检索结果-南通市图书馆

作者：李胜东郑州大学

学位级别：硕士

棉花是具有重要经济价值的农作物,棉纤维是纺织工业的主要原材料,有强度高、透气性好等优点。此外,棉籽油被用来制作薯条、黄油和沙拉。棉花叶片是进行光合作用的主要部位,叶片发育是影响棉花产量和品质的关键因素。油菜素内酯(Brassino... 详细信息

棉花是具有重要经济价值的农作物,棉纤维是纺织工业的主要原材料,有强度高、透气性好等优点。此外,棉籽油被用来制作薯条、黄油和沙拉。棉花叶片是进行光合作用的主要部位,叶片发育是影响棉花产量和品质的关键因素。油菜素内酯(Brassinolide,BR)是一种植物生长发育所必须的植物激素,过去已有研究证明BR在植物生长和分化中发挥重要作用,在BR缺陷突变体中植物叶片大小和发育受到显著影响。然而,BR调节植物叶片大小的具体机制仍有待研究。本研究通过深入剖析棉花BR缺陷突变体pagoda1(pag1)和BR信号核心转录因子BRI1-EMS-SUPPRESSOR 1(BES1)过表达以及RNA干扰转基因植株的叶片表型,筛选到一个GhBES1的潜在靶基因GhEXO7并对其功能进行验证,解析了BR调节棉花叶片大小的分子机制。具体研究结果如下:1.我们发现BR缺陷型棉花突变体pag1的叶片比野生型CCRI24明显变小,并且EXORDIUM家族基因GhEXO7的表达在pag1中显著下调。RT-q PCR分析表明GhEXO7表达能够被BL处理诱导,并且在GhBES1转基因棉花中GhEXO7的表达水平与GhBES1表达水平正相关,这暗示了BR可能通过调节GhEXO7基因的表达影响叶片大小。2.为了进一步解析GhEXO7的功能,我们对GhEXO家族进行了全基因组鉴定和分析。结果表明GhEXO7与拟南芥EXL2同源,具有保守的phi-1结构域。在拟南芥中异源过表达GhEXO7显著增加了拟南芥叶片尺寸和根长,组织学观察发现GhEXO7过表达拟南芥叶片细胞与WT相比具有更明显的扩张,并且细胞伸长相关基因显著上调。在棉花中沉默GhEXO7抑制了株高、叶面积、成熟纤维以及根的发育,组织学观察发现GhEXO7沉默棉花叶片细胞与空载对照相比细胞扩张受到抑制,RNA-seq分析揭示GhEXO7通过整合多种细胞进程和生理途径影响细胞扩张。3.亚细胞定位结果表明,GhEXO7与拟南芥EXO基因一样为膜定位蛋白。GhEXO7启动子区包含的E-box元件,是BR信号通路的主要转录因子BES1的结合位点。为了进一步探究BR调节叶片大小的具体机制,利用EMSA、BLI、双荧光素酶报告实验明确了GhBES1直接靶标GhEXO7启动子区的E-box激活其表达进而调节叶片大小的机理。因此,提出了BR核心转录因子GhBES1通过激活GhEXO7促进细胞扩张调节棉花叶片大小这一工作模型。本研究为棉花种质资源的研究和遗传改良提供了支持。

关键词：棉花叶片大小细胞扩张油菜素内酯 pag1 GhBES GhEXO7

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激活蛋白AP-2αsiRNA电转染牛双核滋养层巨细胞对其特异表达基因转录水平的影响

激活蛋白AP-2αsiRNA电转染牛双核滋养层巨细胞对其特异表达基因...

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作者：周璇南京农业大学

学位级别：硕士

2α（activator protein-2α,AP-2a,TFAP2A）为探讨转录激活蛋白对牛双核滋养层（binucleate trophoblast gant cells,BNC）巨细胞特异表达基因的转录调控作用,本实验培养了牛原代滋养层巨细胞,对其进行了核染色和细胞免疫化学染色鉴定... 详细信息

