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p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究

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华西口腔医学杂志 2014年第1期32卷 18-22页

作者：佟冬冬张风河姚瑶张兆弢王进兵李青张新莲山东大学口腔医院口腔颌面外科山东省口腔生物医学重点实验室济南250012 安徽省第二人民医院口腔科合肥230022

目的对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体(p75NTR)阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的p75NTR阳性细胞进行单... 详细信息

目的对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体(p75NTR)阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的p75NTR阳性细胞进行单克隆培养、四甲基偶氮唑盐比色法及划痕实验检测,以未分选细胞为对照,分析p75NTR阳性细胞的生物学特性。结果舌鳞状细胞癌细胞株Tca-8113、Cal-27中,p75NTR阳性细胞的比例分别为3.1%和1.9%。与未分选的细胞相比,p75NTR阳性细胞的单克隆形成能力更高(Tca-8113细胞,p=0.024;Cal-27细胞,p=0.009);单克隆p75NTR阳性细胞再培养2周后,p75NTR阳性细胞率分别降为14.5%(Tca-8113)和5.8%(Cal-27);p75NTR阳性细胞体外增殖能力显著增强,且具有明显的侵袭迁移能力。结论 p75NTR阳性舌鳞状细胞癌细胞具有肿瘤干细胞的特性。

关键词：舌鳞状细胞癌肿瘤干细胞 p75神经营养蛋白受体

慢病毒介导沉默p75神经营养蛋白受体联合NGF过表达转染BMSCs复合脱钙骨基质异位成骨的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2020年第11期34卷 1438-1445页

作者：陈俊毅王宁张衡张贤平赵利民朱伦井黎智君贝朝涌桂林医学院附属医院四肢创伤骨科广西桂林541000

目的探索沉默p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)联合NGF过表达对大鼠BMSCs增殖活性和复合脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)构建组织工程骨异位成骨能力的影响。方法通过贴壁分离法培养SD大鼠BMSCs并传... 详细信息

目的探索沉默p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)联合NGF过表达对大鼠BMSCs增殖活性和复合脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)构建组织工程骨异位成骨能力的影响。方法通过贴壁分离法培养SD大鼠BMSCs并传代。取第3代BMSCs,分别用慢病毒介导沉默p75NTR基因(B组)、NGF过表达基因(C组)、沉默p75NTR和NGF过表达双基因(D组)转染,以未转染细胞作为对照(A组)。转染7 d后荧光显微镜观察目的基因荧光蛋白表达;细胞计数试剂盒8法检测转染后连续8 d细胞的活性;Western blot检测各组p75NTR和NGF蛋白表达。倒置相差显微镜和扫描电镜分别观察沉默p75NTR和NGF过表达双基因转染后BMSCs与DBM的黏附情况。将上述4组转染后BMSCs分别与DBM共培养制备组织工程骨后,埋植于8周龄SD大鼠背侧皮下构建皮下异位成骨模型(n=6),术后4、8周行HE染色,术后8周ALp染色观察钙结节形成,实时荧光定量pCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、ALp和骨钙素(osteocalcin,OCN)表达。结果转染7 d A组未见荧光表达,B组呈红色荧光表达,C组呈绿色荧光表达,D组呈红绿色复合荧光表达;目的基因荧光表达率可达70%左右。Western blot检测示,A、C组p75NTR蛋白相对表达量显著高于B、D组,C、D组NGF蛋白相对表达量显著高于A、B组,差异均有统计学意义(ppp染色示D组ALp活性最高,有更好的成骨表达。实时荧光定量pCR检测示,与A组比较,D组Runx2、ALp、OCN mRNA相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(pp75NTR联合NGF过表达双基因共转染BMSCs复合DBM构建组织工程骨具有良好的异位成骨能力,通过提高NGF的水平、关闭p75NTR凋亡通道,不仅可以提高细胞活性,还能更好地促进骨组织再生。

关键词： p75神经营养蛋白受体 NGF BMSCs 细胞活性脱钙骨基质异位成骨大鼠

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脑源性神经营养因子对施万细胞行为的影响

中华神经科杂志 2012年第7期45卷 524-525页

作者：李慧梁庆成吴云哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科 150086

神经营养因子在神经系统的发育与维持中起着重要作用，脑源性神经营养因子（BDNF）就是其中重要的一员。BDNF与相应受体p75神经营养蛋白受体（p75NTR）／原肌球蛋白受体激酶（trkB）结合，通过丝裂原活化蛋白激酶（MApK）／胞外信号调... 详细信息

神经营养因子在神经系统的发育与维持中起着重要作用，脑源性神经营养因子（BDNF）就是其中重要的一员。BDNF与相应受体p75神经营养蛋白受体（p75NTR）／原肌球蛋白受体激酶（trkB）结合，通过丝裂原活化蛋白激酶（MApK）／胞外信号调节激酶（ERK）、

关键词：脑源性神经营养因子细胞行为 p75神经营养蛋白受体丝裂原活化蛋白激酶胞外信号调节激酶受体激酶原肌球蛋白神经系统

慢病毒介导沉默p75NTR联合NGF过表达转染BMSCs复合脱钙骨基质异位成骨的实验研究

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慢病毒介导沉默P75NTR联合NGF过表达转染BMSCs复合脱钙骨基质异位...

