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Preparation and Activity Identification of Recombinant Protein pacap-ptd

Agricultural Biotechnology 2012年第2期1卷 46-49,52页

作者： Lin HUANG Rongjie YU Juan LI Xiaofei LIU Jingjing WANG Bioengineering Institute of Jinan University Shandong New Time Pharmaceutical Co. Ltd.Lunan Pharmaceutical Group Corporation Beijing Genomics Institute at Shenzhen

[Objective] This study aimed to prepare recombinant protein pacap-ptd and measure its activity. [Method] The gene that encodes fusion protein pacap-ptd was cloned into the expression vector pKYB to construct recombinant expression vector pKYB-pacap-ptd, which was then transformed into E. coli ER2566. The fusion protein consisting of pacap-ptd, intein and chitin was expressed under the induction of IPTG. Finally, the target fusion protein pacap-ptd was purified with IMPACT system （ Intein Mediated Purification with an Affinity of chitin-binding Tag）, and its activities to cross blood-brain barrier and to promote cell proliferation were measured. [ Result~ The molecular weight of the fusion protein pacap-ptd determined with laser time-of-flight mass spectrometry was con- sistent with the theoretical value. In addition, the protein could effectively cross the blood-brain barrier and promote cell proliferation as well. [ Conclusion] The construction and preparation of the fusion protein pacap-ptd not only lays foundation for further study on its biological function, but also improves the route of pacap administration, and thus expands its scope of application.

关键词： pacap-ptd pacap Intein FITC Blood-brain barrier Prokaryotic expression

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重组蛋白pacap-ptd的制备及其活性鉴定

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安徽农业科学 2012年第13期40卷 7645-7649页

作者：黄霖余榕捷李娟刘晓飞王静静暨南大学生物工程研究所广东广州510632 鲁南制药集团新时代药业有限公司山东费县273400

[目的]制备重组蛋白pacap-ptd,并对其活性进行鉴定。[方法]设计编码融合蛋白pacap-ptd基因,克隆到表达载体pKYB,构建重组表达载体pKYB-pacap-ptd,转化大肠杆菌ER2566中。采用IPTG诱导由pacap-ptd、内含肽和几丁质组成的融合蛋白表达。利... 详细信息

[目的]制备重组蛋白pacap-ptd,并对其活性进行鉴定。[方法]设计编码融合蛋白pacap-ptd基因,克隆到表达载体pKYB,构建重组表达载体pKYB-pacap-ptd,转化大肠杆菌ER2566中。采用IPTG诱导由pacap-ptd、内含肽和几丁质组成的融合蛋白表达。利用IMPACT(Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag)介导的纯化系统制备目的融合蛋白pacap-ptd,并对其活性进行鉴定。[结果]试验所得的目的蛋白经测定分子量,结果与理论值相符,且试验中pacap-ptd能有效的穿越血脑屏障。[结论]融合蛋白pacap-ptd的构建和制备为其生物学功能的深入研究奠定了基础,同时可用于改善其用药途径,扩大其应用范围。

关键词： pacap-ptd 队cAP 内含肽 FITC 血脑屏障原核表达

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含转导域重组神经肽对D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的影响

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安徽医科大学学报 2020年第3期55卷 349-355页

作者：刘贞银梁阳欧阳军郑丹丹余榕捷张华华广东医科大学基础医学院生物学教研室东莞523808 泉州医学高等专科学校基础医学部生理教研室泉州362100 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pacap)及含蛋白转导域的重组pacap(pacap-ptd)对D-半乳糖(D-Gal)致免疫衰老小鼠胸腺功能的影响,明确其延缓免疫衰老的作用.方法将30只雄性BALB/c小鼠随机分组:对照组5只,每天颈背部皮下注射生理盐水(500... 详细信息

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pacap)及含蛋白转导域的重组pacap(pacap-ptd)对D-半乳糖(D-Gal)致免疫衰老小鼠胸腺功能的影响,明确其延缓免疫衰老的作用.方法将30只雄性BALB/c小鼠随机分组:对照组5只,每天颈背部皮下注射生理盐水(500 mg/kg);模型组25只,注射等量D-Gal溶液,连续注射42 d.再从模型组中随机选取18只均分为pacap组、pacap-ptd组、D-Gal组.pacap组和pacap-ptd组分别每天注射pacap和PAC-AP-ptd溶液(12.5 ml/kg),D-Gal组注射等量的生理盐水、采用Real-time PCR法检测胸腺和脾脏初始T淋巴细胞标志物(sjTRECs)的含量以及胸腺相关基因T淋巴细胞易位蛋白(LMO2)、白细胞介素-7(IL-7)和叉头蛋白N1(Foxn1)的表达;流式细胞术检测全血中T细胞CD3、CD4、CD8的表型变化.结果小鼠胸腺和脾脏的初始T细胞中sjTRECs的含量:D-Gal组pacap组pacap-ptd组(Ppacap和pacap-ptd均能够上调免疫衰老小鼠显示胸腺功能和状态相关基因Foxn1、IL-7的表达水平(Ppacap-ptd比pacap上调基因Foxn1、IL-7的表达水平更显著(Ppacap组pacap-ptd组(Ppacap和pacap-ptd显著增强小鼠胸腺初始T淋巴细胞生成和输出功能,维持外周T淋巴细胞受体库多样性;上调胸腺功能和状态相关基因的表达,扩展胸腺微环境;增强细胞免疫功能,恢复了退化的胸腺功能,具有延缓衰老和免疫保护作用.

关键词： pacap pacap-ptd 免疫衰老胸腺

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垂体腺苷酸环化酶激活肽及其衍生物对小鼠胸腺微环境内功能细胞的影响

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广东医学 2016年第23期37卷 3485-3489页

作者：梁阳郑丹丹欧阳军余榕捷张华华广东医科大学基础医学院生物学教研室在读硕士研究生广东东莞523808 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的探究垂体腺苷酸环化酶激活肽(pacap)及其衍生肽对地塞米松(Dex)诱导的胸腺微环境内功能细胞损伤的保护作用。方法采用胶原酶法获取原代细胞,在共培养的体系中经Dex处理后,实验组加入pacap-ptd及pacap,采用新型细胞增殖及细胞毒性测... 详细信息

目的探究垂体腺苷酸环化酶激活肽(pacap)及其衍生肽对地塞米松(Dex)诱导的胸腺微环境内功能细胞损伤的保护作用。方法采用胶原酶法获取原代细胞,在共培养的体系中经Dex处理后,实验组加入pacap-ptd及pacap,采用新型细胞增殖及细胞毒性测试剂(CCK8)比色法检测细胞活性;Annexin V-FITC/PI流式双染检测细胞凋亡率;ELISA检测共培养体系中细胞因子的表达量。结果经过48 h处理后细胞的活性明显下降,流式细胞仪结果显示pacap-ptd及pacap加药后胸腺微环境内功能细胞的存活率与未加药者比较显著升高(Ppacap-ptd及pacap对Dex诱导的胸腺微环境内功能细胞凋亡具有抑制作用,且pacap-ptd的作用比pacap更为明显。

关键词：胸腺微环境地塞米松 pacap-ptd 垂体腺苷酸环化酶激活肽

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