2α（activator protein-2α,AP-2a,TFAP2A）为探讨转录激活蛋白对牛双核滋养层（binucleate trophoblast gant cells,BNC）巨细胞特异表达基因的转录调控作用,本实验培养了牛原代滋养层巨细胞,对其进行了核染色和细胞免疫化学染色鉴定,以建立AP-2αsiRNA细胞模型进行体外实验。采用电转技术将化学合成导入原代细胞,用流式细胞仪和荧光显微镜检测干扰效率,采用台盼蓝染色检测细胞存活率,优化转染条AP-2αsiRNA件以找到最佳电转参数;采用荧光定量PCR检测TFAP2A对内源的干扰效Cshl、PRP-Ⅰ率,筛选出最佳干扰位点;最后采用荧光定量PCR分别检测干扰后BNC特异表达基因pag1和mRNA水平. 的本研究主要分为两个部分：一、牛滋养层巨细胞的培养和鉴定取怀孕牛45-60天的完整子宫,无菌条件下收集胚胎子叶,Ⅰ型胶原酶消化分离细胞后采用Percoll细胞分离液纯化滋养层细胞。用含15%胎牛血清和滋养层细胞生长添加剂（trophoblast growth supplement,TGS）的DMEM培养基培养细胞,并用差异贴壁法再次进行纯化。采用台盼蓝和Hoechst33342细胞染色液对细胞活力及形态学进行分析。采用波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学法进行鉴定。结果显示,本实验分离的细胞经台盼蓝染色后细胞存活率大于90%,用Percoll细胞分离法纯化后BNC的纯度可达30%,细胞培养10天后,BNC占细胞总数的45-50%。抗细胞角蛋白抗体检测呈阳性,抗波形蛋白抗体检测呈阴性,经核染可见典型双核特征。本实验建立了一种相对快速、简便、能够培养相对较高纯度的牛原代胚胎滋养层巨细胞的方法。二、AP-2αsiRNA电转染原代BNC细胞培养后第10天收获细胞,将化学合成的AP-2αaiRNA干扰链,采用电转仪转染入纯化后的BNC,首先转入带荧光标记基团的siRNA（NC-siRNA-FAM）,4小时后用流式细胞仪和台盼蓝染色分别检测转染效率和细胞活率。再转入不同位点的干扰链,48小时后用实时荧光定量PCR检测AP-2αmRNA水平,以筛选出最佳干涉位点。以最佳干涉位点的siRNA进行实验,即转入该siRNA干扰链,48小时后RT-PCR测定Cshl、PRP-Ⅰ和pag1的mRNA水平。本研究采用电转染方法,结果显示,最佳优化条件为：细胞密度调整为500μ1 PBS含2×106个细胞,加入6μg NC-siRNA-FAM,电转参数为2×120V,2ms。在此参数下阳性细胞率达到93.5±1.66%,且细胞存活率为78.56+5.93%。初步建立了有效的siRNA电转入牛滋养层巨细胞的方法。PCR结果显示,与对照组和ns-siRNA组相比,AP-2αsiRNA干扰效率可达72.30±3.28%,差异极显著（P＜0.01）,转染后内源性Cshl和PRP-Ⅰ的mRNA水平分别下降了65.45±6.38%,40.73+11.72%,差异极显著（P＜0.01）;而pag1的mRNA水平减少了11.59+1.88%,与ns-siRNA组相比差异不显著（P＞0.05）,数据表明AP-2a可能直接作用于Csh1和PRP-Ⅰ基因的AP-2结合位点,或与AP-2其他家族成员或转录因子共同作用从而参与了Cshl和PRP-Ⅰ基因的转录调控,而AP-2α对pag1的转录调控还有待研究。

关键词：反刍动物双核滋养层巨细胞激活蛋白2α Csh1 PRP-Ⅰ pag1

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辣椒PPI蛋白与AGAMOUS-like蛋白间相互作用的鉴定

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辣椒杂志 2016年第3期14卷 18-23页

作者：王晓平郭金菊李亚男王鹏沈火林中国农业大学园艺学院设施蔬菜生长发育调控北京市重点实验室北京100193

利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补(Bi FC)技术,对控制花器官发育的B类蛋白,即PPI(Gen Bank登录号:GU812176)与两个AGAMOUS-like蛋白即已被分别命名的pag1(Capana02g001695)和pag2(Capana07g001940)间的互作关系进行了研究。结果表明,PPI蛋白与pag1和pag2蛋白均存在特异性相互作用,说明辣椒花器官发育过程中PPI蛋白可能与pag1和pag2形成蛋白复合体,共同控制雄蕊的发育。这有助于进一步揭示辣椒雄蕊发育的分子机理。

关键词：辣椒 PPI pag1 pag2 酵母双杂交双分子荧光互补蛋白互作

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人喉鳞癌细胞辐射前后放射敏感性分子机制的比较

人喉鳞癌细胞辐射前后放射敏感性分子机制的比较

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湖北省抗癌协会青年委员会第五届青年学术论坛

作者：柯青朱圣明杨贤子骆志国太和医院肿瘤科

目的在前期研究基础上,比较人喉鳞癌细胞接收辐射前后放射敏感性的变化及其分子机制。方法人喉鳞癌细胞Hep-2,通过单细胞克隆法,建立未接收辐射的Hep-2细胞亚克隆细胞,分析亚克隆细胞之间的放射敏感性差异,并对放射敏感性差异最明显的... 详细信息

目的在前期研究基础上,比较人喉鳞癌细胞接收辐射前后放射敏感性的变化及其分子机制。方法人喉鳞癌细胞Hep-2,通过单细胞克隆法,建立未接收辐射的Hep-2细胞亚克隆细胞,分析亚克隆细胞之间的放射敏感性差异,并对放射敏感性差异最明显的亚克隆细胞进行基因表达谱分析,验证差异表达的关键分子作用。人喉鳞癌细胞Hep-2采用临床分割放疗模式,给予辐射诱导,建立放疗耐受亚克隆细胞,检测辐射耐受细胞与未接受辐射细胞的基因表达谱,验证差异表达的关键分子作用,并对比未接收辐射的亚克隆细胞的放射敏感性变化与辐射后耐受细胞放射敏感性变化的差异分子。结果未接受辐射的Hep-2细胞内在放射敏感性变化的差异表达基因主要集中在跨膜衔接蛋白信号通路上,pag1基因对Hep-2内在放射敏感性有调控作用;接受辐射后Hep-2耐受细胞主要的差异基因主要集中在端粒、端粒酶信号通路上,端粒酶的变化在Hep-2细胞的获得性放射抗拒中有调控作用。结论人喉鳞癌细胞Hep-2接收辐射前后放射敏感性差异的分子机制不同,针对其原发性内在放射敏感性差异和辐射后获得性放射耐受干预的分子靶不同。

关键词：人喉鳞癌内在放射抗拒辐射耐受 pag1 端粒酶

来源： cnki会议评论

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