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畜牧兽医学报 2020年第5期51卷 1110-1118页

作者：王宁谨瑾刘璐刘欢欢姜立波辛九庆刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体病创新团队哈尔滨150069 齐齐哈尔市动物卫生监督所齐齐哈尔161000

为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株p97蛋白C末端包含R1区的肽段(p97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp p97蛋白MAb的杂... 详细信息

为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株p97蛋白C末端包含R1区的肽段(p97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp p97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的p97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。

关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体 p97蛋白表位鉴定

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猪肺炎支原体黏附因子p97蛋白的高效表达与鉴定

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畜牧与兽医 2013年第11期45卷 69-72页

作者：才让卓玛宋秀红青海省海西州德令哈市畜牧兽医工作站青海德令哈817000

参考猪肺炎支原体基因组序列设计扩增p97基因片段的一对引物,利用pCR方法扩增出753 bp的基因片段,经测序鉴定正确后,将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,在IpTG诱导下重组蛋白p97获得表达,通过... 详细信息

参考猪肺炎支原体基因组序列设计扩增p97基因片段的一对引物,利用pCR方法扩增出753 bp的基因片段,经测序鉴定正确后,将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,在IpTG诱导下重组蛋白p97获得表达,通过SDSpAGE及Western blot鉴定重组蛋白的表达情况及蛋白活性。SDS-pAGE结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,该包涵体蛋白经变性、复性、亲和层析纯化后,Western blot鉴定表明重组蛋白能够被猪肺炎支原体阳性血清特异性识别,具有很好的反应活性与特异性,可以用于p97蛋白单克隆抗体的制备、p97蛋白结构与功能的研究,为进一步开发猪肺炎支原体快速检测试剂盒及新型疫苗研究奠定基础。

关键词：猪肺炎支原体 p97蛋白表达鉴定

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猪肺炎支原体黏附因子p97蛋白研究进展

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浙江农业科学 2022年第7期63卷 1545-1547,1552页

作者：涂尾龙吴华莉黄济张莺莺王洪洋曹建国卫金良甘叶青唐赛勇谈永松上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201106 上海市嘉定区动物疫病预防控制中心上海201800

猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子p97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解p97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体p97蛋白的研究论文,从黏附因子p97的分子结构、免疫原性... 详细信息

猪肺炎支原体(Mhp)是引起养猪企业损失的重大猪呼吸道疾病,而黏附因子p97蛋白是Mhp发病的主要致病因素。为了解p97蛋白对猪支原体肺炎致病机理,本综述分析了国内外关于猪肺炎支原体p97蛋白的研究论文,从黏附因子p97的分子结构、免疫原性,以及p97蛋白基因工程疫苗研发等多方面进行归纳,阐述了p97的研究现状。p97蛋白能够刺激机体产生特异性抗体,具有非常好的免疫原型,是构建重组蛋白疫苗的重要候选蛋白,能够为建立猪肺炎支原体实验室诊断和生物工程疫苗研制提供参考。

关键词：猪气喘病猪肺炎支原体黏附因子 p97蛋白基因工程疫苗

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猪肺炎支原体p97 R1区基因和大肠杆菌LTB基因的重组和表达

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中国兽医杂志 2010年第4期46卷 3-6页

作者：卢会英沈青春宁宜宝中国兽医药品监察所农业部兽药创新与生物安全评价重点开放实验室北京海淀100081

本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区... 详细信息

本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区基因。将扩增的目的片段插入到表达载体pET-28a(+)中,分别构建了两个原核表达质粒pET28a(+)-rLTBR1和pET28a(+)-rR1,诱导表达了两个融合蛋白rLTBR1和rR1。对表达的目的蛋白进行了SDS-pAGE和Western blot检测,结果表明,表达的蛋白为特异的蛋白。本试验为进一步的研究rLTBR1融合蛋白在黏膜免疫方面的作用打下了基础。

关键词：猪肺炎支原体 p97蛋白 R1 LTB

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