作者：陈俊毅桂林医学院

学位级别：硕士

目的:探索沉默p75神经营养蛋白受体（p75 neurotrophin receptor,p75NTR）联合神经生长因子（nerve growth factor,NGF）过表达对大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖活性和复合脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）构建组织工程骨异位成骨能力的影响,对NGF、p75NTR新型复合基因在组织工程研究具有重要意义,并且为治疗骨缺损提供理论依据和新思路。方法:通过贴壁分离法培养SD大鼠BMSCs并传代,流式细胞仪检测干细胞表面标志物。取第3代BMSCs分别用慢病毒介导沉默p75NTR基因（B组）、NGF过表达基因（C组）、沉默p75NTR和NGF过表达双基因（D组）分别传染BMSCs,以未转染细胞作为对照（A组）。转染7 d后荧光显微镜观察目的基因荧光蛋白表达。细胞计数试剂盒8法检测转染后连续8 d细胞的活性。Westen blot检测各组p75NTR和NGF蛋白表达。倒置相差显微镜和扫描电镜分别观察沉默p75NTR和NGF过表达双基因转染后BMSCs与DBM的黏附情况。分别将上述4组转染后BMSCs与DBM共培养制备组织工程骨,埋植于8周龄SD大鼠背侧皮下组织构建皮下异位成骨模型（n=6）,术后4、8周行HE染色,术后8周ALp染色观察钙结节形成情况,实时荧光定量pCR检测成骨相关基因Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,Runx2）、ALp和骨钙素（osteocalcin,OCN）表达。结果:第3代BMSCs呈长梭形或纺锤形,经细胞形态学观察及CD14、CD29、CD34、CD44、CD45流式细胞仪鉴定,所培养细胞为BMSCs。转染7 d A组未见荧光表达,B组呈红色荧光表达,C组呈绿色荧光表达,D组呈红绿色复合荧光表达;目的基因荧光表达率可达70%左右。Western blot检测示,A、C组p75NTR蛋白相对表达量显著高于B、D组,C、D组NGF蛋白相对表达量显著高于A、B组,差异均有统计学意义（p＜0.05）。随时间推移,各组细胞增殖活性均上升,其中D组上升最明显,3～8 d细胞活性明显高于A组（p＜0.05）。倒置相差显微镜和扫描电镜观察示,BMSCs能与DBM形成良好黏附。皮下异位成骨实验显示,术后4周和8周,D组对比其他三组,有更多的骨组织形成;ALp染色示D组ALp活性最高,有更好的成骨表达。实时荧光定量pCR检测示,与A组比较,D组Runx2、ALp、OCN m RNA相对表达量显著升高,差异均有统计学意义（p＜0.05）。结论:沉默p75NTR联合NGF过表达双基因共转染BMSCs复合DBM构建组织工程骨具有良好的异位成骨能力,通过提高NGF的水平、关闭p75NTR凋亡通道,不仅可以提高细胞活性,还能更好促进骨组织再生。

关键词： p75神经营养蛋白受体神经生长因子大鼠骨髓间充质干细胞细胞活性脱钙骨基质异位成骨

p75NTR对小鼠面神经损伤后脑内神经元再生的影响

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口腔颌面外科杂志 2007年第2期17卷 139-142页

作者：张风河魏奉才杨丕山孙善珍山东大学口腔医学院口腔颌面外科山东济南250012 山东大学齐鲁医院口腔科山东济南250012

目的:探讨p75NTR在面神经损伤后面神经核运动神经元再生中的作用。方法:对p75基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干进行损伤,损伤后第4天,在面神经总干损伤的远中侧神经分叉处切断,将切断的面神经断端置入含有FastBlue的聚乙烯单端小... 详细信息

目的:探讨p75NTR在面神经损伤后面神经核运动神经元再生中的作用。方法:对p75基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干进行损伤,损伤后第4天,在面神经总干损伤的远中侧神经分叉处切断,将切断的面神经断端置入含有FastBlue的聚乙烯单端小管中进行后示踪标记,术后第7天冷冻切片后荧光显微镜下对面神经核运动神经元进行计数,然后进行统计分析。结果:两组之间再生的神经元数量有显著性差异(pp75NTR可以促进面神经运动神经元的再生。

关键词： p75神经营养蛋白受体 Fast Blue 再生小鼠基因敲除

p75NTR对小鼠面神经损伤轴突再生影响的实验研究

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口腔颌面外科杂志 2007年第1期17卷 29-31页

作者：张风河杨丕山魏奉才张学广山东大学口腔医学院口腔颌面外科山东济南250012 山东大学齐鲁医院口腔科山东济南250012

目的:探讨p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在面神经损伤再生修复中的作用。方法:p75NTR基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干损伤后第4天,在损伤的近中侧注射霍乱毒素B(choleratoxin B,CTB)进行示踪,对再生神... 详细信息

目的:探讨p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在面神经损伤再生修复中的作用。方法:p75NTR基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干损伤后第4天,在损伤的近中侧注射霍乱毒素B(choleratoxin B,CTB)进行示踪,对再生神经纤维进行免疫组化染色,然后计数进行统计分析。结果:p75NTR基因敲除小鼠再生的神经纤维,明显较野生型小鼠的短,差异有显著性(pp75NTR可以增强面神经的再生。

关键词： p75神经营养蛋白受体霍乱毒素B 再生小鼠基因敲除