学过程,深入理解骨肉瘤发生发展及转移机制对寻找理想的治疗靶点具有重要意义。p21活化激酶5(p21-activated kinase 5,pak5)是paks家族中新近发现的成员,在细胞骨架重组,细胞生长、增殖、分化,基因转录及细胞凋亡等一系列的细胞功能中发挥重要作用。近年来研究发现,pak5蛋白与某些恶性肿瘤的侵袭及转移密切相关,如乳腺癌、结肠癌等。但其在骨肉瘤中的研究鲜见报道。目的:探索pak5在骨肉瘤侵袭转移及化疗耐药中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测pak5在骨肉瘤及肺转移组织中的表达,并分析pak5的表达与患者性别、年龄、发病部位、病理类型、Enneking外科分期、肿瘤坏死率、是否有肺转移、中位无进展生存期和总生存期等临床参数的相关性。应用QRT-PCR、western blot和免疫荧光染色检测骨肉瘤细胞中pak5的表达情况。应用药物敏感实验、细胞增殖实验、划痕试验及Transwell侵袭小室试验分析pak5在骨肉瘤细胞侵袭转移及药物耐药中的作用。结果:pak5在骨肉瘤组织及肺转移组织中呈阳性表达,在骨正常组织中呈阴性表达。pak5蛋白表达与化疗疗效、疾病预后以及骨肉瘤肺转移有明显相关性。化疗药物作用于沉默pak5的MG63、Saos2细胞株后IC50降低并诱导细胞凋亡,且呈剂量依耐性。沉默pak5的骨肉瘤细胞其增殖迁移转移能力明显弱于未沉默pak5的骨肉瘤细胞。pak5和MMP2在骨肉瘤肺转移组织中呈高表达。pak5与肿瘤转移相关基因MMP2有相关性,呈正相关。结论:pak5在骨肉瘤侵袭转移中发挥作用,并可能参与骨肉瘤化疗耐药的机制。

关键词：骨肉瘤 pak5 侵袭转移耐药 MMP2